RP－HPLC法測定婦炎康復(fù)膠囊中橙皮苷含量

蔣 霞，唐德智，楊玉芳(.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，南寧市 5300;.南寧市食品藥品檢驗所，南寧市 53000)

婦炎康復(fù)膠囊為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)中藥第三十五冊)收載品種，含敗醬草、陳皮、薏苡仁、川楝子、柴胡、黃芩、赤芍等7味中藥，具有清熱利濕，化瘀止痛等功效，用于治療濕熱瘀阻所致婦女帶下，色黃質(zhì)黏稠或如豆渣狀，氣臭，少腹、腰骶疼痛，舌暗苔黃膩等癥及慢性盆腔炎見上述證候者。為有效控制該制劑質(zhì)量，確保其臨床療效，在參考其他文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上［1，2］，筆者以處方中主藥陳皮的有效成分橙皮苷為定量控制指標(biāo)，采用反相高效液相色譜法測定其含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

日本島津 LC－2010A HT高效液相色譜儀(包括 LC－2010A紫外檢測器)。LC－Solution色譜數(shù)據(jù)工作站;日本島津UV－1601紫外分光光度計;SB25－12DTS型超聲波清洗器(功率:250 W，頻率:33 kHz)。乙腈為色譜純，磷酸為色譜純，水為超純水。橙皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110721－200211，供含量測定用)。婦炎康復(fù)膠囊(陜西 A藥業(yè)有限公司，批號:071001;吉林 B藥業(yè)有限公司，批號:071227，080102;江西 C藥業(yè)有限公司，批號:20061203、20070601;規(guī)格:每粒裝0.38 g)為市售藥品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:島津 Shim－pack VP－0DS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 0.2% 磷酸(19∶81);檢測波長:283 nm;流速 1.0 mL·min－1;柱溫 30℃;進(jìn)樣量:10 μL 。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取60℃減壓干燥4小時的橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含100 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研細(xì)，取約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理25 min(功率250 W，頻率33 kHz)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性供試品溶液的制備

取不含陳皮的處方，按制備工藝制成缺陳皮的陰性供試品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性供試品溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

分別取對照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。在此條件下陰性供試品對橙皮苷的測定無干擾，而且橙皮苷與其他組分可達(dá)到基線分離，分離度R>1.5。

2.6 線性關(guān)系考察

精密稱取橙皮苷對照品9.86 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為橙皮苷對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液 0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分別置 10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積，以橙皮苷對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:Y=1.792×106X+2.058×104，r=0.999 9。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在0.099～1.775 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 婦炎康復(fù)膠囊HPLC圖 Fig1 HPLC chromatograms of Fuyan Kangfu Capsules

2.7 精密度試驗

精密吸取橙皮苷對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定橙皮苷峰面積，結(jié)果 RSD為0.36%，表明儀器精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

精密吸取新制備的供試品溶液(陜西A藥業(yè)有限公司，批號:071001)，按上述色譜條件，分別于 0、2、4、6、8、10、24 h 進(jìn)樣1次，記錄色譜峰面積，RSD為1.32%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一批號樣品 6份(陜西 A藥業(yè)有限公司，批號:071001)，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，分別測定，計算橙皮苷含量，其平均含量為 0.44 mg/粒，RSD為1.25%(n=6)，說明本文方法有較好的重復(fù)性。

2.10 回收率試驗

精密稱取已知橙皮苷含量(陜西A藥業(yè)有限公司，批號:071001橙皮苷含量0.44 mg/粒)的樣品約0.75 g共6份，分別精密加入一定量的橙皮苷對照品(橙皮苷10.85 mg→50 mL，分別精密加入4 mL)照“2.3”項下方法操作，制備供試品溶液，測定橙皮苷的含量，計算回收率，測定結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)Tab1 Results of recovery rate(n=6)

2.11 樣品含量測定

取5批婦炎康復(fù)膠囊，按“2.3”項下方法制備供試品溶液并按上述色譜條件測定峰面積，按外標(biāo)法計算樣品中橙皮苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 婦炎康復(fù)膠囊的含量測定結(jié)果(n=3)Tab2 Contents of Fuyan kangfu Capsules(n=3)

3 討論

陳皮為婦炎康復(fù)膠囊的組成成分之一，主要含橙皮苷。本實驗參考文獻(xiàn)［3～5］，建立高效液相色譜法測定制劑中橙皮苷含量的定量分析方法，該方法操作簡便，提取完全，雜質(zhì)對分離組分無干擾，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于婦炎康復(fù)膠囊的質(zhì)量控制。取橙皮苷對照品溶液，在紫外分光光度計上于波長200～400 nm處進(jìn)行掃描，結(jié)果在283 nm處有最大吸收，故選擇283 nm為檢測波長。本實驗對樣品分別用甲醇、50%甲醇、70%乙醇進(jìn)行超聲處理 ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇超聲提取較好;為確保樣品中橙皮苷充分提取完全，分別超聲提取 10、15、20、25、30、45 min后進(jìn)樣測定峰面積比較，結(jié)果超聲處理25 min以后橙皮苷峰面積基本不變，故選用超聲處理25 min。筆者比較了甲醇 － 水(25∶75)、乙腈 －0.2%磷酸(19∶81)，甲醇 －0.2%磷酸(45∶55)等 3種流動相，結(jié)果表明:乙腈 －0.2%磷酸比例為(19∶81)時，橙皮苷峰形對稱，分離完全，陰性樣品無干擾，故選用此為流動相。

［1］徐天玲.高效液相色譜法測定婦炎康復(fù)膠囊中芍藥苷的含量［J］.湖北中醫(yī)雜志，2006，28(8):51.

［2］王隸書，嚴(yán)玉清，程東巖.婦炎康復(fù)膠囊中芍藥苷的HPLC 測定［J］.中國藥師，2004，7(9):698.

［3］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)［S］.2005年版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005:132.

［4］王舉濤，陳 明，劉叢彬，等.HPLC測定養(yǎng)胃舒軟膠囊中橙皮苷的含量［J］.中成藥，2008，30(2):309.

［5］付梅紅，方 婧，楊 樺，等.郁樞達(dá)片中橙皮苷的含量測定［J］.中國中藥雜志，2007，32(24):2 671.