不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP、ET-1和NOS表達(dá)的影響

李悠悠，陳圣鋒，王友華，田振軍

不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP、ET-1和NOS表達(dá)的影響

李悠悠，陳圣鋒，王友華，田振軍

目的：探討運(yùn)動(dòng)對大鼠冠狀動(dòng)脈降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）、內(nèi)皮素（ET-1）和一氧化氮合酶（NOS）表達(dá)的影響。方法：健康雄性SD3月齡大鼠24只，分為安靜對照組、小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組，運(yùn)動(dòng)組采用大鼠跑臺運(yùn)動(dòng)方式，建立大鼠不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)模型，運(yùn)用免疫組織化學(xué)SABC法研究不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)對大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP、ET-1、神經(jīng)型一氧化氮合酶（nNOS）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）和內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）表達(dá)的影響。結(jié)果：與安靜對照組比較，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組CGRP、nNOS、iNOS和eNOS均顯著性升高，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組ET-1顯著降低，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組ET-1顯著性升高。與小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組比較，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組CGRP、ET-1、nNOS、iNOS和eNOS的表達(dá)變化均有顯著性差異。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組ET-1/CGRP和ET-1/NOS比值均低于安靜對照組。結(jié)論：運(yùn)動(dòng)可引起大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP、ET-1及NOS的表達(dá)變化，且與運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度關(guān)系密切。因此認(rèn)為，不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)引起ET-1/CGRP和ET-1/NOS比值的變化可能是運(yùn)動(dòng)引起心血管生物功能改變的因素之一。

運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練；冠狀動(dòng)脈；降鈣素基因相關(guān)肽；免疫組織化學(xué)；血管內(nèi)皮細(xì)胞

冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能重塑決定著心臟的供血狀況。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）及梗塞可直接引起心肌缺血或?qū)е滦募」Ｋ繹1-2]，是心源性猝死的主要原因[3-4]，其病理機(jī)制主要通過機(jī)械刺激、高血脂、高血糖以及內(nèi)分泌等因素導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）增殖和血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cell，VEC）功能紊亂[5-6]；循環(huán)系統(tǒng)和冠狀動(dòng)脈局部VSMC和VEC可分泌CGRP、ET-1和NOS并可通過內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌等途徑作用于VSMC和VEC，引起冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能的重塑。CGRP可拮抗ET-1引起的VSMC增殖和縮血管效應(yīng)，防止冠狀動(dòng)脈增厚，保護(hù)血管損傷[7-8]，而NO可抑制VSMC增殖和冠狀動(dòng)脈舒張反應(yīng)[9]。目前，關(guān)于病理?xiàng)l件下冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能變化及其機(jī)制研究報(bào)道較多[10-11]。有關(guān)生活方式干預(yù)重塑冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能的研究，已引起學(xué)者的高度關(guān)注[12]，但生活方式干預(yù)包括運(yùn)動(dòng)鍛煉時(shí)間、強(qiáng)度及其重塑冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能的機(jī)制研究報(bào)道尚少見。積極探討運(yùn)動(dòng)鍛煉干預(yù)引起冠狀動(dòng)脈CGRP、ET-1和NOS的研究將對運(yùn)動(dòng)重塑冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)與功能提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 研究對象與方法

1.1 動(dòng)物分組與運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練

健康雄性SD大鼠24只（3月齡，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自陜西省中醫(yī)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量合格證號：陜醫(yī)動(dòng)證字07-004號），體重（246.8±3.4）g，國家標(biāo)準(zhǔn)嚙類動(dòng)物飼料常規(guī)分籠喂養(yǎng)每籠4只，自由飲食，動(dòng)物室內(nèi)溫度為17℃～23℃，相對濕度為（40～60）%。隨機(jī)分為正常對照組，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組，每組8只。對照組正?；\內(nèi)喂養(yǎng)，不運(yùn)動(dòng)。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組采用遞增強(qiáng)度方式進(jìn)行跑臺運(yùn)動(dòng)（采用杭州段氏專用大鼠電動(dòng)鼠籠跑臺），運(yùn)動(dòng)負(fù)荷參照Bedford的研究進(jìn)行[13]。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組訓(xùn)練5 d/wk，共持續(xù)訓(xùn)練8wk。起始速度為15 m/min，持續(xù)時(shí)間為20 min。遞增速度為3 m/min、遞增時(shí)間為5 min，運(yùn)動(dòng)至速度為20 m/min時(shí)，增加跑臺坡度5%，總時(shí)間為60 min。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組訓(xùn)練6 d/wk，共持續(xù)訓(xùn)練8wk。遞增速度為3 m/min、遞增時(shí)間為5 min，運(yùn)動(dòng)至速度為35 m/min時(shí)，增加跑臺坡度10°，總時(shí)間為60 min。整個(gè)訓(xùn)練過程可用電刺激來強(qiáng)迫大鼠進(jìn)行跑臺訓(xùn)練（電刺激<1 mA）。

1.2 取材、樣本制備與免疫組化實(shí)驗(yàn)

20%烏拉坦腹腔麻醉，迅速開胸摘取心臟后迅速在冷生理鹽水中涮洗淤血，中性甲醛液固定，石蠟包埋，切片（厚5.0 μm，切片機(jī)為RM2126，德國LEICA公司），常規(guī)脫蠟至水后用于免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。

免疫組化實(shí)驗(yàn)采用SABC法，按照試劑盒說明書操作步驟進(jìn)行。切片用去離子水沖洗，3%H2O2封閉，經(jīng)微波抗原修復(fù)15 min，PBS沖洗，加生物素封閉液A 10 min，滴加正常非免疫血清，滴加一抗（CGRP、ET-1、eNOS、nNOS和iNOS均為1∶100，兔抗小鼠、大鼠、人多克隆抗體，博士德公司），4℃過夜，復(fù)溫，PBS沖洗，滴加二抗，PBS沖洗，滴加SABC，Tween、PBS液洗2 h，DAB顯色，常規(guī)脫水透明，封片。每次染色設(shè)陰性對照，PBS取代一抗。

1.3 數(shù)據(jù)采集與分析

采用BX51 Olympus光學(xué)顯微鏡拍照，運(yùn)用低倍與高倍相結(jié)合的辦法，低倍選準(zhǔn)位置（選擇左、右心室游離壁心外膜下的心室肌淺層冠狀動(dòng)脈橫切處），高倍觀察并拍照，采用Olympus顯微圖像分析系統(tǒng)，手工選取冠狀動(dòng)脈橫切面并測定其平均光密度值（Mean optical density，MOD），MOD值越大表明陽性表達(dá)越強(qiáng)。結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，所有數(shù)據(jù)采用SPSS軟件分析，組間比較采用單因素方差分析（One-Way，ANOVA）。顯著性差異選擇P<0.05和P<0.01水平。

2結(jié) 果

2.1 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP與ET-1表達(dá)的變化

光鏡下觀察到冠狀動(dòng)脈VEC和VSMC胞漿陽性顆粒呈棕色或棕黃色。與安靜對照組比較，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組CGRP的MOD值均顯著性升高；ET-1的MOD值小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組顯著性降低，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組顯著性升高。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組CGRP和ET-1的表達(dá)變化與小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組比較，均有顯著性差異。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組ET-1/CGRP比值均小于安靜對照組（見圖1、圖2、表1）。

圖1 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP的表達(dá)，×400Figure 1 Expression of the CGRP in exercise training rat coronary artery，×400

圖2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈ET-1的表達(dá)，×400Figure 2 Expression of the ET-1 in exercise training rat coronary artery，×400

表1 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP和ET-1表達(dá)及ET-（1M/COGDR，Pn=比8）Table 1 The compa值ris變on化 o的f C比G較RP and ET-1 express and ET-1/CGRP ratio changes on exercise training rats coronary artery

2.2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈NOS表達(dá)的變化

光鏡下觀察到冠狀動(dòng)脈VEC和VSMC胞漿陽性顆粒呈棕色或棕黃色。與安靜對照組比較，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組NOS的MOD值均顯著性增加，但iNOS和eNOS的MOD值比nNOS表達(dá)的增加趨勢更顯著。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組NOS的表達(dá)變化與小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組比較，均有顯著性差異。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組和大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)組ET-1/NOS低于安靜對照組（見圖3-圖5、表2）。

圖3 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈nNOS的表達(dá)，×400Figure 3 Expression of the nNOS in exercise training rat coronary artery，×400

圖4 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈iNOS的表達(dá)，×400Figure 4 Expression of the iNOS in exercise training rat coronary artery，×400

圖5 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈eNOS的表達(dá)，×400Figure 5 Expression of the eNOS in exercise training rat coronary artery，×400

表2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練大鼠冠狀動(dòng)脈NOS表達(dá)和ET-1/NOS比（M值O變D，化n=的8）Table 1 The comparison比 of較 3 NOS isoforms express and ET-1/NOS ratio changes on exercise training rats coronary artery

3 分析與討論

3.1 運(yùn)動(dòng)引起冠狀動(dòng)脈CGRP和ET-1表達(dá)變化分析

CGRP是目前已知的最強(qiáng)的舒血管物質(zhì)之一，對心血管系統(tǒng)起著重要的生理調(diào)節(jié)作用。CGPR的結(jié)合位點(diǎn)幾乎全集中于血管內(nèi)層，具有強(qiáng)大的擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈作用，其舒張血管作用不完全依賴于VEC的完整性。CGRP可刺激VEC增殖進(jìn)而促進(jìn)血管修復(fù)，對VSMC增殖有抑制作用并可使VSMC從合成表型向收縮表型轉(zhuǎn)化[14]，對改善病變冠脈有重要意義。運(yùn)動(dòng)對機(jī)體CGRP影響的報(bào)道目前多集中于骨骼肌和脊髓背根神經(jīng)節(jié)，關(guān)于運(yùn)動(dòng)對冠狀動(dòng)脈CGRP影響的報(bào)道少見。運(yùn)動(dòng)是影響機(jī)體CGRP釋放的主要因素之一[15]，健康人在運(yùn)動(dòng)時(shí)血漿CGRP水平升高，對冠脈循環(huán)改善起重要調(diào)節(jié)作用[16]，因此認(rèn)為，運(yùn)動(dòng)可以升高CGRP擴(kuò)張血管、緩解AS時(shí)血管彈性降低和心肌供血減少的狀況。目前認(rèn)為，CGRP對冠脈擴(kuò)張作用的可能機(jī)制為直接擴(kuò)張作用，或通過激活VSMC上K+-ATP通道來實(shí)現(xiàn)，或通過胞內(nèi)cAMP介導(dǎo)，或與CGRP維持細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度穩(wěn)定而降低細(xì)胞膜Ca2+通透性[17-18]。本文實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP的表達(dá)顯著升高，提示小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)通過加快血流刺激冠脈VEC促進(jìn)CGRP的釋放，引起冠脈擴(kuò)張從而保證心臟血供；而大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠CGRP的降低可能是因?yàn)榇髲?qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)損傷所致。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可以導(dǎo)致機(jī)體ET-1分泌增加[19]，在一定程度上反饋抑制了CGRP的釋放；另外，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致機(jī)體兒茶酚胺增加，也可抑制CGRP的分泌[20]。因此認(rèn)為小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)改善心功能與冠狀動(dòng)脈CGRP表達(dá)增加有關(guān)。

運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對冠狀動(dòng)脈ET-1表達(dá)的影響已有不少文獻(xiàn)報(bào)道，ET-1是目前最強(qiáng)的冠脈收縮物質(zhì)，可促進(jìn)冠脈VSMC的增殖和遷移，調(diào)制該進(jìn)程有可能引發(fā)AS。運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可減弱冠脈VSMC的表型變化。Jones等證實(shí)，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可降低冠脈VSMC對ET-1的敏感性[21]。Wamhoff等報(bào)道，16～20周的跑臺耐力訓(xùn)練后，冠脈VSMC對促有絲分裂劑誘導(dǎo)的表型變化敏感性降低，其機(jī)制可能是運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練通過SERCA途徑，增強(qiáng)核Ca2+的調(diào)控[22]。VEC是合成和釋放ET-1的主要部位[23]，在AS斑塊中ET-1水平呈顯著性升高[7]。因此，ET-1升高被認(rèn)為是VEC受損的重要指標(biāo)，VEC功能異常又是AS形成的早期表現(xiàn)。已有實(shí)驗(yàn)表明，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練可增強(qiáng)VEC的功能[24]；對冠心病患者進(jìn)行12周的康復(fù)運(yùn)動(dòng)后，發(fā)現(xiàn)ET-1水平明顯下降[25]，推測ET-1水平的下降可能是運(yùn)動(dòng)阻止冠狀動(dòng)脈病理形成和減輕病變嚴(yán)重程度的機(jī)理之一。適宜的運(yùn)動(dòng)可控制VEC對ET-1的合成和釋放，從而降低ET-1水平，這可能是運(yùn)動(dòng)對心血管系統(tǒng)產(chǎn)生有益影響的生理學(xué)基礎(chǔ)。而過度訓(xùn)練可使血漿ET-1水平升高，此時(shí)VEC釋放大量ET-1引起血管收縮，甚至使VEC增生[26]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠冠狀動(dòng)脈ET-1顯著降低，而大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)使ET-1顯著升高，進(jìn)一步證實(shí)了上述觀點(diǎn)。

ET-1與CGRP對血管有強(qiáng)烈持久的相互拮抗效應(yīng)，CGRP濃度降低時(shí)ET-1則上升引起血管收縮，而ET-1降低時(shí)CGRP升高導(dǎo)致血管擴(kuò)張。研究表明，CGRP能抑制病理?xiàng)l件下ET-1的大量釋放，但不影響血漿ET-1的基礎(chǔ)含量及離體血管條ET-1的基礎(chǔ)釋放。表明CGRP對心血管疾病的治療作用可能與它拮抗ET-1的生物效應(yīng)有關(guān)。運(yùn)動(dòng)應(yīng)激可增加冠狀動(dòng)脈CGRP合成與釋放[16]，推測增加的CGRP可拮抗ET-1縮血管效應(yīng)，對冠脈疾病起到一定保護(hù)作用。ET-1/CGRP的比值對血管舒/縮的調(diào)節(jié)起重要作用[27]。本文實(shí)驗(yàn)表明，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠ET-1/CGRP的比值降低；大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)較小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)ET-1/CGRP的比值升高。提示，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)升高血壓，刺激CGRP的合成與釋放增加，抑制ET-1的大量釋放，從而拮抗ET-1的縮血管效應(yīng)，對冠狀動(dòng)脈產(chǎn)生保護(hù)作用。

3.2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練引起冠狀動(dòng)脈NOS表達(dá)變化分析

研究表明，NO可維持血管舒張，影響血管重塑，對防止心血管疾病起重要作用[28]。NOS是NO合成唯一的限速酶，NOS活性可間接反映NO的生成情況。運(yùn)動(dòng)增加冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張作用，主要是通過增加eNOS表達(dá)水平和NO合成量實(shí)現(xiàn)的[29]。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可增加血管壁面切應(yīng)力，誘導(dǎo)eNOS表達(dá)上調(diào)，從而增加VEC的NO產(chǎn)量和（或）提高VSMC的NO生物利用度，繼而發(fā)揮其保護(hù)心血管作用[30]。我們前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后大鼠胸主動(dòng)脈eNOS的表達(dá)顯著性增加[31]，此結(jié)果在冠狀動(dòng)脈中也得到證實(shí)。提示，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)使血管nNOS和eNOS活性增強(qiáng)，NO合成量增加，促進(jìn)內(nèi)皮依賴性的舒張反應(yīng)是運(yùn)動(dòng)抵抗多種心血管疾病的機(jī)制之一。NO適量合成對機(jī)體產(chǎn)生有益的影響，但大量的NO合成不僅會引起強(qiáng)烈的血管舒張，導(dǎo)致血壓降低而抑制心臟功能，還會產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用。研究表明，NO分泌與管壁切應(yīng)力有關(guān)，運(yùn)動(dòng)使管壁切應(yīng)力增大，激活了VEC表面的機(jī)械性感受器，使NOS活性增強(qiáng)，產(chǎn)生更多NO[32]。iNOS一旦被誘導(dǎo)合成即可持續(xù)產(chǎn)生大量NO，直至底物耗竭，在L-Arg不足時(shí)，NOS生成超氧離子損害VEC，引起AS的發(fā)生與發(fā)展。另外，ET-1大量增加除了引起血管收縮外，還可通過作用于ET-R激活NOS，導(dǎo)致NO合成增加[33]。本文實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠冠狀動(dòng)脈NOS表達(dá)均顯著性增加，且iNOS和eNOS增加幅度更大，推測小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)刺激NOS的表達(dá)對機(jī)體產(chǎn)生良好影響；大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可誘導(dǎo)冠狀動(dòng)脈VEC產(chǎn)生過量的NOS，進(jìn)而產(chǎn)生大量氮自由基，引起VEC損傷和VSMC增殖，可能是大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)引起心血管功能降低的生物學(xué)因素之一。

研究證明，AS形成過程中始終存在ET-1/NOS平衡失調(diào)，ET-1/NOS比值升高在AS的形成及發(fā)展中十分重要[34]。本文研究發(fā)現(xiàn)，小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠冠狀動(dòng)脈的ET-1/NOS比值降低，推測可能是通過減少NO的降解和合成抑制，并通過抑制ET-1合成、釋放以及釋放后的作用等機(jī)制，導(dǎo)致ET-1/NOS比值下調(diào)，從而達(dá)到保護(hù)內(nèi)皮功能而表現(xiàn)為抗AS作用；大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)大鼠冠狀動(dòng)脈ET-1/NOS的比值上調(diào)，內(nèi)皮功能紊亂，可能是引起心血管功能降低的生物學(xué)因素之一。

4結(jié) 語

運(yùn)動(dòng)可引起大鼠冠狀動(dòng)脈CGRP、ET-1及NOS表達(dá)發(fā)生變化，且與運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度關(guān)系密切；小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可使冠狀動(dòng)脈CGRP和NOS表達(dá)適度增加且抑制ET-1的表達(dá)；大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致大鼠冠狀動(dòng)脈ET-1和NOS過量表達(dá)，且抑制CGRP的釋放；不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)引起ET-1/CGRP與ET-1/NOS的比值變化是運(yùn)動(dòng)引起心血管生物功能改變的因素之一。小強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可以舒張血管，對高血壓和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病危險(xiǎn)因素具有積極的預(yù)防和治療作用。

[1]Elhendy A，Chapman S，Porter T R，et al.Association of myocardialischemia with mortality and implantable cardioverter defibrillator therapy in patients with coronaryarterydisease at risk ofarrhythmic death[J].J Am Coll Cardiol，2005，46（9）:1 727-1 728.

[2]Hansson G K.Inflammation，atherosclerosis，and coronary artery disease [J].N Engl J Med，2005，352（16）:1 685-1 695.

[3]Solomon SD，Zelenkofske S，McMurrayJ J，et al.Sudden death in patients with myocardial infarction and left ventricular dysfunction，heart failure，or both[J].N Engl J Med，2005，352（25）:2581-2588.

[4]Huikuri H V，Castellanos A，Myerburg RJ.Sudden death due to cardiac arrhythmias[J].N Engl J Med，2001，345（20）:1 473-1 482.

[5]Magnone M，Bruzzone S，Guida L，et al.Abscisic acid released byhuman monocytes activates monocytes and vascular smooth muscle cell responses involved in atherogenesis[J].J Biol Chem，2009，284（26）:17 808-17 818.

[6]Landmesser U，Hornig B，Drexler H.Endothelial Function:A Critical Determinant in Atherosclerosis[J].Circulation.2004，109（21 Suppl 1）: II27-II33.

[7]Little P J，Ivey M E，Osman N.Endothelin-1 actions on vascular smooth muscle cell functions as a target for the prevention of atherosclerosis[J]. Curr Vasc Pharmacol，2008，6（3）:195-203.

[8]Parlapiano C，Paoletti V，Campana E，et al.CGRP and ET-1 plasma levels in normal subjects[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci，1999，3（3）: 139-141.

[9]Kapadia M R，Eng J W，Jiang Q，et al.Nitric oxide regulates the 26S proteasome in vascular smooth muscle cells[J].Nitric Oxide，2009，20（4）:279-288.

[10]Schoenhagen P，Tuzcu E M，Apperson-Hansen C，et al.Determinants of arterial wall remodelingduringlipid-loweringtherapy:serial intravascular ultrasound observations from the Reversal of Atherosclerosis with Aggressive Lipid Lowering Therapy（REVERSAL）trial[J].Circulation，2006，113（24）:2 826-2 834.

[11]Okazaki S，Yokoyama T，Miyauchi K，et al.Early statin treatment in patients with acute coronary syndrome:demonstration of the beneficial effect on atherosclerotic lesions by serial volumetric intravascular ultrasound analysis during half a year after coronary event:the Establsh Study[J].Circulation，2004，110（9）:1 061-1 068.

[12]Mente A，de Koning L，Shannon H S，et al.A systematic review of the evidence supporting a causal link between dietary factors and coronary heart disease[J].Arch Intern Med，2009，169（7）:659-669.

[13]BedfordTG，TiptonCM，WilsonNC，etal.Maximumoxygenconsumption ofrats and its changes with various experimental procedures[J].Journal of Applied Physiology，1979，47（6）:1278-1283.

[14]WangW，Sun W，WangX.Intramuscular gene transfer ofCGRP inhibits neointimal hyperplasia after balloon injury in the rat abdominal aorta[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol，2004，287（4）:H1 582-H1 589.

[15]Hasbak P，Lundby C，Olsen NV，et al.Calcitonin gene-related peptide and adrenomedullin release in humans:effects of exercise and hypoxia[J]. Regul Pept，2002，108（2-3）:89-95.

[16]Gazzieri D，Trevisani M，Tarantini F，et al.Ethanol dilates coronary arteries and increases coronary flow via transient receptor potential vanilloid 1 and calcitonin gene-related peptide[J].Cardiovasc Res，2006，70（3）:589-599.

[17]Wellman G C，Quayle J M，Standen N B.ATP-sensitive K+channel activation by calcitonin gene-related peptide and protein kinase A in pig coronary arterial smooth muscle [J].J Physiol，1998，507（Pt1）: 117-129.

[18]Sheykhzade M，Berg Nyborg N C.Mechanism of CGRP-induced relaxation in rat intramural coronary arteries[J].Br J Pharmacol，2001，132（6）:1 235-1 246.

[19]Ahlbory G，Eddie W，Jan L，et al.Metabolic and vascular effects of circulatingendothelin-1 duringmoderatelyheavyprolonged exercise[J].J Appl Physiol，1995，78（6）:294-300.

[20]Brain S D，Grant A D.Vascular actions of calcitonin gene-related peptide and adrenomedullin[J].Physiol Rev，2004，84（3）:903-934.

[21]Jones A W，Rubin L J，Magliola L.Endothelin-1 sensitivity of porcine coronary arteries is reduced by exercise training and is gender dependent[J].J Appl Physiol，1999，87（3）:1 172-1 177.

[22]Wamhoff B R，Bowles D K，Dietz N J，et al.Exercise training attenuates coronarysmoothmusclephenotypicmodulationandnuclearCa2+signaling[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol，2002，283（6）:H2397-H2410.

[23]Shah R.Endothelins in health and disease[J].Eur J Intern Med，2007，18（4）:272-282.

[24]Clarkson P，Montgomery H E，Mullen M J，et al.Exercise training enhances endothelial function in young men[J].J Am Coll Cardiol，1999，33（5）:1 379-1 385.

[25]郭蘭，李河，孫家珍，等.冠脈重建術(shù)后患者康復(fù)運(yùn)動(dòng)對ET-1、NO和CGRP的影響[J].心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2003，12（2）:586-588.

[26]Allevard A M，Gauquelin G，Gharib C.Endothelin and atrial natriuretic peptide after exercise performed until exhaustion in the rat[J].Life Sci，1991，49（24）:1 803-1 808.

[27]Wang Y，Wang D H.Prevention of endothelin-1-induced increases in blood pressure:role of endogenous CGRP[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2004，287（4）:H1 868-H1 874.

[28]Rudic RD，Shesely E G，Maeda N，et al.Direct evidence for the importance ofendothelium-derived nitric oxide in vascular remodeling[J]. J Clin Invest，1998，101（4）:731-736.

[29]Duncker DJ，BacheRJ.Regulation ofcoronaryblood flowduringexercise [J].Physiol Rev，2008，88（3）:1009-1086.

[30]Higashi Y，Yoshizumi M.Exercise and endothelial function:role of endothelium-derived nitric oxide and oxidative stress in healthy subjects and hypertensive patients[J].Pharmacol Ther，2004，102（1）:87-96.

[31]田振軍，吳瀟男.運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對大鼠主動(dòng)脈一氧化氮合酶及細(xì)胞凋亡的影響[J].天津體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22（1）:6-8.

[32]Díez J，F(xiàn)ortu觡o M A，Zalba G，et al.Altered regulation of smooth muscle cell proliferation and apoptosis in small arteries of spontaneously hypertensive rats[J].Eur Heart J，1998，19:G29-G33.

[33]DonatoAJ，GanoLB，Eskurza I，et al.Vascular Endothelial Dysfunction with Aging:Endothelin-1 and EndothelialNitricOxideSynthase[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2009，297（1）:H425-H432.

[34]Tousoulis D，B觟ger R H，Antoniades C，et al.Mechanisms of disease: L-arginine in coronary atherosclerosis-a clinical perspective[J].Nat Clin Pract Cardiovasc Med，2007，4（5）:274-283.

Effect of Different Exercise Intensity on Expression of CGRP,ET-1 and NOS in the Coronary Artery of Rats

LI Youyou,CHEN Shengfeng,WANG Youhua,TIAN Zhenjun
(School of PE,Shaanxi Normal University,Xi'an 710062,China)

Objective:To discuss the effect of different exercise intensity on expressions of calcitonin gene-related peptide(CGRP),endothelin-1(ET-1)and nitric oxide synthase(NOS)in the rat coronary artery.Methods:Healthy 3-month male SD rats(n=24)were divided into the control group,small-intensity exercise group and high-intensity exercise group.Exercise group used treadmill exercise to establish the models of small-intensity exercise group and the high-intensity exercise group rats.Immunohistochemistry of SABC was used to measure different exercise intensity of coronary artery CGRP,ET-1,nNOS, iNOS,and eNOS expression of rats.Results:Comparing with the control group,the expressions of CGRP and NOS isoforms in the small-intensity exercise group and the high-intensity exercise group increased significantly,ET-1 expression reduced obviously in the small-intensity exercise group,the ET-1 level of the high-intensity exercise group considerably elevated.The change of the coronary artery CGRP,ET-1and NOS expression in the high-intensity exercise group compared with the small-intensity exercise group were significant.The rate of ET-1/CGRP and ET-1/NOS in the groups of small-intensity and high-intensity exercise were lower than the control group.Conclusions:Exercise can induce expression change of CGRP,ET-1 and NOS isoforms in coronary artery,and the close relationship with exercise intensity.Therefore the exercise training causes the ET-1/CGRP ratio and ET-1/NOS ratio change is one of the factors that exercise-induced the cardiovascular biological function change.

exercise training;coronary artery;calcitonin gene-related peptide;immunohistochemistry;vascular endothelial cells

G 804.4

A

1005-0000（2010）01-0041-04

2009-07-01；

2009-11-18；錄用日期：2009-11-19

教育部博士學(xué)科點(diǎn)基金（項(xiàng)目編號：20050718011）；陜西師范大學(xué)“211工程”重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科——運(yùn)動(dòng)生物學(xué)重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目。

李悠悠（1987-），女，河南焦作人，陜西師范大學(xué)在讀碩士研究生。通訊作者：田振軍（1965-），男，陜西綏德人，陜西師范大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師。

陜西師范大學(xué)體育學(xué)院，西安710062。