• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低場核磁共振研究pH值對兔肌球蛋白熱凝膠特性的影響

    2010-10-28 07:06:14徐幸蓮
    食品科學(xué) 2010年9期
    關(guān)鍵詞:等電點(diǎn)網(wǎng)孔肌球蛋白

    吳 燁,許 柯,徐幸蓮*,牛 蕾

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部肉品加工與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 南京 210095)

    低場核磁共振研究pH值對兔肌球蛋白熱凝膠特性的影響

    吳 燁,許 柯,徐幸蓮*,牛 蕾

    (南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 教育部肉品加工與質(zhì)量控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇 南京 210095)

    研究pH值對兔骨骼肌肌球蛋白熱誘導(dǎo)凝膠保水性以及水分移動性的影響。運(yùn)用低場核磁共振測定肌球蛋白凝膠中水的T2弛豫時間,同時測量保水性和硬度并觀察凝膠超微結(jié)構(gòu)。核磁共振結(jié)果擬合后發(fā)現(xiàn),對應(yīng)不可移動水和自由水的T22和T23弛豫時間隨著pH值升高而降低,說明水分的移動性隨著肌球蛋白所帶負(fù)電荷數(shù)目增加而減弱;主成分分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),T22和T23弛豫時間與保水性、硬度和凝膠孔徑有較強(qiáng)的相關(guān)性;位于等電點(diǎn)附近的樣品在樣品評分圖上與其他樣品有顯著不同。肌球蛋白的蛋白質(zhì)分子表面電荷數(shù)量和分布影響了蛋白質(zhì)分子卷曲和伸展的情況,對最終凝膠保水性、硬度和網(wǎng)孔直徑有很大影響,而T2弛豫時間則能很好的反映這種變化趨勢。

    肌球蛋白;凝膠;低場核磁共振;p H值;保水性

    肌球蛋白約占肌原纖維蛋白質(zhì)量的50%,是具有重要生物學(xué)功能的鹽溶性蛋白質(zhì)。其熱誘導(dǎo)凝膠機(jī)制與肉制品的多汁性和質(zhì)地有著密不可分的聯(lián)系[1]。熱誘導(dǎo)凝膠的過程是一個復(fù)雜的物理化學(xué)變化過程,其最終結(jié)果是形成了穩(wěn)定的三維網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu),使得水分和其他食品成分填充于其中,并使產(chǎn)品保持固定形狀。這個復(fù)雜的物理化學(xué)變化過程受pH值、離子強(qiáng)度、溫度和時間等諸多因素影響[2],從而改變凝膠特性,特別是保水性和微觀結(jié)構(gòu)。為了得到最適合的加工參數(shù)和條件,需要對不同加工參數(shù)下的凝膠性質(zhì)進(jìn)行比較。

    大量研究證明,pH值對肌球蛋白結(jié)構(gòu)特征和凝膠特性,特別是保水性有較大影響。肌球蛋白的等電點(diǎn)為5.3左右,而典型的肉類制品pH值一般為5.5以上,所以肉類加工中肌球蛋白通常帶負(fù)電荷[3]。pH值影響肌球蛋白凝膠保水性的機(jī)理是通過改變肌球蛋白表面靜電荷的數(shù)量和分布,從而對肌球蛋白分子內(nèi)的折疊狀態(tài)和分子間的相互作用產(chǎn)生影響,最終影響熱誘導(dǎo)形成的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)[4]。

    保水性(water holding capacity,WHC)作為肉制品的主要品質(zhì)特性,前人對其做了大量研究[5]。Grau等[6]利用濾紙吸水的方法來測定肉的保水性;Honikel[7]則通過離心去除水分來測定WHC。但是由于這些方法耗時長、重復(fù)性差且需要破壞樣品本身,并不能充分說明肉制品的WHC。具有非零自旋量子數(shù)(I≠0)的任何核子放置到磁場中,都能夠以電磁波的形式吸收或釋放能量,發(fā)生原子核的躍遷,同時產(chǎn)生核磁共振信號,這種核對射頻區(qū)電磁波的吸收稱為核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)。NMR根據(jù)頻率可以分為解釋化學(xué)位移的核磁共振波譜儀(又稱高場核磁共振)和探測物理性質(zhì)的核磁共振分析儀(又稱低場核磁共振)。低場核磁共振(low field-NMR)作為一種快速無損的檢測技術(shù),可以觀察水分中H質(zhì)子的流動和分布,得到水的動態(tài)變化情況,進(jìn)而得出肉制品WHC的相關(guān)信息[8-9]。H質(zhì)子的弛豫時間往往和水分子的流動性有著緊密的聯(lián)系,這種弛豫包括縱向弛豫過程和橫向弛豫過程,為別稱為自旋-晶格弛豫和自旋-自旋弛豫,又稱T1弛豫和T2弛豫。各個系統(tǒng)內(nèi)水分含量和分布不同,都會造成T1和T2弛豫時間的快慢變化。T2弛豫時間比T1弛豫時間對水分分布狀態(tài)更加敏感,所以常常用來與肉制品的WHC進(jìn)行關(guān)聯(lián)[10]。通過分析T2弛豫時間的不同,較容易區(qū)分出易流動損失的水分和通過物理、化學(xué)作用緊密結(jié)合的水分[11]。

    Bertram等[12]通過研究肌原纖維蛋白在不同pH值、離子強(qiáng)度和溫度等加工參數(shù)作用下T2弛豫時間分布的差異,來描述蛋白質(zhì)凝膠WHC的變化情況。本研究希望通過類似的方法,即通過低場核磁共振測定弛豫時間T2,觀察在不同pH值下兔骨骼肌肌球蛋白熱誘導(dǎo)凝膠的水分分布狀態(tài)變化,與凝膠特性如硬度和微觀結(jié)構(gòu)等建立一定的相關(guān)性聯(lián)系。

    1 材料與方法

    1.1 材料、試劑與儀器

    3月齡的雄性新西蘭白兔(1.5~2.0kg)購于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院種兔場。

    乙二醇二乙醚二胺四乙酸(EGTA) 美國Sigma公司;Triton X-100 美國Amersco公司;其他化學(xué)試劑最低為分析純。

    Waring高速組織搗碎機(jī) 美國思伯明設(shè)備有限公司;Avanti J-E高速冷凍離心機(jī) 美國貝克曼有限公司;TA-XT2i質(zhì)構(gòu)儀 英國Stable Micro System公司;MicroMR微型核磁共振成像儀 上海紐邁電子有限公司;S3000-N掃描電子顯微鏡 日本日立公司;UV-2450紫外分光光度計(jì) 日本島津公司。

    1.2 方法

    1.2.1 肌球蛋白的制備

    健康的新西蘭雄性白兔,宰前充分休息,提供飲水,減少應(yīng)激。頭部機(jī)械致昏后,切斷頸部血管放血,迅速剝皮去頭、爪及內(nèi)臟,自來水沖洗去除血跡,瀝干淋水放入冰箱0~4℃約0.5h,剔取腰大肌。肌球蛋白提取方法參照Han[13]和Wang[14]等。純化得到的肌球蛋白,用雙縮脲法[15]測定其濃度,以牛血清蛋白作標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算蛋白質(zhì)濃度。肌球蛋白溶解在溶液(0.6mol/L KCl、20mmol/L K2HPO4-KH2PO4、pH6.5)中,貯存于0~4℃,于一周內(nèi)使用。

    1.2.2 肌球蛋白凝膠的制備

    肌球蛋白溶液質(zhì)量濃度稀釋到10mg/mL,調(diào)pH值為5.5、6.0、6.5、7.0、7.5。置于水浴鍋中從20℃程序升溫(1℃/min)到中心溫度為70℃保溫20min。凝膠在0~4℃下過夜(12h)。所得的凝膠進(jìn)行保水性、質(zhì)構(gòu)特性測試和掃描電子顯微鏡觀察。

    1.2.3 保水性測試

    保水性(WHC)通過Kocher等[16]的離心法測量,肌球蛋白凝膠在0~4℃下用10000×g離心10min,記錄離心前后離心管的質(zhì)量,離心出液體的質(zhì)量。每個處理3個重復(fù)。WHC用下面的公式進(jìn)行計(jì)算:

    式中:m1為離心過程中水分損失質(zhì)量/g;m2為離心前凝膠的質(zhì)量/g。

    1.2.4 質(zhì)構(gòu)特性測試

    利用質(zhì)構(gòu)儀的texture profile analysis(TPA)測定凝膠硬度,單位為g。質(zhì)構(gòu)分析參數(shù)設(shè)定:探頭P5(直徑5mm不銹鋼圓柱形探頭),測試前下降速度2.0mm/s,測試速度1.0mm/s,測試后探頭上升速度1.0mm/s,穿刺測試距離5mm,感應(yīng)力3g,用質(zhì)構(gòu)儀自帶的軟件Texture Expert English 1.22中的TPAFRAC.MAC過程進(jìn)行分析,計(jì)算凝膠的硬度。每個處理3個重復(fù)。

    1.2.5 掃描電子顯微鏡

    凝膠樣品切成均勻小塊,用體積分?jǐn)?shù)2.5%的戊二醛固定2h,然后經(jīng)過體積分?jǐn)?shù)50%、70%、80%、90%的乙醇溶液梯度脫水各15min,100%的乙醇脫水3次,每次30min。樣品用叔丁醇置換3次,每次3min,取出后進(jìn)行冷凍干燥并將其粘到樣品臺上,用離子濺射儀給樣品鍍上10nm的金膜。通過掃描電子顯微鏡觀察,加速電壓為15kV,每個樣品觀察8個區(qū)域。利用工具對凝膠孔徑直徑Image-Pro Plus (5.1.0.20)進(jìn)行定量統(tǒng)計(jì),每個樣品統(tǒng)計(jì)3張圖片,每張圖片統(tǒng)計(jì)10個不同孔徑。

    1.2.6 NMR自旋-自旋弛豫時間(T2)測量

    NMR弛豫測量在紐邁MicroMR微型核磁共振成像儀上進(jìn)行。測試條件為:質(zhì)子共振頻率為22.6MHz,測量溫度為32℃。大約2g樣品放入直徑15mm核磁管,而后放入分析儀中。自旋-自旋弛豫時間T2用Carr-Purcell-Mebiboom-Gill(CPMG)序列進(jìn)行測量。所使用參數(shù)為:τ-值(90°脈沖和180°脈沖之間的時間)為300μs。重復(fù)掃描32次,重復(fù)間隔時間為6500ms得到16000個回波,得到的圖為指數(shù)衰減圖形,每個測試3個重復(fù)。NMR弛豫測量得到的圖為指數(shù)衰減曲線,其數(shù)學(xué)模型為[17]:

    式中:A(t)為衰減到時間t時的幅值大?。籺為衰減時間;A0i為第i個組分平衡時的幅值大小;T2i為第i個組分的自旋-自旋弛豫時間。

    CMPG指數(shù)衰減曲線用儀器自帶的MultiExp Inv Analysis 軟件進(jìn)行反演,得到T2值。該軟件使用整體迭代修正的NMR弛豫信號多指數(shù)反演算法,結(jié)果為離散型與連續(xù)型相結(jié)合的T2譜,它在信噪比較低的情況下仍能保持弛豫譜的真實(shí)性。反演的結(jié)果為生成弛豫圖和各個弛豫過程的弛豫幅值、其對應(yīng)時間常數(shù)(峰值)及其所占面積分?jǐn)?shù)、每個峰起始時間和結(jié)束時間等。為了分析的方便,采用弛豫圖每個組分峰值對應(yīng)的時間作為T2,而弛豫峰的寬度為基線上峰底的寬度。

    1.3 統(tǒng)計(jì)分析

    用SAS 8.01 (Statistics Analysis System,SAS)進(jìn)行方差分析,如果方差分析效應(yīng)顯著,使用Duncan multiple range test進(jìn)行多重比較(P<0.05)。用Statistica 8.0對WHC、硬度、凝膠孔徑和NMR T2反演結(jié)果進(jìn)行主成分分析(principal component analysis,PCA),從而在盡可能多的保留原始數(shù)據(jù)信息的前提下對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行降維處理。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 保水性和硬度的變化

    在肉以及肉制品生產(chǎn)加工中,蛋白質(zhì)結(jié)合水的能力決定了保水性,保水性對肉的嫩度、多汁性和顏色都有較大影響,是客觀評價(jià)肉以及肉制品的重要指標(biāo)。肌球蛋白在熱誘導(dǎo)凝膠過程中發(fā)生變性聚集,交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),并把水分包含在其中。不同pH值下肌球蛋白加熱凝膠后,保水性和硬度發(fā)生了比較明顯的差異。

    由圖1可以看出,pH5.5時,肌球蛋白保水性較差((34.92±3.19)%),與其他pH值有顯著差異(P<0.05)。隨著pH值升高,保水性顯著增加(P<0.05),pH6.5、7.0、7.5的保水性分別為(68.17±3.76)%、(67.37±5.72)%、(66.52±4.68)%,三者之間無顯著差異(P>0.05),說明當(dāng)pH值達(dá)到6.5以后,保水性趨于穩(wěn)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),靠近等電點(diǎn)附近的肌球蛋白凝膠保水性明顯要比遠(yuǎn)離等電點(diǎn)的凝膠差,這與豬肉肌原纖維蛋白WHC和pH值的關(guān)系類似[18]。Liu等[19]的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)肌球蛋白凝膠在pH5.5時WHC為31.2%,最大WHC出現(xiàn)在pH7.0~9.0。pH值對肌球蛋白表面凈電荷數(shù)量的影響決定了水分在蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中的分布與含量。pH5.5時肌球蛋白分子所帶電荷較少,蛋白質(zhì)在天然狀態(tài)下就發(fā)生了自然聚集,加熱形成凝膠發(fā)生明顯縮水,導(dǎo)致保水性較差。隨著pH值的升高,肌球蛋白表面所帶負(fù)電荷增加,蛋白分子之間靜電排斥作用增強(qiáng),為水分提供了更多的結(jié)合位點(diǎn),同時增加了水化表面積。

    不同pH值下的肌球蛋白凝膠硬度見圖1。蛋白凝膠硬度反映了肉以及肉制品的感官特性如嫩度等。凝膠硬度與形成的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)致密度有密切關(guān)系。肌球蛋白凝膠在pH5.5時硬度明顯小于其他組(P<0.05)。隨著pH值逐漸增大,在pH6.5出現(xiàn)了最大硬度值(28.34±3.36)g,且與pH6.0的硬度值(25.56±3.56)g有顯著差異(P<0.05),與pH7.0和7.5的值((26.32±3.10)g和(25.70±4.89)g)無顯著差異(P>0.05)。對牛血清白蛋白(BSA)和大豆蛋白凝膠性質(zhì)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),蛋白質(zhì)凝膠強(qiáng)度與蛋白質(zhì)變性程度在給定條件下的展開程度有關(guān),變性程度越高、功能基團(tuán)暴露越大,凝膠強(qiáng)度越大[20]。pH值在接近等電點(diǎn)時,蛋白質(zhì)分子上正負(fù)電荷數(shù)目接近,發(fā)生相互吸引,使得蛋白質(zhì)分子發(fā)生無規(guī)則的卷曲和分子團(tuán)聚,使得各種功能基團(tuán)都被包埋在蛋白質(zhì)分子內(nèi)部,無法充分暴露;在pH值高于等電點(diǎn)時,蛋白質(zhì)分子上所帶負(fù)電荷數(shù)目多,靜電斥力使其分子結(jié)構(gòu)舒展伸張,充分暴露了巰基、疏水基團(tuán)和其他共價(jià)鍵基團(tuán),使得熱凝膠過程可能發(fā)生的交聯(lián)更多,凝膠強(qiáng)度更大,結(jié)果測得凝膠硬度也較大。

    圖1 pH值對肌球蛋白凝膠保水性和硬度的影響Fig.1 Effect of pH on WHC and hardness of myosin gel

    2.2 掃描電鏡微觀結(jié)構(gòu)觀察

    圖2為不同pH值下肌球蛋白凝膠掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果。圖2A為處于等電點(diǎn)附近的蛋白質(zhì),其凝膠網(wǎng)孔較大且網(wǎng)絡(luò)狀蛋白質(zhì)絲發(fā)生明顯的斷裂,有明顯未參與凝膠的肌球蛋白形成了團(tuán)塊狀的蛋白聚集體。圖2B中pH6.0的凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)較pH5.5明顯致密,幾乎不存在團(tuán)塊狀的蛋白聚集體,但還是有部分網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)出現(xiàn)斷裂。pH6.5和7.0的凝膠其微觀結(jié)構(gòu)較好(圖2C、圖2D),網(wǎng)孔較小且分布均勻,出現(xiàn)了層疊的網(wǎng)孔結(jié)構(gòu),無明顯斷裂和團(tuán)塊狀蛋白聚集體。圖2E中pH7.5的蛋白質(zhì)其凝膠微觀結(jié)構(gòu)稍比pH6.5和7.0差,出現(xiàn)了較小的團(tuán)塊狀蛋白聚集體。

    圖2 pH值對肌球蛋白凝膠微觀結(jié)構(gòu)的影響Fig.2 Effect of pH on microstructure of myosin gel

    圖3 pH值對肌球蛋白凝膠微觀結(jié)構(gòu)網(wǎng)孔直徑的影響Fig.3 Effect of pH on mesh diameter in microstructure of myosin gel

    圖3為肌球蛋白凝膠網(wǎng)孔直徑隨著pH值變化而變化的情況。凝膠網(wǎng)孔直徑在pH5.5的時候?yàn)?12.27±3.10)μm,明顯要大于其他各組,這與之前的保水性結(jié)果相互印證。網(wǎng)絡(luò)孔徑大,其水分流動就較容易,同時蛋白質(zhì)與水分子的相對接觸面積就較小,導(dǎo)致水化表面積較小,而較為松散的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)和斷裂的網(wǎng)孔蛋白質(zhì)絲都是造成硬度較差的原因之一。pH6.5的蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)孔直徑最小,其對應(yīng)的保水性和硬度值也是最高的,說明在該pH值下形成了良好結(jié)構(gòu)的凝膠,而且還印證了肌球蛋白凝膠孔徑大小與保水性和質(zhì)構(gòu)特性之間的關(guān)系。pH6.5、7.0、7.5的孔徑大小分別為(3.33±0.34)、(4.15±0.64)、(4.52±0.32)μm,它們之間無顯著差異(P>0.05),說明隨著pH值逐漸遠(yuǎn)離等電點(diǎn),肌球蛋白分子表面所帶電荷數(shù)量接近飽和,形成的凝膠結(jié)構(gòu)趨于穩(wěn)定,不隨pH值發(fā)生明顯變化,保水性和硬度的變化也證實(shí)了這種觀點(diǎn)。

    2.3 低場NMR T2弛豫時間的變化

    圖4 pH值對肌球蛋白凝膠橫向弛豫時間(T2)的影響Fig.4 Effect of pH on transverse relaxation times (T2) of myosin gel

    從圖4可以看出,對CPMG脈沖序列得到的衰減曲線進(jìn)行多指數(shù)擬合后,發(fā)現(xiàn)T2在1~10000ms的弛豫時間分布上出現(xiàn)了3個峰,這與用NMR測量乳清蛋白與卵白蛋白中得到的結(jié)果相類似[21]。分別對這3個峰進(jìn)行統(tǒng)計(jì)得出圖5和圖6。圖5為pH值對肌球蛋白凝膠T2弛豫時間的影響,圖6為pH值對各個T2組分峰面積百分?jǐn)?shù)的影響。

    圖5 pH值對肌球蛋白凝膠T21、T22和T23弛豫時間的影響Fig.5 Effect of pH on T21、T22 and T23 relaxation time of myosin gel

    圖6 pH值對肌球蛋白凝膠T21、T22和T23峰面積百分?jǐn)?shù)的影響Fig.6 Effect of pH on peak areas of T21、T22 and T23 of myosin gel

    從圖5分析得出,這3個峰對應(yīng)時間為T21:1.15~8.11ms;T22:132.19~705.48ms;T23:1072.27~3274.55ms。這3個峰可能分別對應(yīng)于結(jié)合水(T21)、不易移動水(T22)和自由水(T23)[13]。圖6的結(jié)果表明,在肌球蛋白凝膠中,結(jié)合水比例很小,低于5%;自由水約占10%~20%;不易移動水占絕大多數(shù),比例超過了7 0%~80%。

    T21弛豫時間和所占峰面積百分?jǐn)?shù)都不隨pH值變化而發(fā)生顯著變化(P>0.05),說明結(jié)合水在不同pH值變化過程中都穩(wěn)定的存在,且不隨肌球蛋白分子所帶電荷變化而變化。T22在pH值變化過程中發(fā)生比較明顯的變化,其趨勢為隨著pH值升高T22弛豫時間顯著降低(P<0.05)。T22弛豫時間的降低,說明這部分水分的流動性逐漸變差,趨于一個不易流動的狀態(tài)。同時由于T22弛豫時間在整個肌球蛋白凝膠水分分布中約占80%以上,而且隨著pH值增加,這部分水所占百分比也在增加,這說明T22弛豫時間變緩的趨勢代表了凝膠中主要比例水分變化的趨勢。T23弛豫時間普遍大于1000ms,所對應(yīng)的比例隨pH值變化無顯著變化(P>0.05),其弛豫時間變化趨勢與T22類似,隨著pH值升高而顯著降低(P<0.05),說明這部分水的流動性也受到了限制。T22和T23弛豫時間變化的原因可能與pH值影響蛋白質(zhì)分子表面電荷數(shù)量和分布有關(guān)[22]。

    保水性、硬度和微觀結(jié)構(gòu)網(wǎng)孔直徑的變化與蛋白凝膠T22和T23時間變化可能有一定內(nèi)在聯(lián)系。T22對應(yīng)凝膠中的不易移動水,其對應(yīng)弛豫時間變緩,可能是因?yàn)槟z結(jié)構(gòu)逐漸致密,導(dǎo)致了填充在凝膠孔徑中的水分與蛋白接觸面積更大,蛋白質(zhì)表面基團(tuán)與水分子相互作用導(dǎo)致了水分移動性下降。T23對應(yīng)凝膠中的自由水,自由水移動性下降的原因可能是因?yàn)槟z孔徑變小,水分在凝膠網(wǎng)絡(luò)中自由流動的空間減少。Bertram等[23]通過研究得出豬肉WHC和T2弛豫時間分布的關(guān)系,也得出了兩者有較強(qiáng)的相關(guān)性。

    圖6結(jié)果表明,隨著pH值升高,T21峰面積百分?jǐn)?shù)基本保持不變,T23峰面積百分?jǐn)?shù)逐漸變小,而T22峰面積百分?jǐn)?shù)逐漸變大。這說明了隨著蛋白質(zhì)表面電荷數(shù)增多和形成凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)致密度增加,一部分自由水轉(zhuǎn)變?yōu)椴灰滓苿铀?。這種水分狀態(tài)轉(zhuǎn)化說了水分的流動性逐漸降低,與隨著pH值升高保水性逐漸增加的趨勢相一致。

    2.4 保水性、硬度、網(wǎng)孔直徑和T2弛豫時間的主成分分析

    pH值影響下保水性、硬度、網(wǎng)孔直徑和T2弛豫時間各參數(shù)之間可能存在線性相關(guān)性,因此在盡量多的保留原始信息情況下,對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析。

    表1 pH值影響下變量的主成分分析Table 1 Principal component analysis of variables at various pH levels

    表1顯示了不同p H值處理樣品前3個主成分(principal component,PC)對總體方差的解釋情況,第一個主成分能解釋總體方差變異的76.846%,說明了原始數(shù)據(jù)之間存在著較強(qiáng)相關(guān)性。前兩主成分對總方差的累計(jì)貢獻(xiàn)達(dá)到91.343%,基本可解釋原有所有指標(biāo)包含的全部信息,且特征值都大于1,所以選取第1和第2個主成分作為評價(jià)pH值變化過程中保水性、硬度、網(wǎng)孔直徑和T2弛豫時間各參數(shù)的綜合指標(biāo)。表2為第1和第2個主成分中各變量的特征向量,其絕對值表示了各個變量對主成分的貢獻(xiàn)大小。

    表2 主成分1和主成分2的特征向量Table 2 Characteristic eigenvectors of principal component 1 and 2

    圖7 不同pH值處理變量在第1、2主成分評分圖Fig.7 Scores of principal components 1,2 after variables treated at various pH conditions

    從表2可以分析得到,第1個主成分其特征向量中X1、X2、X3、X5、X6、X8和 X9的系數(shù)絕對值相差不大,說明了第一個主成分綜合了pH值變化過程中保水性、硬度、網(wǎng)孔直徑和T22與T23弛豫時間參數(shù)的主要變化。第2個主成分的解釋方差為14.50%,其特征向量中X4和X7的系數(shù)絕對值最大,其他系相對較低,說明這兩者對第2主成分貢獻(xiàn)較大。

    圖7為不同pH值處理變量在第1、2主成分平面的得分散點(diǎn)圖。第1主成分主要與T22、T23、T23p和網(wǎng)孔直徑顯正相關(guān),與保水性、硬度和T22p顯負(fù)相關(guān)。第2主成分主要與T21顯正相關(guān),與T21p顯負(fù)相關(guān)。圖8為不同pH值處理樣品在第1、2主成分評分。

    圖8 不同pH值處理樣品在第1、第2主成分評分Fig.8 Scores of principal components 1,2 after samples treated at various pH conditions

    由圖8分析得出,接近等電點(diǎn)的樣品(pH5.5)位于第一象限,其特征為低保水性、低硬度、較長的T2弛豫時間和網(wǎng)孔直徑大。遠(yuǎn)離等電點(diǎn)樣品(pH6.5、7.0、7.5)集中在第二、三象限,相互接近,共同特征為高保水性、高硬度、較短的T2弛豫時間和網(wǎng)孔直徑小。接近和遠(yuǎn)離等電點(diǎn)的樣品分別的位于第1主成分的左右兩端,說明了這種差異主要是保水性、硬度、網(wǎng)孔直徑和T22、T23弛豫時間的不同造成的。

    3 結(jié) 論

    pH值的變化引起兔骨骼肌肌球蛋白的凝膠特性和微觀結(jié)構(gòu)特征都發(fā)生顯著變化。隨著pH值逐漸遠(yuǎn)離等電點(diǎn),保水性、硬度和T22峰面積百分?jǐn)?shù)等都增加;網(wǎng)孔直徑、T22弛豫時間、T23弛豫時間和T22峰面積百分?jǐn)?shù)逐漸降低;主成分分析得出低場核磁共振T2弛豫時間與肌球蛋白凝膠保水性等凝膠特性有很強(qiáng)的相關(guān)性,同時也能解釋微觀結(jié)構(gòu)變化;肌球蛋白蛋白分子表面電荷數(shù)量和分布影響了蛋白分子卷曲和伸展的情況,對最終凝膠保水性、硬度和網(wǎng)孔直徑有很大影響。目前研究發(fā)現(xiàn),雖然T2與保水性等存在較強(qiáng)的相關(guān)性,但多種因素對T2弛豫時間的影響并不都是線性的,還沒得出很好的回歸方程來定量分析兩者之間的關(guān)系,因此,需要深入的研究。

    [1] SIEGLE D G, CHURCH K E, SCHMIDT G R. Gel structure of nonmeat proteins as related to their ability to bind meat pieces[J]. Journal of Food Science, 1979, 44(5): 1276-1279.

    [2] 李繼紅, 彭增起. 溫度、鹽濃度和pH對鹽溶蛋白熱誘導(dǎo)凝膠影響的研究[J]. 肉類工業(yè), 2004(4): 39-41.

    [3] DAMODARAN S P A. Food protein and their application[M]. New York: Marcel Dekker Inc, 1997.

    [4] 曾憲明, 徐幸蓮, 白云, 等. 兔肌球蛋白熱誘導(dǎo)凝膠過程中的物理化學(xué)變化[J]. 食品科學(xué), 2008, 29(4): 149-153.

    [5] XIONG Youling. Role of myofibrillar proteins in water-binding in brineenhanced meats[J]. Food Research International, 2005, 38(3): 281-287.

    [6] GRAU R, HAMM R, BAUMANN A. Water-binding capacity of dead mammal muscle. I. Effect of pH value on water-binding capacity of crushed cattle muscle[J]. Biochemische Zeitschrift, 1953, 325(1): 1-11.

    [7] HONIKEL K O. Reference methods for the assessment of physical characteristics of meat[J]. Meat Science, 1998, 49(4): 447-457.

    [8] BERTRAM H C, ANDERSEN H J. NMR and the water-holding issue of pork[J]. Journal of Animal Breeding and Genetics, 2007, 124(Suppl1):35-42.

    [9] BERTRAM H C, KOHLER A, BOCKER U, et al. Heat-Induced changes in myofibrillar protein structures and myowater of two pork qualities. A combined FT-IR spectroscopy and low-field NMR relaxometry study[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2006, 54(5): 1740-1746.

    [10] TROUT G R. Techniques for measuring water-binding capacity in muscle foods: a review of methodology[J]. Meat Science, 1988, 23(4): 235-252.

    [11] HINRICHS R, GOTZ J, NOLL M, et al. Characterisation of the waterholding capacity of fresh cheese samples by means of low resolution nuclear magnetic resonance[J]. Food Research International, 2004, 37(7): 667-676.

    [12] BERTRAM H C, KRISTENSEN M, ANDERSEN H J. Functionality of myofibrillar proteins as affected by pH, ionic strength and heat treatment:a low-field NMR study[J]. Meat Science, 2004, 68(2): 249-256.

    [13] HAN Minyi, ZHANG Yingjun, FEI Ying, et al. Effect of microbial transglutaminase on NMR relaxometry and microstructure of pork myofibrillar protein gel[J]. European Food Research and Technology, 2009,228(4): 665-670.

    [14] WANG Shufang, SMITH D M. Heat-induced denaturation and rheological properties of chicken breast myosin and factin in the presence and absence of pyrophosphate[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,1994, 42(12): 2665-2670.

    [15] GORNALL A G, BARDAWILL C J, DAVID M M. Determination of serum proteins by means of the biuret reaction[J]. Journal of Biological Chemistry, 1949, 177(2): 751-766.

    [16] KOCHER P N, FOEGEDING E A. Microcentrifuge-based method for measuring water-holding of protein gels[J]. Journal of Food Science,1993, 58(5): 1040-1046.

    [17] 王忠東, 肖立志, 劉堂宴. 核磁共振弛豫信號多指數(shù)反演新方法及其應(yīng)用[J]. 中國科學(xué)(G輯), 2003, 33(4): 323-332.

    [18] 韓敏義, 費(fèi)英, 徐幸蓮, 等. 低場NMR研究pH對肌原纖維蛋白熱誘導(dǎo)凝膠的影響[J]. 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(6): 2098-2104.

    [19] LIU Ru, ZHAO Siming, XIONG Shanbai, et al. Role of secondary structures in the gelation of porcine myosin at different pH values[J].Meat Science, 2008, 80(3): 632-639 .[20] WANG Chenghsin, DAMODARA N S. Thermal gelation of globular proteins: influence of protein conformation on gel strength[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1991, 39(3): 433-438.

    [22] BERTRAM H C, WHITTAKER A K, ANDERSEN H J, et al. pH dependence of the progression in NMR T2relaxation times in postmortem muscle[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2003,51(14): 4072-4078.

    [23] BERTRAM H C, ENGELSEN S B, BUSK H, et al. Water properties during cooking of pork studied by low-field NMR relaxation: effects of curing and the RN-gene[J]. Meat Science, 2004, 66(2): 437-446.

    Effect of pH on Gelation Properties of Rabbit Myosin

    WU Ye,XU Ke,XU Xing-lian*,NIU Lei
    (Key Laboratory of Meat Processing and Quality Control, Ministry of Education,Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)

    In order to investigate the effect of pH on water-holding capacity and water mobility of heat-induced gelation from rabbit myosin, gelation properties of rabbit myosin were characterized through determining relaxation time (T2) of water using low-field nuclear magnetic resonance (NMR), and water-holding capacity (WHC), hardness and ultra microstructure of the gel.NMR results indicated that relaxation time for immobile water (T22) and relaxation time for free water (T23) exhibited a decrease as the increase of pH, which suggested that the slow water mobility resulted from the increased number of negative charge in myosin. Principal component analysis results revealed that T22 and T23 relaxation time had strong correlation with WHC, hardness and diameter of the gel. A significant difference was observed between samples near pI points and other samples. Moreover, the number and distribution of surface charge exhibited an effect on curling and stretching of myosin molecules, and finally affected WHC, hardness and mesh diameter of the gel, while T2 relaxation time could reflect this tendency well.

    myosin;gel;low-field NMR;pH value;water-holding capacity

    TS201.21

    A

    1002-6630(2010)09-0006-06

    2009-10-28

    國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30771526)

    吳燁(1986—),男,碩士研究生,研究方向?yàn)槿馄焚|(zhì)量控制。E-mail:njwy418@126.com

    徐幸蓮(1962—),女,教授,博士,研究方向?yàn)樾螽a(chǎn)品加工與質(zhì)量控制。E-mail:xlxu@njau.edu.cn

    猜你喜歡
    等電點(diǎn)網(wǎng)孔肌球蛋白
    醫(yī)用羧甲基殼聚糖等電點(diǎn)的測定
    河南科技(2020年11期)2020-06-21 15:33:52
    網(wǎng)孔電流方程的改進(jìn)和廣義網(wǎng)孔電流方程的建立
    氨基芳磺酸染料修飾蠶絲的電荷效應(yīng)研究
    絲綢(2018年3期)2018-09-10 07:14:34
    經(jīng)編網(wǎng)孔 時尚載體
    網(wǎng)孔電流法及其應(yīng)用
    茚三酮溶液檢驗(yàn)氨基酸實(shí)驗(yàn)的實(shí)證與優(yōu)化
    響應(yīng)面優(yōu)化等電點(diǎn)法破乳工藝
    用超網(wǎng)孔分析法列、解含無伴電流源電路方程
    肌球蛋白磷酸化的研究進(jìn)展
    高糖對體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性及肌球蛋白輕鏈磷酸化的影響
    琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久香蕉精品热| 欧美日本视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲国产精品久久男人天堂| 免费看日本二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 午夜激情欧美在线| 欧美日韩福利视频一区二区| 色播亚洲综合网| 日日干狠狠操夜夜爽| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲五月天丁香| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲最大成人av| 国产精品日韩av在线免费观看| 有码 亚洲区| 最近视频中文字幕2019在线8| 综合色av麻豆| 亚洲最大成人av| 欧美激情在线99| 亚洲欧美清纯卡通| 十八禁人妻一区二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产亚洲精品久久久com| 高清毛片免费观看视频网站| 十八禁人妻一区二区| 男人的好看免费观看在线视频| 99精品久久久久人妻精品| 免费在线观看成人毛片| 美女高潮的动态| 亚洲av电影不卡..在线观看| 无人区码免费观看不卡| 成年免费大片在线观看| 一级av片app| 精品久久久久久成人av| 成年免费大片在线观看| 午夜激情福利司机影院| 免费在线观看成人毛片| 国产中年淑女户外野战色| 最新在线观看一区二区三区| 69人妻影院| 色播亚洲综合网| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日韩欧美三级三区| 午夜福利免费观看在线| 国产一区二区在线av高清观看| 久久久久久久久久黄片| 久久久久久大精品| 欧美zozozo另类| 国产精品久久视频播放| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产成人av教育| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品伦人一区二区| 欧美3d第一页| 免费看日本二区| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久国产精品影院| 亚洲电影在线观看av| 日本与韩国留学比较| 亚洲激情在线av| 国产不卡一卡二| 亚洲片人在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 听说在线观看完整版免费高清| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产v大片淫在线免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 两人在一起打扑克的视频| 女人被狂操c到高潮| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲人成网站高清观看| 午夜视频国产福利| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 婷婷亚洲欧美| 白带黄色成豆腐渣| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 久久亚洲精品不卡| 亚洲美女黄片视频| 久久久成人免费电影| 丰满乱子伦码专区| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩 亚洲 欧美在线| 午夜精品在线福利| 日韩有码中文字幕| 可以在线观看的亚洲视频| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久久久久久久成人| 亚洲经典国产精华液单 | 亚洲欧美日韩高清专用| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲男人的天堂狠狠| 性欧美人与动物交配| 亚洲五月婷婷丁香| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久久久久久久大av| 免费大片18禁| 一区二区三区免费毛片| 好男人在线观看高清免费视频| 国产淫片久久久久久久久 | 国产精品99久久久久久久久| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久精品影院6| 中亚洲国语对白在线视频| 国产中年淑女户外野战色| 最近最新中文字幕大全电影3| 91狼人影院| 12—13女人毛片做爰片一| 久久亚洲精品不卡| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲成av人片免费观看| 99热这里只有精品一区| 内射极品少妇av片p| 日韩免费av在线播放| 90打野战视频偷拍视频| 精品久久久久久成人av| 亚洲成人久久性| 亚洲最大成人av| 久久久国产成人精品二区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 少妇的逼好多水| 久久久久性生活片| 小说图片视频综合网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 亚洲国产精品久久男人天堂| 成年女人看的毛片在线观看| 成年女人永久免费观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精品粉嫩美女一区| 特大巨黑吊av在线直播| 国产免费一级a男人的天堂| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 日韩欧美免费精品| 国产色爽女视频免费观看| 成人毛片a级毛片在线播放| or卡值多少钱| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美+亚洲+日韩+国产| 最近中文字幕高清免费大全6 | 99热精品在线国产| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| av天堂在线播放| 久久6这里有精品| 最近最新中文字幕大全电影3| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品日产1卡2卡| 熟女电影av网| 亚洲国产欧美人成| 直男gayav资源| 日本黄大片高清| 听说在线观看完整版免费高清| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜激情欧美在线| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 成人特级av手机在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 精品乱码久久久久久99久播| 国产69精品久久久久777片| 婷婷精品国产亚洲av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美午夜高清在线| 国产69精品久久久久777片| 在线a可以看的网站| 有码 亚洲区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品综合久久久久久久免费| 性插视频无遮挡在线免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 深夜a级毛片| 99riav亚洲国产免费| 午夜日韩欧美国产| 国产精品av视频在线免费观看| 成年人黄色毛片网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 最近中文字幕高清免费大全6 | 99久久99久久久精品蜜桃| 最新中文字幕久久久久| 亚洲人成伊人成综合网2020| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美色欧美亚洲另类二区| 成年版毛片免费区| 中文字幕熟女人妻在线| 九色国产91popny在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 午夜福利在线观看吧| 波多野结衣巨乳人妻| 精品国产三级普通话版| 国产麻豆成人av免费视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | av天堂中文字幕网| 欧美日韩乱码在线| 亚洲在线自拍视频| 国产主播在线观看一区二区| 欧美激情在线99| 国产探花在线观看一区二区| 一进一出好大好爽视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 51午夜福利影视在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产美女午夜福利| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品影院久久| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲国产精品合色在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲欧美日韩高清专用| 黄色一级大片看看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 九色国产91popny在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲成人久久爱视频| av天堂中文字幕网| 国产高清有码在线观看视频| 脱女人内裤的视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 51国产日韩欧美| 在线a可以看的网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品av视频在线免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 麻豆成人av在线观看| av在线天堂中文字幕| 99热这里只有是精品50| 久久久成人免费电影| 国产亚洲欧美98| 国产一级毛片七仙女欲春2| 日本a在线网址| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 午夜激情欧美在线| 一区二区三区激情视频| 亚洲黑人精品在线| 亚洲av成人精品一区久久| 在线观看av片永久免费下载| 他把我摸到了高潮在线观看| av中文乱码字幕在线| 国产伦人伦偷精品视频| 老司机福利观看| 天天一区二区日本电影三级| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久久久久久久久成人| 亚洲综合色惰| 热99re8久久精品国产| 国产精品99久久久久久久久| 久久99热这里只有精品18| 久99久视频精品免费| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲精品色激情综合| 在线看三级毛片| 精品福利观看| 床上黄色一级片| xxxwww97欧美| 婷婷精品国产亚洲av| 国产私拍福利视频在线观看| 麻豆国产av国片精品| 国产探花极品一区二区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 一级av片app| 欧美激情久久久久久爽电影| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 男插女下体视频免费在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲第一电影网av| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 一级av片app| .国产精品久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 很黄的视频免费| 少妇熟女aⅴ在线视频| 我的女老师完整版在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| www.色视频.com| 99精品久久久久人妻精品| 久久久久久久久久成人| 亚洲av免费在线观看| 免费黄网站久久成人精品 | 国产美女午夜福利| 欧美一区二区精品小视频在线| 最后的刺客免费高清国语| 国产毛片a区久久久久| 欧美性感艳星| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 18+在线观看网站| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产不卡一卡二| 欧美3d第一页| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 日韩免费av在线播放| 国产亚洲av嫩草精品影院| .国产精品久久| 日韩av在线大香蕉| 亚洲av五月六月丁香网| 久久亚洲真实| .国产精品久久| 亚洲av一区综合| 欧美日本视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 亚洲av第一区精品v没综合| 99久久99久久久精品蜜桃| 精品久久久久久久久av| 可以在线观看毛片的网站| 十八禁网站免费在线| av黄色大香蕉| 他把我摸到了高潮在线观看| 天堂影院成人在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 国产麻豆成人av免费视频| 日本黄大片高清| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美最新免费一区二区三区 | 国产精品不卡视频一区二区 | 欧美激情国产日韩精品一区| 搡老妇女老女人老熟妇| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美成人性av电影在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 一夜夜www| 91九色精品人成在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 男女那种视频在线观看| 国产高清激情床上av| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 午夜a级毛片| 婷婷丁香在线五月| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产精品久久久久久久久免 | 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲成人免费电影在线观看| 久久九九热精品免费| 亚洲第一区二区三区不卡| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 给我免费播放毛片高清在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 午夜福利在线在线| 首页视频小说图片口味搜索| 少妇人妻一区二区三区视频| 人妻久久中文字幕网| av国产免费在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 人妻久久中文字幕网| 男女下面进入的视频免费午夜| 午夜福利成人在线免费观看| 一a级毛片在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费黄网站久久成人精品 | 看免费av毛片| 国产一区二区激情短视频| 麻豆一二三区av精品| 丰满乱子伦码专区| 欧美乱色亚洲激情| 日日干狠狠操夜夜爽| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲自拍偷在线| 极品教师在线视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 高清在线国产一区| 亚洲av美国av| 看片在线看免费视频| 90打野战视频偷拍视频| 国产亚洲精品av在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 特级一级黄色大片| 久久6这里有精品| 国产黄片美女视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久午夜亚洲精品久久| 大型黄色视频在线免费观看| 最新在线观看一区二区三区| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 老司机福利观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| av黄色大香蕉| АⅤ资源中文在线天堂| 在线播放无遮挡| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 日本黄色视频三级网站网址| 最近在线观看免费完整版| 日韩人妻高清精品专区| x7x7x7水蜜桃| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品久久电影中文字幕| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美潮喷喷水| 欧美一区二区亚洲| 一个人看的www免费观看视频| 性色avwww在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 成人av在线播放网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 婷婷丁香在线五月| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 男女床上黄色一级片免费看| 99久久精品一区二区三区| 亚洲最大成人av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久6这里有精品| 国语自产精品视频在线第100页| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲成人久久性| 精品人妻熟女av久视频| 日本五十路高清| 欧美黄色淫秽网站| 午夜福利欧美成人| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美精品国产亚洲| 人人妻人人看人人澡| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 国模一区二区三区四区视频| 国内精品美女久久久久久| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国内精品美女久久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 日本与韩国留学比较| 亚洲avbb在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产亚洲精品av在线| 搡老妇女老女人老熟妇| 又黄又爽又免费观看的视频| 51午夜福利影视在线观看| .国产精品久久| 亚洲精品久久国产高清桃花| ponron亚洲| 欧美丝袜亚洲另类 | 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲色图av天堂| 岛国在线免费视频观看| 亚洲电影在线观看av| 热99re8久久精品国产| 久久国产乱子免费精品| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 赤兔流量卡办理| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产av一区在线观看免费| 国产伦精品一区二区三区四那| 精华霜和精华液先用哪个| 高清毛片免费观看视频网站| 精品一区二区三区人妻视频| 欧美成人a在线观看| 亚洲在线观看片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲av二区三区四区| а√天堂www在线а√下载| 亚洲无线观看免费| 久久这里只有精品中国| 日韩欧美在线二视频| 五月伊人婷婷丁香| 人妻久久中文字幕网| 午夜福利在线在线| 99热6这里只有精品| 日韩人妻高清精品专区| 欧美黑人巨大hd| 国产探花极品一区二区| а√天堂www在线а√下载| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚州av有码| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 五月伊人婷婷丁香| 国产亚洲精品久久久com| 女同久久另类99精品国产91| 久久午夜福利片| 看十八女毛片水多多多| 色播亚洲综合网| 少妇高潮的动态图| 日韩av在线大香蕉| .国产精品久久| 性插视频无遮挡在线免费观看| 婷婷精品国产亚洲av| 成人无遮挡网站| 99视频精品全部免费 在线| 国产成人影院久久av| 亚洲成人免费电影在线观看| 美女cb高潮喷水在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 久久性视频一级片| 国产一区二区三区视频了| 好男人在线观看高清免费视频| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 一区二区三区高清视频在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 九色成人免费人妻av| 内射极品少妇av片p| 国模一区二区三区四区视频| 波多野结衣高清无吗| 国产精品久久电影中文字幕| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲无线观看免费| 久久性视频一级片| 亚洲美女黄片视频| 天堂网av新在线| 午夜亚洲福利在线播放| 999久久久精品免费观看国产| 国产成人av教育| 草草在线视频免费看| 午夜视频国产福利| 欧美黑人巨大hd| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产单亲对白刺激| 欧美精品国产亚洲| 激情在线观看视频在线高清| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 久久这里只有精品中国| 亚洲中文日韩欧美视频| 成人无遮挡网站| 亚洲精品一区av在线观看| 国产在视频线在精品| a级毛片a级免费在线| 国产黄片美女视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 十八禁国产超污无遮挡网站| 精品午夜福利在线看| 久久久久久久久久成人| 好男人在线观看高清免费视频| 国产一区二区在线观看日韩| 99久久精品一区二区三区| 两个人视频免费观看高清| 身体一侧抽搐| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 天堂√8在线中文| 伦理电影大哥的女人| 国产麻豆成人av免费视频| 久久久久久久久大av| 国产午夜精品论理片| 久久久色成人| 午夜a级毛片| 赤兔流量卡办理| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲精品亚洲一区二区| 直男gayav资源| 18禁在线播放成人免费| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 哪里可以看免费的av片| 波野结衣二区三区在线| 国产亚洲欧美98| 天堂动漫精品| 伦理电影大哥的女人| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 宅男免费午夜| 免费看光身美女| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 他把我摸到了高潮在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 给我免费播放毛片高清在线观看| 午夜福利欧美成人| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲精品亚洲一区二区| 男女那种视频在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产久久久一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 悠悠久久av| 国产亚洲欧美98| 一二三四社区在线视频社区8| 国语自产精品视频在线第100页| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲,欧美精品.| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| avwww免费| 免费观看精品视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 哪里可以看免费的av片| 免费看光身美女| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 成人av一区二区三区在线看| 直男gayav资源| 国产伦人伦偷精品视频|