• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    結(jié)締組織生長因子與肝纖維化的研究進展

    2010-12-04 06:55:22肖緒華綜述趙永忠審校
    重慶醫(yī)學(xué) 2010年18期
    關(guān)鍵詞:膠原肝病纖維化

    肖緒華綜述,趙永忠審校

    (桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,廣西桂林541001)

    結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種間質(zhì)細胞的生長因子,具有明顯的絲裂原性和趨化性,可以啟動一系列介導(dǎo)組織創(chuàng)傷修復(fù)和再生的生物學(xué)過程。作為轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的下游反應(yīng)元件,CTGF 介導(dǎo) TGF-β 1 促組織纖維化的效應(yīng),而與TGF-β1抗炎、調(diào)節(jié)免疫等其他生物學(xué)效應(yīng)無明顯相關(guān),因此可能成為抗肝纖維化的更具特異性的靶點,在探索抗纖維化的道路上愈來愈引起大家的關(guān)注。本文就CTGF與肝纖維化的研究進展綜述如下。

    1 CTGF概述

    CTGF最早是在人臍靜脈內(nèi)皮細胞的條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的,它屬于一種即刻早期基因(CTGF Cyr61 Nov,CCN)家族成員之一?,F(xiàn)已證明 CTGF基因位于第 6號染色體長臂(6q 23.1),相對分子量為 36 000~38 000,含 349個氨基酸殘基,是一種C端富含半胱氨酸肝素結(jié)合蛋白的分泌性多肽,廣泛表達于人類心臟、胎盤、肺、肝臟及腎臟等多種組織器官中。大量研究表明,CTGF可由多種類型的細胞產(chǎn)生,如胚胎組織、皮膚、腎小球系膜細胞、腎間質(zhì)細胞、肝及胰腺星狀細胞、血管內(nèi)皮及平滑肌細胞,表達量取決于組織細胞類型及功能狀態(tài)。事實上,CTGF是TGF-β生物學(xué)作用的下游效應(yīng)介質(zhì),它在功能上與TGF-β具有很大的相似性,包括具有有絲分裂原效應(yīng),促使細胞增殖;促進細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的合成,抑制其降解,導(dǎo)致ECM的積聚及結(jié)構(gòu)改建;表達細胞黏附因子使細胞易黏附和結(jié)合基質(zhì)蛋白;具有趨化效應(yīng),在體外能趨化成纖維樣細胞,而這些效應(yīng)都與纖維化密切相關(guān)。相對TGF-β,CTGF的最大特點就是生物學(xué)功能比較單一,主要表現(xiàn)在對纖維化的影響[1]。另外,在對 TGF-β應(yīng)答時CTGF可以調(diào)控關(guān)鍵的細胞事件,包括遷移、增殖、基質(zhì)產(chǎn)生和成纖維細胞收縮、分化成肌成纖維細胞,這些都是纖維化應(yīng)答事件[2]。說明CTGF是重要的促組織纖維化蛋白,在組織纖維化的形成和發(fā)展中起著關(guān)鍵的作用。

    2 CTGF在肝纖維化組織中的表達和作用

    CTGF在正常肝組織中的表達很少,僅在間質(zhì)和肝血管有少量的表達[3]。但在肝纖維化動物模型肝組織及慢性肝病患者肝組織中CTGF mRNA和蛋白質(zhì)表達水平增高,并與肝纖維化程度成正相關(guān)。Li等[4]運用蛋白質(zhì)印跡技術(shù)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法發(fā)現(xiàn),四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型組與對照組相比,CTGF蛋白和基因表達明顯增強。Hsu等[5]采用二甲基亞硝胺(DMA)誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在給予DMA 2~5周后大鼠肝組織中TGF-β1和CTGF mRNA高表達,表達水平隨著肝纖維化程度積分的增加而逐漸升高。Abou-Shady等[6]用Northern印跡雜交(Northern blot)分析顯示,慢性病毒性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)、原因不明的肝病和酒精性肝病等患者的硬化肝臟中CTGF和TGF-β1 mRNA的表達水平與正常人肝臟相比增加了6~8倍。Horac等[7]研究發(fā)現(xiàn)在伴有肝臟脂肪變和纖維化的慢性丙型肝炎患者組織中CTGF的表達明顯增強,并認(rèn)為CTGF是獨立的致肝纖維化因子。Kobayashi等[8]對膽管閉鎖患者手術(shù)切除活檢標(biāo)本進行了原位雜交檢測發(fā)現(xiàn),在膽管閉鎖患者肝組織中CTGF mRNA表達增高,特別是在肝細胞和星狀肝細胞(HSC)中表達明顯,而且表達與病變程度相關(guān)??梢娫诼愿尾』颊呒案卫w維化動物模型肝組織中,CTGF mRNA和蛋白質(zhì)表達水平增高,程度與肝纖維化積分成正相關(guān),但與肝纖維化的類型無關(guān)。

    研究表明,在肝組織中CTGF的主要來源于HSC。Paradis等[9]檢測了原代培養(yǎng) 3 d(靜止?fàn)顟B(tài))、5 d(中間狀態(tài))和 7 d(活化狀態(tài))HSC的CTGF mRNA水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表達隨時間進行性上調(diào),同時Ⅰ型膠原mRNA的表達在第3天和第5天上調(diào)了近12倍,而且Ⅰ型膠原mRNA的表達增長相對滯后。結(jié)果證明HSC不僅能分泌CTGF而且提示CTGF可能對膠原基因表達具有調(diào)控作用。Gressner等[10]在培養(yǎng)的HSC和肝細胞兩種細胞系分別測定CTGF和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)表達,結(jié)果發(fā)現(xiàn)α-SM A在激活HSC中表達升高,而CTGF表達不依賴于細胞激活轉(zhuǎn)化;并同時發(fā)現(xiàn)在被激活的肝細胞中CTGF強烈表達,說明肝細胞也可能參與了CTGF表達。在體內(nèi)實驗中,Tong等[11]通過將人CTGF基因轉(zhuǎn)到大鼠體內(nèi),使其表達CTGF基因和蛋白,通過與非轉(zhuǎn)基因大鼠比較發(fā)現(xiàn),單純的CTGF高表達并不能導(dǎo)致肝功能和肝組織學(xué)變化。但在給予CCl4以后,轉(zhuǎn)基因大鼠無論是血清透明質(zhì)酸水平還是肝組織中α-SM A、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MM P-2)和金屬蛋白酶組織抑制因子-1(TIMP-1)的mRNA表達水平較對照組明顯升高。轉(zhuǎn)基因大鼠在膽總管結(jié)扎2周后也表現(xiàn)出了大量的膠原蛋白沉積。說明體內(nèi)CTGF水平升高不會導(dǎo)致肝損傷或纖維化本身,而是呈現(xiàn)出肝臟更容易受其他致纖維化因素所傷害。這可能是由于CTGF與其他分子如 TGF-β1、纖維連接蛋白相互影響,對這些因子信號傳導(dǎo)起協(xié)同和放大的作用,CTGF的高表達改變了肝組織的微環(huán)境,增加了肝臟對損傷刺激的敏感性。這支持了CTGF在肝纖維化形成過程中的核心作用。

    總之,激活的HSC可產(chǎn)生CTGF,而CTGF又可促進成纖維細胞的增殖、遷移、黏附和ECM的產(chǎn)生,誘導(dǎo)纖維化的產(chǎn)生[12]。CTGF還可能是多種纖維化信號通路下游的共同效應(yīng)因子,在肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用,因此被稱為肝臟疾病中扳動纖維化產(chǎn)生的“總開關(guān)”[13]。

    3 CTGF與肝纖維化的診斷

    肝纖維化主要靠肝組織穿刺活檢診斷,但由于這是一種侵入性檢查而且費用高,因而限制了其廣泛使用,尋找一種良好的肝纖維化血清學(xué)指標(biāo)具有很大的實用價值。大量研究表明CTGF在正常肝組織中僅有少量表達,在肝纖維化時CTGF表達升高且與肝纖維化程度相關(guān)。因由體內(nèi)細胞產(chǎn)生的CTGF可以直接分泌到細胞外間隙,并進入體循環(huán),因此使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血液中CTGF濃度被認(rèn)為是一種診斷和評估纖維化程度的一個良好指標(biāo)[14]。Kovalenko等[15]對138例丙型病毒性肝炎患者和129例慢性肝病患者血清CTGF水平進行了檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)丙型病毒性肝炎患者和慢性肝病患者血清CTGF水平較正常人明顯增高,而且CTGF水平與肝纖維化程度和肝硬化分級有關(guān);且同時發(fā)現(xiàn)CTGF存在多種基因型。Gressner等[16]采用多層免疫分析法檢測了83例慢性肝病患者(包括17例慢性肝炎患者,16例組織學(xué)診斷為肝纖維化患者,50例肝硬化患者)和74例健康人的血清CTGF濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),慢性肝炎組、肝纖維化組和肝硬化組的血清CTGF濃度分別是健康對照組的4.3倍、5.2倍和3.2倍,說明了CTGF與肝纖維化有關(guān);并發(fā)現(xiàn)硬化組的CTGF水平較纖維化組低,認(rèn)為CTGF濃度反映的是纖維化發(fā)展的程度,并非組織硬化程度,因此可作為進展期肝纖維化程度的指標(biāo)。Zhang等[17]也做了類似的研究,而且對患者的肝纖維化程度進行了詳細的分級,用ELISA檢測血清CTGF濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn),健康人和慢性肝炎患者間、不同級別肝纖維化患者之間,CTGF濃度逐漸升高;說明CTGF的濃度不僅與肝纖維化相關(guān)而且隨著肝纖維化程度的加重而升高,提示CTGF可能是診斷和反映肝纖維化程度的良好標(biāo)志物。

    4 干擾CTGF表達與肝纖維化的基因治療

    CTGF作為 TGF-β的下游介質(zhì),是一個比 TGF-β更具特異性的靶位。因此,針對CTGF的治療策略受到廣泛的關(guān)注。多項研究表明,針對CTGF轉(zhuǎn)錄水平的干擾可能是一種有效的抗肝纖維化的治療方法。Zhu等[18]將能在體內(nèi)自主合成短發(fā)夾狀RNA(shRNA)的pEGFP-CTGF表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HSCT6(一種鼠源性激活的HSC株),觀察其對CTGF mRNA及蛋白表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染 pEGFP-CTGF shRNA1的HSC-T6細胞CTGF的表達被干擾,顯著減少Ⅲ型前膠原、Ⅳ型膠原、層黏蛋白(LN)和透明質(zhì)酸(HA)的形成。Li等[19]在HSC培養(yǎng)基中加入抗CTGF的小分子干擾RNA(siRNA),發(fā)現(xiàn)在HSC培養(yǎng)基中抗CTGF的 siRNA高效特異的抑制了CTGF的基因表達,同時發(fā)現(xiàn)α-SMA表達顯著降低。在激活的HSC中Ⅰ型和Ⅲ型膠原的mRNA的表達及上清液中HA濃度均降低。說明siRNA能有效和特異性下調(diào)大鼠HSC的CTGF的表達,顯著抑制HSC的活化和增殖并能有效抑制細胞外基質(zhì)生產(chǎn),應(yīng)用siRNA抑制CTGF基因表達可能是抗肝纖維化治療的一種有效的策略。同時發(fā)現(xiàn)在加入siRNA大鼠原代HSC培養(yǎng)7 d(激活期)后,觀察到HSC G0/G1時相細胞比例明顯增多,表明siRNA沉默CTGF可能是通過誘導(dǎo)細胞周期靜止來抑制大鼠HSC增殖。誘導(dǎo)細胞周期靜止可能是siRNA沉默CTGF抑制大鼠HSC增殖的機制之一。

    在體內(nèi)實驗中,Uchio等[20]用CCl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化的發(fā)生,以反義核苷酸對HSC的CTGF進行RNA干擾,可減少CTGF、TGF-β和Ⅰ型膠原mRNA的表達,而 TIM P-1和纖維沉積的量沒有改變。說明單純降低CTGF的水平雖可抑制肝纖維化的發(fā)生發(fā)展,但由于TIMP-1的持續(xù)高表達,干擾CTGF表達抗纖維化治療的效果受到影響。Li等[4]應(yīng)用門靜脈注射CTGF siRNA的方法對CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型進行治療,結(jié)果發(fā)現(xiàn)siRNA治療組Ⅰ、Ⅲ型膠原,LN、TIMP-1和TGF-β1的基因表達均減弱,活化的 HSC數(shù)量減少,α-SMA表達降低 ,血清中Ⅲ型前膠原、肝羥脯氨酸與肝纖維化程度均降低。George和Tsutsumi[21]發(fā)現(xiàn)在二甲基亞硝胺(DMA)所致的肝纖維化模型中,應(yīng)用CTGF siRNA治療后CTGF以及TGF-β1基因表達減弱,HSC的活化受抑制,肝臟中結(jié)締組織沉積減少。結(jié)果表明CTGF siRNA可以有效的預(yù)防和治療DMA所致的大鼠肝纖維化。

    總之,沉默或干擾CTGF基因表達的方法在體內(nèi)外實驗中均表現(xiàn)出強烈而且特異的抑制ECM沉積的作用,抗CTGF的基因治療做為一種嶄新的抗纖維化手段,給抗纖維化治療帶來了新的思路,具有廣闊的應(yīng)用前景。

    5 展 望

    CTGF是調(diào)控器官纖維化的重要細胞因子,不僅直接調(diào)節(jié)HSC的活化和ECM的產(chǎn)生,而且可能是纖維化信號通路下游的共同效應(yīng)因子,在多種組織器官纖維化中起關(guān)鍵作用。另外,CTGF生物學(xué)作用比其上游控件TGF-β1更單一,主要局限在纖維化的發(fā)生方面。抑制CTGF表達的治療比抗TGF-β1更具針對性,而不影響 TGF-β1的抗炎、免疫抑制等重要生理作用。進一步深入研究CTGF的基因表達調(diào)控、信號傳導(dǎo)通路及致纖維化機制,將有助于探索更特異更有效的抗纖維化治療策略,為控制纖維化疾病帶來嶄新希望,具有重要的臨床意義。

    [1]Kobayashi H,Hayashi N,Hayashi K,et al.Connective tissue growth factor and progressive fibrosis in biliary atresia[J].Pediatr Surg Int,2005,21(1):12.

    [2]Secker GA,Shortt AJ,Sampson E,et al.TGFbeta stimulated re-epithelialisation is regulated by CTGF and Ras/M EK/ERK signaling[J].Exp Cell Res,2008,314(1):131.

    [3]Friederichsen S,Heuer H,Christ S,et al.Gene expression of connective tissue growth factor in adult mouse[J].Growth Factors,2005,23(1):43.

    [4]Li G,Xie Q,Shi Y,et al.Inhibition of connective tissue growth factor by siRNA prevents liver fibrosis in rats[J].J Gene Med,2006,8(7):889.

    [5]Hsu YC,Chiu YT,Lee CY,et al.Increases in fibrosis-related gene transcripts in livers of dimethylnitrosamine-intoxicated rats[J].J Biomed Sci,2004,11(3):408.

    [6]Abou-Shady M,Friess H,Zimmermann A,et al.Connective tissue growth factor in human liver cirrhosis[J].Liver,2000,20(4):296.

    [7]Hora C,Negro F,Leandro G,el al.Connective tissue growth factor,steatosis and fibrosis in patients with chronic hepatitis C[J].Liver Int,2008,28(3):370.

    [8]Kobayashi H,Hayashi N,Hayashi K,el al.Connective tissue growth factor and progressive fibrosis in biliary atresia[J].Pediatr Surg Int,2005,21(1):12.

    [9]Paradis V,Dargere D,Bonvoust F,et al.Effects and regulation of connective tissue growth factor on hepatic stellate cells[J].Lab Invest,2002,82(6):767.

    [10]Gressner OA,Lahme B,Demirci I,et al.Differential effects of TGF-beta on connective tissue growth factor(CTGF/CCN2)expression in hepatic stellate cells and hepatocytes[J].J Hepatol,2007,47(5):699.

    [11]Tong Z,Chen R,Alt DS,et al.Susceptibility to liver fibrosis in mice expressing a connective tissue growth factor transgene in hepatocytes[J].Hepatology,2009,50(3):939.

    [12]Higashiyama H,Yoshimoto D,Kaise T,et al.Inhibition of activin receptor-like kinase 5 attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis[J].Exp Mol Pathol,2007,83(1):39.

    [13]Gressner OA,Gressner AM.Connective tissue growth factor:a fibrogenic master switch in fibrotic liver diseases[J].Liver Int,2008,28(8):1065.

    [14]Leask A,Parapuram SK,Shi-Wen X,et al.Connective tissue growth factor(CTGF,CCN2)gene regulation:a potent clinical bio-marker of fibroproliferative disease?[J].J Cell Commun Signal,2009,3(2):89.

    [15]Kovalenko E,Tacke F,Gressner OA,et al.Validation of connective tissue growth factor(CTGF/CCN2)and its gene polymorphisms as noninvasive biomarkers for the assessment of liver fibrosis[J].J Viral Hepat,2009,16(9):612.

    [16]Gressner AM,Yagmur E,Lahme B,et al.Connective tissue growth factor in serum as a new candidate test for assessment of hepatic fibrosis[J].Clin Chem,2006,52(9):1815.

    [17]Zhang D,Wang NY,Yang CB,et al.The clinical value of serum connective tissue growth factor in the assessment of liver fibrosis[J].Dig Dis Sci,2010,55(3):767.

    [18]Zhu YH,Ren WH,Shi J,et al.Disruption of connective tissue growth factor by short hairpin RNA inhibits collagen synthesis and extracellular matrix secretion in hepatic stellate cells[J].Liver Int,2008,28(5):632.

    [19]Li G,Li D,Xie Q,et al.RNA interfering connective tissue growth factor prevents rat hepatic stellate cell activation and extracellular matrix production[J].J Gene Med,2008,10(9):1039.

    [20]Uchio K,Graham M,Dean NM,et al.Down-regulation of connective tissue growth factor and typeⅠcollagen mRNA expression by connective tissue growth factor antisense oligonucleotide during experimental liver fibrosis[J].Wound Repair Regen,2004,12(1):60.

    [21]George J,Tsutsumi M.siRNA-mediated knockdown of connective tissue growth factor prevents N-nitrosodimethylamine-induced hepatic fibrosis in rats[J].Gene Ther,2007,14(10):790.

    猜你喜歡
    膠原肝病纖維化
    肝纖維化無創(chuàng)診斷研究進展
    傳染病信息(2022年3期)2022-07-15 08:24:28
    非酒精性脂肪性肝病的中醫(yī)治療
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:49:06
    肝纖維化的中醫(yī)藥治療
    肝博士(2021年1期)2021-03-29 02:32:16
    你還在把“肝病” 當(dāng)“胃病”在治嗎?
    肝博士(2020年4期)2020-09-24 09:21:30
    一種基于LBP 特征提取和稀疏表示的肝病識別算法
    膠原無紡布在止血方面的應(yīng)用
    腎纖維化的研究進展
    紅藍光聯(lián)合膠原貼治療面部尋常痤瘡療效觀察
    肝病很復(fù)雜,久患肝病未必成良醫(yī)
    肝博士(2015年2期)2015-02-27 10:49:42
    中西醫(yī)結(jié)合治療慢性乙型肝炎肝纖維化66例
    很黄的视频免费| 亚洲成国产人片在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| a级毛片a级免费在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲精华国产精华精| 日本 av在线| 搞女人的毛片| 婷婷丁香在线五月| 久久久久国内视频| 久久久久久大精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 欧美色欧美亚洲另类二区| 午夜福利免费观看在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久久久国内视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 身体一侧抽搐| 欧美中文综合在线视频| 一本久久中文字幕| 国产精品,欧美在线| 日韩欧美 国产精品| 精品日产1卡2卡| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产伦人伦偷精品视频| 国产私拍福利视频在线观看| 此物有八面人人有两片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品一区二区精品视频观看| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲第一青青草原| 美女免费视频网站| 日韩成人在线观看一区二区三区| 在线播放国产精品三级| tocl精华| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美精品亚洲一区二区| 757午夜福利合集在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 中出人妻视频一区二区| 国产麻豆成人av免费视频| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| av有码第一页| 天堂动漫精品| 制服丝袜大香蕉在线| 日本a在线网址| 日本一本二区三区精品| 国产精品电影一区二区三区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 最好的美女福利视频网| 欧美在线黄色| 亚洲无线在线观看| 欧美色视频一区免费| 国产v大片淫在线免费观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产精品国产高清国产av| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产高清激情床上av| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一夜夜www| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产色视频综合| 99久久综合精品五月天人人| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久99热这里只有精品18| 国产精品九九99| 色播亚洲综合网| 亚洲国产精品成人综合色| 大型av网站在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲五月色婷婷综合| 日韩欧美国产一区二区入口| 88av欧美| 高清毛片免费观看视频网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 看片在线看免费视频| 12—13女人毛片做爰片一| www日本黄色视频网| 亚洲全国av大片| 国产单亲对白刺激| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲国产看品久久| 亚洲自拍偷在线| 国产精品国产高清国产av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 最新美女视频免费是黄的| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 精品无人区乱码1区二区| 高清毛片免费观看视频网站| 久久精品成人免费网站| 又大又爽又粗| 久久久久久久午夜电影| 久久久久久大精品| 成人手机av| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 热99re8久久精品国产| 男女视频在线观看网站免费 | aaaaa片日本免费| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产精品久久电影中文字幕| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久草成人影院| 免费在线观看黄色视频的| 18禁黄网站禁片午夜丰满| cao死你这个sao货| 露出奶头的视频| 99在线人妻在线中文字幕| 久久精品国产清高在天天线| 久久久国产欧美日韩av| 男人舔奶头视频| 自线自在国产av| 亚洲精品国产区一区二| 日韩精品青青久久久久久| 男女下面进入的视频免费午夜 | 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产激情久久老熟女| 国产精品99久久99久久久不卡| 18禁国产床啪视频网站| 精品无人区乱码1区二区| 国产成人精品久久二区二区免费| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91| 18美女黄网站色大片免费观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩欧美国产在线观看| 黄频高清免费视频| 长腿黑丝高跟| 国产主播在线观看一区二区| 宅男免费午夜| 哪里可以看免费的av片| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 美国免费a级毛片| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 18禁美女被吸乳视频| 午夜老司机福利片| 亚洲 欧美一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| 88av欧美| 91av网站免费观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久狼人影院| 搡老岳熟女国产| 亚洲无线在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 热99re8久久精品国产| 亚洲精品av麻豆狂野| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美午夜高清在线| 免费看十八禁软件| 久久热在线av| 国产精品一区二区精品视频观看| av在线播放免费不卡| 岛国视频午夜一区免费看| 一夜夜www| 午夜老司机福利片| 中出人妻视频一区二区| 美国免费a级毛片| 韩国精品一区二区三区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 一区二区三区精品91| 欧美国产日韩亚洲一区| 婷婷亚洲欧美| 精品久久久久久,| 国产精品九九99| 男人的好看免费观看在线视频 | 久久久久久久精品吃奶| xxxwww97欧美| 麻豆一二三区av精品| 亚洲中文字幕日韩| 宅男免费午夜| 香蕉国产在线看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 99re在线观看精品视频| 国产精品av久久久久免费| 女警被强在线播放| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品91无色码中文字幕| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美日韩一级在线毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 黄片大片在线免费观看| 一区二区三区精品91| 桃红色精品国产亚洲av| 久久久国产成人免费| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲免费av在线视频| www.精华液| 精品一区二区三区av网在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 老汉色∧v一级毛片| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久久久国内视频| 成人亚洲精品av一区二区| 人妻久久中文字幕网| 看黄色毛片网站| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| www.自偷自拍.com| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产成人精品久久二区二区免费| 无遮挡黄片免费观看| 国产一区二区在线av高清观看| 十八禁网站免费在线| 欧美一级毛片孕妇| 在线看三级毛片| 亚洲免费av在线视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 十分钟在线观看高清视频www| 美女扒开内裤让男人捅视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 香蕉av资源在线| 亚洲av美国av| 久久久国产精品麻豆| 性色av乱码一区二区三区2| 91国产中文字幕| 禁无遮挡网站| 国产精华一区二区三区| 脱女人内裤的视频| 亚洲 国产 在线| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| 男人操女人黄网站| 高潮久久久久久久久久久不卡| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 美女大奶头视频| 国产精品二区激情视频| 黄片小视频在线播放| 欧美日韩乱码在线| 久久亚洲真实| 麻豆国产av国片精品| 久久久久国内视频| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 欧美激情高清一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www| 首页视频小说图片口味搜索| 757午夜福利合集在线观看| av欧美777| 免费看十八禁软件| 精品午夜福利视频在线观看一区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日本熟妇午夜| 一a级毛片在线观看| 国产高清有码在线观看视频 | 性色av乱码一区二区三区2| 两人在一起打扑克的视频| 色老头精品视频在线观看| 久热这里只有精品99| 久久亚洲真实| www.精华液| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲无线在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 国产99久久九九免费精品| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产一区在线观看成人免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲三区欧美一区| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 日韩欧美在线二视频| 午夜免费成人在线视频| 99精品久久久久人妻精品| 久久国产精品影院| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国内精品久久久久精免费| 美女午夜性视频免费| 欧美日韩一级在线毛片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 午夜免费激情av| av电影中文网址| 亚洲,欧美精品.| www.www免费av| 亚洲一区二区三区色噜噜| 香蕉av资源在线| 禁无遮挡网站| 正在播放国产对白刺激| 色哟哟哟哟哟哟| or卡值多少钱| xxxwww97欧美| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久国产乱子伦精品免费另类| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产精品免费视频内射| 亚洲片人在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产真实乱freesex| 91老司机精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产精品av久久久久免费| 亚洲一区高清亚洲精品| 色老头精品视频在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 男人操女人黄网站| 色综合婷婷激情| 亚洲美女黄片视频| 1024视频免费在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av成人一区二区三| 丁香欧美五月| 69av精品久久久久久| e午夜精品久久久久久久| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲国产看品久久| 精品久久久久久久末码| 亚洲成a人片在线一区二区| 99国产综合亚洲精品| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| netflix在线观看网站| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美一级毛片孕妇| 国产视频一区二区在线看| 他把我摸到了高潮在线观看| 一进一出抽搐动态| www日本在线高清视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产精品久久视频播放| 亚洲午夜理论影院| 国产91精品成人一区二区三区| 精品无人区乱码1区二区| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99热6这里只有精品| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 色播亚洲综合网| 中文在线观看免费www的网站 | 美国免费a级毛片| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 伦理电影免费视频| 在线永久观看黄色视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 香蕉av资源在线| 久久伊人香网站| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品影院久久| 国产亚洲欧美98| 国产av在哪里看| 国产麻豆成人av免费视频| 精品电影一区二区在线| 一进一出抽搐动态| 婷婷精品国产亚洲av在线| 99热6这里只有精品| 嫩草影视91久久| 午夜精品久久久久久毛片777| 999精品在线视频| 大香蕉久久成人网| 久久久久久免费高清国产稀缺| 大香蕉久久成人网| 日本黄色视频三级网站网址| 91国产中文字幕| 精品国产亚洲在线| 一级作爱视频免费观看| 男人舔奶头视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲成人精品中文字幕电影| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲一区中文字幕在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一级a爱视频在线免费观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产乱人伦免费视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 欧美激情久久久久久爽电影| 麻豆av在线久日| 在线观看免费视频日本深夜| 高清毛片免费观看视频网站| 久久香蕉精品热| 十八禁人妻一区二区| 亚洲熟女毛片儿| 国产色视频综合| 久久精品91蜜桃| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | а√天堂www在线а√下载| 一本大道久久a久久精品| 国产伦人伦偷精品视频| 成年版毛片免费区| 午夜免费激情av| 妹子高潮喷水视频| bbb黄色大片| 亚洲精品在线观看二区| 十分钟在线观看高清视频www| 日韩成人在线观看一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 亚洲片人在线观看| 久久热在线av| 久久久久久国产a免费观看| 久久久久久久久中文| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 丁香六月欧美| 亚洲九九香蕉| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 色综合婷婷激情| 国产亚洲欧美在线一区二区| 成人永久免费在线观看视频| 免费搜索国产男女视频| 精品国产亚洲在线| 国产麻豆成人av免费视频| 国产男靠女视频免费网站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 婷婷丁香在线五月| 久久天堂一区二区三区四区| 国产成人av激情在线播放| 久久香蕉国产精品| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产精品免费视频内射| 真人一进一出gif抽搐免费| 91字幕亚洲| 国产日本99.免费观看| 男女那种视频在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲成人免费电影在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 看黄色毛片网站| 亚洲男人天堂网一区| 中出人妻视频一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲黑人精品在线| 香蕉久久夜色| 国产黄a三级三级三级人| 日本三级黄在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美性长视频在线观看| 久久久国产精品麻豆| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美中文综合在线视频| 午夜福利高清视频| 亚洲精华国产精华精| av电影中文网址| av在线天堂中文字幕| 在线观看舔阴道视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产精品永久免费网站| 国产精品久久久av美女十八| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日韩精品青青久久久久久| 人人妻人人澡人人看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 操出白浆在线播放| 好男人电影高清在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 日韩欧美国产一区二区入口| 女警被强在线播放| 99国产极品粉嫩在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 欧美av亚洲av综合av国产av| e午夜精品久久久久久久| 精品久久久久久,| 欧美成人免费av一区二区三区| avwww免费| 伦理电影免费视频| 免费在线观看完整版高清| 午夜免费鲁丝| 哪里可以看免费的av片| 亚洲第一电影网av| 色综合亚洲欧美另类图片| 精品久久蜜臀av无| 村上凉子中文字幕在线| 国产黄色小视频在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲无线在线观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 伦理电影免费视频| 日韩欧美三级三区| 中文字幕最新亚洲高清| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| www.精华液| 欧美激情 高清一区二区三区| 中文字幕久久专区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美日本视频| 免费观看人在逋| 女性被躁到高潮视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 手机成人av网站| av超薄肉色丝袜交足视频| 一本综合久久免费| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 一本综合久久免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 大香蕉久久成人网| 欧美三级亚洲精品| 国产精品久久视频播放| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲九九香蕉| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 男女视频在线观看网站免费 | 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精华国产精华精| 女同久久另类99精品国产91| 欧美黑人巨大hd| 岛国在线观看网站| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美不卡视频在线免费观看 | a级毛片在线看网站| 国产精品1区2区在线观看.| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 18禁国产床啪视频网站| 男女那种视频在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲avbb在线观看| 美女大奶头视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久亚洲精品不卡| 校园春色视频在线观看| 国产成人系列免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲av成人一区二区三| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产高清有码在线观看视频 | 精品欧美一区二区三区在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜老司机福利片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产av又大| 精品电影一区二区在线| x7x7x7水蜜桃| 欧美av亚洲av综合av国产av| 人妻久久中文字幕网| 日韩精品免费视频一区二区三区| svipshipincom国产片| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 日韩有码中文字幕| 午夜a级毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 精品久久久久久久末码| 亚洲真实伦在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| а√天堂www在线а√下载| 亚洲成人久久性| 午夜久久久在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品免费视频内射| 制服诱惑二区| 此物有八面人人有两片| 亚洲成国产人片在线观看| 色在线成人网| xxxwww97欧美| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产高清videossex| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 国产一卡二卡三卡精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲,欧美精品.| 亚洲人成网站高清观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久久水蜜桃国产精品网| 成人欧美大片| 国产av不卡久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| АⅤ资源中文在线天堂| 99国产精品99久久久久| 日本a在线网址| 亚洲精品在线美女| 可以在线观看的亚洲视频| 国产三级在线视频| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜a级毛片| 精品久久久久久成人av| 亚洲av美国av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 叶爱在线成人免费视频播放| 曰老女人黄片| 国产色视频综合| 18禁观看日本| 中出人妻视频一区二区| 免费av毛片视频|