高效液相色譜法檢測北細(xì)辛藥材不同部位的馬兜鈴酸

楊 純，田德娟，李 季

(青島正大海爾制藥有限公司，山東 青島 266103)

細(xì)辛為常用中藥，臨床用于治療風(fēng)寒頭痛、鼻淵、牙痛、痰飲、咳逆、風(fēng)濕痹痛，為馬兜鈴科細(xì)辛屬植物北細(xì)辛 Asarumheterotropoides Fr.Var.mandshurium(Maxim.)Kitag.、漢城細(xì)辛 Asarum Sieboldii Miq.Var.Seoulense Nakai或華細(xì)辛 Asarum Sieboldii Miq.的干燥全草[1]。其中北細(xì)辛屬遼細(xì)辛的一種，產(chǎn)量大，品質(zhì)好，分布廣，為臨床所常用。目前，我國已批準(zhǔn)的藥物中含有細(xì)辛藥材的約176種。近年來，國內(nèi)外相繼對馬兜鈴酸引起肝、腎損害進(jìn)行了報道[2]，細(xì)辛特別是北細(xì)辛是否含有馬兜鈴酸亦引起了關(guān)注。筆者采用高效液相色譜法[3]分別對北細(xì)辛的不同部位進(jìn)行了馬兜鈴酸A的含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

AE-240型1/10萬分析天平(Metlle公司);FZ 102型微型植物試樣粉碎機(河北中天儀器有限公司);HP 1100型高效液相色譜儀(惠普公司)。馬兜鈴酸A對照品(批號為110746-200204，中國藥品生物制品檢定所);北細(xì)辛藥材(批號為040101，購于青島天源中藥飲片公司);磷酸二氫鈉、乙腈均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鈉(每1 L含磷酸1 mL)-乙腈(60∶40);流速:1.4 mL/min;檢測波長:400 nm;進(jìn)樣量:10μL。理論板數(shù)大于5 000。

2.2 溶液制備

精密稱取干燥至恒重的馬兜鈴酸A對照品0.5 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇100 mL，超聲處理10 min，使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，得0.005 g/L的對照品溶液。按2005年版《中國藥典(一部)》細(xì)辛藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分別取北細(xì)辛藥材地上部分(葉)、地下部分(根)、全草適量，以微型植物試樣粉碎機粉碎，過3號篩(50目)，分別取過篩后粉末1 g，加甲醇-水(3∶1)溶液25 mL，浸泡15 min，超聲處理20 min，濾過，濾液再以0.45μm微孔濾膜濾過，分別得到北細(xì)辛葉、根、全草的供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系及最低檢測限試驗:取馬兜鈴酸A對照品，分別用甲醇配制成質(zhì)量濃度為 0.000 1，0.002，0.004，0.006，0.008 g/L 的對照品溶液，精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為 Y=3 854.7X+1.103，r=0.999 2(n=5)。結(jié)果表明，馬兜鈴酸A進(jìn)樣量在0.001～0.08μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。當(dāng)信噪比為3∶1時，馬兜鈴酸A對照品的最低檢測質(zhì)量濃度為0.001 6 g/L，最低檢測限為0.016μg。

重現(xiàn)性試驗:取北細(xì)辛藥材樣品6份，精密稱定，依法測定。結(jié)果均未檢出馬兜鈴酸A。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，室溫放置，于 0，1，2，3，4 h 時依法測定。結(jié)果馬兜鈴酸A的平均峰面積為20.080 0，RSD=1.5%(n=5)，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

精密度試驗:取質(zhì)量濃度為0.005 g/L的馬兜鈴酸A對照品溶液，進(jìn)樣5次，依法測定。結(jié)果馬兜鈴酸A的平均峰面積為19.768 7，RSD=2.1%(n=5)，表明方法精密度良好。

加樣回收試驗:取已測定不含馬兜鈴酸A的北細(xì)辛全草供試品溶液5份，各取5μL，分別加入0.005 g/L的馬兜鈴酸A對照品溶液5μL，依法測定。結(jié)果見表1。

表1 馬兜鈴酸A加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品檢測

分別取上述供試品溶液和對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算，即得。結(jié)果見圖1?？梢?，各供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液色譜峰相應(yīng)位置上均無峰出現(xiàn)，表明試驗用的北細(xì)辛藥材中均不含有馬兜鈴酸A。

3 討論

馬兜鈴酸是馬兜鈴屬(AristoLochia)植物的主要成分[4]，具有致癌及肝、腎損害的作用，近年來關(guān)于其引起腎臟損害的臨床報道和毒理研究已受到廣泛重視。本試驗結(jié)果表明，北細(xì)辛藥材地上部分、地下部分及全草中均未檢出馬兜鈴酸A，檢測方法的重現(xiàn)性、精密度均良好，馬兜鈴酸A的最低檢測限為0.016μg。因此認(rèn)為，正常使用北細(xì)辛不至于引起肝、腎損害。至于臨床細(xì)辛使用劑量過大時偶有腎臟毒性，這是由其所含的何種成分引起，尚待進(jìn)一步研究。

[1]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:114，185.

[2]魯 靜.馬兜鈴酸相關(guān)中藥材的探討[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2002，3(2):49-50.

[3]張曉明，鄭法雷.馬兜鈴酸引起的腎臟損害[J].國外醫(yī)學(xué)·泌尿系統(tǒng)分冊，2000，20(3):101-103.

[4]英錫相，袁昌魯，曲賢廣，等.11種中藥材及3種中成藥馬兜鈴酸的含量測定[J].遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(5):404.