不同粉碎粒度對甘草中有效成分含量的影響

李德成，劉慶燕，陳 田，周保騰，趙軍軍

（山西生物應(yīng)用職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西 太原 030031）

甘草含有甘草酸、甘草次酸及甘草苷等有效成分，具有補中益氣、祛痰止咳、清熱解毒的作用。據(jù)作者統(tǒng)計，《中國藥典》2005年版收載含有甘草的成方制劑有182個，其中丸劑49.5%，散劑6.6%。王玉蓉等［1］提出，藥物經(jīng)超微粉碎后可使細胞破壁，粉體比表面積增大，具有良好的溶解性、化學(xué)活性和生物活性，有助于提高中藥有效物質(zhì)的溶出和吸收，提高生物利用度。作者用HPLC法對不同粉碎粒度下甘草中甘草酸、甘草次酸、甘草苷的含量進行了測定，擬了解不同粉碎粒度對甘草中有效成分含量的影響，以便指導(dǎo)該劑型生產(chǎn)過程中對甘草的合理應(yīng)用。

1 實驗材料

LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司）；LC-solution色譜工作站（日本島津公司）；貝利粉體機（濟南倍力粉體技術(shù)工程有限公司）；電子分析天平BP211D（80508605）；KQ-500B 型超聲波清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；PHS-3C型實驗室pH計 （上海今邁儀器儀表有限公司）。甘草苷、甘草酸銨、甘草次酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111610-200604、110731-200614、110723-200612）。所用試劑除甲醇、乙腈為色譜純，其他為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 甘草酸色譜條件［2］色譜柱（Diamonsil C18）；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.2 mol/L 醋酸銨溶液-冰醋酸（67∶32∶1）為流動相，紫外檢測波長為250 nm，柱溫：室溫。理論板數(shù)按甘草苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.1.2 甘草苷色譜條件［2］色譜柱（Diamonsil C18）；以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.5%冰醋酸（1∶4）為流動相，紫外檢測波長為 276 nm，柱溫：室溫。理論板數(shù)按甘草苷峰計算應(yīng)不低于4 000。

2.1.3 甘草次酸色譜條件［3］色譜柱（Diamonsil C18）；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（調(diào)磷酸pH為3.7）=80∶20為流動相，紫外檢測波長為250 nm，柱溫：室溫。理論板數(shù)按甘草苷峰計算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對照品溶液的制備

對照品儲備溶液的制備：分別精密稱取對照品甘草苷 5 mg［2］、甘草次酸 7 mg［3］、甘草酸銨鹽 10 mg［2］。甘草苷、甘草次酸用甲醇溶解并分別定容為100 mL、25 mL，甘草酸銨鹽用流動相溶解并定容為100 mL。

2.3 樣品溶液的制備

取山西渾源黃芪開發(fā)有限公司栽培的甘草飲片與野生甘草飲片，用貝利粉體機對其分別粉碎，過篩，得100目粉、200目粉、300目粉，備用。

2.3.1 甘草酸供試品溶液的制備［2］取樣品粉末約0.3 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加流動相約45 mL，超聲處理（功率 250 W，頻率 20 kHz）30 min，取出，放冷，加流動相至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 甘草苷供試品溶液的制備［2］取樣品粉末約0.2 g，置25 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10 mL，稱定重量，超聲處理（功率300 W，頻率25 kHz）30 min，取出，再稱重，用70%乙醇補足減失的重量，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，置100 mL量瓶中，用20%乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 甘草次酸供試品溶液的制備［4］取樣品粉末約2 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加 80%甲醇（1%氨水）溶液定容到100 mL，超聲處理（功率250 W，頻率 20 kHz）15 min，取出，放冷，過濾后供進樣用。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密吸取甘草苷對照品液0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，甲醇定容，搖勻；再精密吸取甘草酸銨鹽對照品液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL 于 10 mL容量瓶中，流動相定容，搖勻；精密吸取甘草次酸對照品液 0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL于5 mL量瓶中，甲醇定容，搖勻。按上述色譜條件進樣20 μL，進行線性分析，以峰面積對進樣濃度進行線性回歸，得回歸方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍分別為：Y=24 954X+7 653，r=0.999 4， 線性范圍 2.5 μg/mL～25 μg/mL （甘草苷）；Y=23 649X+24 576，r=0.999 6，線性范圍 5 μg/mL～30 μg/mL（甘草酸）；Y=1 843 481X-5 771，r=0.999 9， 線性范圍 112.0 μg/mL～268.8 μg/mL（甘草次酸）。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液，重復(fù)進樣5次，按上述色譜條件測定，記錄峰面積。求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸的RSD分別為0.97%、0.89%和1.08%。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液，分別放置0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h 進樣， 按上述色譜條件測定峰面積，求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸的RSD分別為1.14%、1.05%和1.21%，表明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

制備同一批號供試品溶液5份，按上述色譜條件分別測定甘草苷、甘草酸和甘草次酸含量，求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸的RSD分別為1.28%、1.07%和1.17%。

2.8 回收率試驗

精密吸取同一供試品溶液各5份，分別精密加入同一濃度同一體積的甘草苷、甘草酸銨鹽和甘草次酸對照品溶液，混勻，進樣，按上述方法測定甘草苷、甘草酸和甘草次酸的含量。求得甘草苷、甘草酸和甘草次酸平均回收率分別為99.4%、100.8%和98.7%；RSD值分別為1.17%、1.22%和1.05% 。表明本實驗所確定的HPLC法進行甘草苷、甘草酸、甘草次酸的含量分析，準(zhǔn)確度較高。

2.9 樣品的含量測定

分別取栽培的甘草飲片與野生甘草飲片粉末，按“2.3”法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件分別測定甘草苷、甘草酸、甘草次酸的峰面積，并計算其含量。結(jié)果見表1。

表1 不同甘草樣品中甘草苷、甘草酸、甘草次酸的含量

3 結(jié) 論

結(jié)果表明，野生甘草的藥物成分溶出度是栽培品的1倍左右，證明野生甘草的成分含量明顯高于栽培品。建議制藥企業(yè)在生產(chǎn)過程中可以根據(jù)甘草的來源酌情處理其在成品處方中的用量，以穩(wěn)定其含量，提高藥物療效。

對甘草粉碎粒度的研究表明，粉碎有利于提高甘草中有效成分的溶出，但粉碎粒度對甘草中甘草苷等成分的溶出影響不大。本次實驗結(jié)果較蔡翠芳等［5］報道的栽培甘草與野生甘草飲片（中粉）中的甘草苷、甘草酸含量明顯提高，而與李志猛等［6］報道的超微粉碎后甘草酸的溶出顯著提高不一致。近年來，有關(guān)中藥超微粉碎研究報道較多，基本上形成兩種觀點，一種是超微粉碎能提高有效成分的溶出［7-10］，另一種是中藥粉碎粒徑對有效成分的提取率沒有明顯影響［11-12］，這可能是超微粉碎后粒徑減小，其表面能增加的原因。因此，根據(jù)本實驗結(jié)果，建議在含甘草的丸劑和散劑中，甘草粉碎粒度以100目為宜，既可以達到該劑型要求，又可以降低生產(chǎn)成本。

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