p63、p73在外陰鱗癌中的表達(dá)及臨床意義

胡小青 姚心雨 陳鳳云 羅 兵

p63基因定位于人類染色體3q27～3q29。它廣泛表達(dá)于人類上皮細(xì)胞基底層和生發(fā)層，與鱗癌發(fā)生關(guān)系密切［1］。p73 基因是1997 年由 Kaghad 等［3］首次發(fā)現(xiàn)，定位于人類染色體1p36.2～36.3，曾被認(rèn)為是抑癌基因。但近來研究發(fā)現(xiàn)在肺癌、膀胱癌和卵巢癌中，p73似癌基因。本研究應(yīng)用免疫組化法檢測p63和p73在外陰鱗癌、外陰上皮內(nèi)腫瘤和正常外陰鱗狀上皮中的表達(dá)情況，以探討p63、p73與外陰鱗癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

收集2004年5月至2009年5月本院病理科存檔的外陰鱗癌(vulvar squamous cell carcinomas，VSCC)蠟塊44例，外陰上皮內(nèi)腫瘤(vulvar intraepithelial neoplasia，VIN)蠟塊30例和正常外陰上皮組織蠟塊20例。所有組織石蠟均經(jīng)婦科病理學(xué)醫(yī)生復(fù)核確診。44例VSCC患者年齡為22～81歲，中位年齡55歲，主要位于陰蒂。中線型有23例，側(cè)位型21例。按2009年FIGO標(biāo)準(zhǔn)分期:Ⅰ期10例，Ⅱ期13例，Ⅲ期18例，Ⅳ期3例。組織學(xué)分級:G1級31例，G2級12例，G3級1例。有腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者11例，無腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例?；颊呔唇邮苓^放療、化療及激素治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

鼠抗人p63和p73單克隆抗體均購自中杉金橋生物技術(shù)有限公司。對組織進(jìn)行S-P兩步法免疫組織化學(xué)染色，實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行，并統(tǒng)計(jì)p63和p73表達(dá)與患者年齡、腫瘤位置、手術(shù)病理分期、組織學(xué)分級及腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系。

1.3 結(jié)果評定

p63和p73陽性表達(dá)為細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒。參考文獻(xiàn)［2］，在400倍視野下，選染色均勻的5個視野，計(jì)數(shù)著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分比，取平均值。①以陽性細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)評分，0級:0;1級:＜25%;2級:25% ～50%;3級:＞50%。② 按著色細(xì)胞強(qiáng)弱評分:0級:陰性;1級:弱;2級:中;3級:強(qiáng)。按①、②級數(shù)之和判斷結(jié)果:0～2為“－”，3～4“+”，5～6為“++”。以+ ～++為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)等級資料采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)非等級資料采用fisher’s確切概率法，相關(guān)分析采用Spearman等級相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 p63蛋白在外陰組織中的表達(dá)

在正常外陰中，p63蛋白陽性表達(dá)于外陰鱗狀上皮基底細(xì)胞。在VIN中，p63蛋白主要表達(dá)于異常外陰鱗狀上皮細(xì)胞，而在VSCC中，p63蛋白強(qiáng)表達(dá)于腫瘤細(xì)胞癌巢。從正常外陰—VIN—VSCC，p63蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，各組間存在顯著差異，見表1。

表1 p63蛋白在正常外陰組織、VIN和VSCC中的表達(dá)

2.2 p73蛋白在外陰組織中的表達(dá)

在正常外陰組和VIN中，p73蛋白陽性表達(dá)于外陰鱗狀上皮基底細(xì)胞或異常細(xì)胞核，在VSCC組，p73蛋白強(qiáng)表達(dá)于腫瘤細(xì)胞癌巢。外陰病變程度愈重，p73蛋白陽性表達(dá)率愈高。VIN組與正常外陰組比較，VSCC組與VIN組比較，均有顯著差異(表2)。

2.3 p63、p73蛋白與外陰鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

患者年齡、腫瘤位置和組織學(xué)分級與p63、p73表達(dá)無相關(guān)性(P＞0.05)。隨著手術(shù)病理分期升高，p63蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，Ⅰ、Ⅱ期組織中p63蛋白陽性表達(dá)率與Ⅲ、Ⅳ期組織比較差異有顯著性(P＜0.05);而p73蛋白的表達(dá)與病理分期卻無顯著差異(P＞0.05)。p63、p73蛋白在腹股溝淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異具有顯著性(P ＜0.05)，見表3。

表2 p73蛋白在正常外陰組織、VIN和VSCC中的表達(dá)

表3 p63、p73蛋白表達(dá)與外陰鱗癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系(例，%)

2.4 p63、p73蛋白表達(dá)在外陰鱗癌中相關(guān)性分析

在44例外陰鱗癌中，p63和p73共同陽性表達(dá)占65.9%，p63單獨(dú)陽性表達(dá)占9.1%，p73單獨(dú)陽性表達(dá)占11.4%，兩者均陰性表達(dá)占13.6%。相關(guān)性分析示:p63與 p73 表達(dá)呈正相關(guān)(γ =0.438，P=0.03)，見表4。

表4 外陰鱗癌中p63蛋白與p73蛋白表達(dá)的關(guān)系(例)

3 討論

1998年Schmale等首先報(bào)道p63基因結(jié)構(gòu)位置。通過轉(zhuǎn)錄2個不同的啟動子引發(fā)p63剪接產(chǎn)生兩大類異構(gòu)體:全長型p63異構(gòu)體(TAp63)和短截型p63異構(gòu)體(ΔNp63)。研究發(fā)現(xiàn)p63基因存在10種不同C-端異構(gòu)體，它們分別是 TAp63α 、TAp63β、TAp63γ、TAp63δ、TAp63ε、△N p63α、△N p63β、△N p63γ、△N p63δ和△N p63ε［3］，這些異構(gòu)體具有其自身特有的結(jié)構(gòu)域。

p63蛋白在大多數(shù)鱗癌，其他上皮源性腫瘤，甚至非上皮源性腫瘤中均有表達(dá)［4］，但主要表達(dá)于鱗狀上皮源性的惡性腫瘤［5，6］。本研究結(jié)果顯示:p63僅表達(dá)于正常外陰鱗狀上皮基底層，在外陰鱗癌組織中強(qiáng)陽性表達(dá)于癌巢。p63表達(dá)與患者年齡、腫瘤位置和腫瘤組織學(xué)分級無關(guān)，提示患者個體差異和腫瘤惡性程度不影響p63表達(dá)。隨著外陰病變程度加重，p63蛋白陽性表達(dá)率明顯升高，說明p63可能參與外陰鱗癌形成。p63蛋白在Ⅰ～Ⅱ期腫瘤中表達(dá)陽性率明顯低于Ⅲ～Ⅳ期，兩組差異顯著，而且發(fā)現(xiàn) p63異常表達(dá)與腹股溝淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)，說明p63蛋白與外陰鱗癌發(fā)展密切相關(guān)，p63蛋白可能參與外陰鱗癌惡性演變過程。

p73基因是1997年由Kaghad等首次提出。目前發(fā)現(xiàn)p73包括2個啟動子。第1個啟動子位于第1個外顯子的起始區(qū)，激活以后表達(dá)TAp73。第2個啟動子位于第3內(nèi)含子下游的30 kb處，激活以后表達(dá)N端截?cái)嗟膒73異構(gòu)體統(tǒng)稱為ΔNp73。由于剪切機(jī)制的不同而導(dǎo)致p63基因C末端不同，轉(zhuǎn)錄時會產(chǎn)生多種變異蛋白α、β、γ、δ、ε、ζ、θ、η和η 1。

p73在腫瘤組織中表達(dá)具有組織特異性，p73基因?qū)儆谀[瘤特異性基因。在結(jié)腸癌，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，少突角質(zhì)細(xì)胞瘤和惡性黑色素瘤中存在p73雜合子丟失，認(rèn)為其為抑癌基因［7］。然而肺癌、卵巢癌、乳腺癌等均已發(fā)現(xiàn)p73mRNA過表達(dá)。在外陰正常上皮組織、VIN和VICC中，p73蛋白表達(dá)陽性率逐漸升高。p73在VIN表達(dá)高于外陰正常上皮組織，p73在VICC表達(dá)高于VIN和外陰正常上皮組織，這與O'Nions等［8］研究結(jié)果相似，他認(rèn)為p73基因可能在外陰鱗癌發(fā)生過程中扮演重要作用。在本研究中，p73在腹股溝淋巴轉(zhuǎn)移患者中陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示p73蛋白表達(dá)與外陰鱗癌進(jìn)展有關(guān)。它可能通過對抗p53基因功能或是模擬p53分子行使功能［9］，參與細(xì)胞癌變的過程。

p63和p73不論是在結(jié)構(gòu)還是在功能上都具有許多相似之處。陳洪雷等［10］認(rèn)為在人非小細(xì)胞肺癌中p73與p63之間呈正相關(guān)性，認(rèn)為兩者可能協(xié)同促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。隨著外陰病變發(fā)展，p63和p73表達(dá)陽性率均逐漸增加。在相關(guān)性研究中，兩者之間呈顯著正相關(guān)，表明p63和p73可能協(xié)同促進(jìn)外陰鱗癌的發(fā)生發(fā)展，但作用機(jī)制有待于研究。

［1］董彩紅，敖啟林，馮笑山，等.P63及TβR～Ⅱ蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌及其癌前病變中的表達(dá)及意義〔J〕.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2009，38(3):286.

［2］Lu P，Barad M，Vize PD.Xenopus p63 expression in early ectoderm and neurectoderm〔J〕.Mech Dev，2001，102(1 ～2):275.

［3］Marina Mangiulli，Alessio Valletti，Mariano Francesco Caratozzolo，et al.Identification and functional characterization of two new transcriptional variants of the human p63 gene〔J〕.Nucleic Acids Research，2009，37(18):6092.

［4］Di Como CJ，Urist MJ，Babayan I，et al.p63 expression profiles in human normal and tumor tissues〔J〕.Clin Cancer Res，2002，8(2):494.

［5］Massion PP，Taflan PM，Jamshedur Rahman SM，et al.Significance of p63 amplification and overexpression in lung cancer development and prognosis〔J〕.Cancer Research，2003，63:7113.

［6］Geddert H，Kiel S，Heep HJ，et al.The role of p63 and deltaNp63(p40)protein expression and gene amplification in esophageal carcinogenesis〔J〕.Human Pathology，2003，34:850.

［7］Mohan Adithi，Venkatesan Nalini，Mallikarjuna Kandalam，et al.Expression of p63 and p73 in retinoblastoma:A clinicopathological correlation study〔J〕.Experimental Eye Research，2008，87(4):312.

［8］O'Nions J，Brooks LA，Sullivan A，et al.P73 is over-expressed in vulval cancer principally as the delta 2 isoform〔J〕.Br J Cancer，2001，85(10):1551.

［9］Pozniak C D，Radinovic S，Yang A，et al.An anti-apoptotic role for the p53 family member，p73，during developmental neuron death〔J〕.Science，2000，289:304.

［10］陳洪雷，陳福春，王 敏，等.人非小細(xì)胞肺癌組織p63和 p73的表達(dá)及意義〔J〕.腫瘤防治雜志，2003，10(10):1015.