毛細管氣相色譜法測定扎托洛芬中有機溶劑的殘留量

吳春麗 ,張俊霞,史云濤,李 攀 ,李 幸,雷 偉,張振中

鄭州大學藥學院鄭州 450001

(2009-09-04收稿 責任編輯 姜春霞)

扎托洛芬,化學名為 2-(10-氧-10,11-二氫二苯并 [b,f]硫雜艸卓-2-基)丙酸,是日本 Chemiphar和 Zeria公司開發(fā)研制的一種強效非甾體抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱藥[1]。為保證藥品質(zhì)量和用藥安全,對扎托洛芬進行有機溶劑殘留量檢測就顯得尤為重要。作者采用分步法,先檢測中間體 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸中的有機溶劑四氯化碳、三氯甲烷及甲醇的殘留,確保達到要求[2],再測定扎托洛芬中乙醇的殘留。四氯化碳、三氯甲烷屬于含鹵素的溶劑,適宜采用響應值較好的電子捕獲檢測器(ECD),而乙醇、甲醇適宜采用氫火焰檢測器(FID)。作者采用毛細管氣相色譜法[3-5]測定扎托洛芬原料藥中上述4種有機溶劑的限量,方法簡單、易操作,且靈敏度高、結果準確,有利于產(chǎn)品安全性的保證。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 Agilent 6890氣相色譜儀,HP6890化學工作站。FID和 ECD檢測器(美國安捷倫公司)。5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸(鄭州大學藥學院);扎托洛芬(鄭州思創(chuàng)化學生物科技有限公司);四氯化碳、乙醇均為分析純;三氯甲烷、甲醇及 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)均為色譜純。

1.2 溶液的配制

1.2.1 四氯化碳和三氯甲烷對照品溶液的配制分別精密稱取四氯化碳、三氯甲烷適量,用 DMF稀釋成 0.079 7、1.123 8 g/L的溶液,搖勻,作為對照品貯備液。精密量取貯備液 0.5 mL置 100 mL容量瓶中,用 DMF稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液 A。

1.2.2 甲醇對照品溶液的配制 精密稱取甲醇適量,用 DMF稀釋成 59.347 5 g/L的溶液,搖勻,作為對照品貯備液。精密量取貯備液 0.5 mL置 100 mL容量瓶中,用 DMF稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液B。

1.2.3 乙醇對照品溶液的配制 精密稱取乙醇適量,用 DMF稀釋成 98.660 g/L的溶液,搖勻,作為對照品貯備液。精密量取貯備液 0.5 mL置 100 mL量瓶中,用 DMF稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液 C。

1.3 色譜條件

1.3.1 四氯化碳和三氯甲烷測定色譜條件 物質(zhì)的量分數(shù) 5%苯基甲基聚硅氧烷(HP-5)毛細管柱(0.32 mm×30 m×0.25μm);ECD檢測器,溫度為 250℃;進樣口溫度為 200℃;載氣為氮氣,流速為 1.0 mL/min;分流比為 50:1;柱溫為 60℃;進樣量 1μL。

1.3.2 甲醇及乙醇測定色譜條件 HP-5毛細管柱(0.32 mm×30 m×0.25μm);FID檢測器,溫度為250℃;進樣口溫度為 200℃;載氣為氮氣,流速為1.0 mL/min,分流比為 50:1;柱溫為 80℃;進樣量 1 μL。

1.4 線性關系考察 精密量取各相應對照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0及 10.0 mL分別置 10 mL容量瓶中,加 DMF稀釋至刻度,搖勻。按 1.3色譜條件進行測定,以各有機溶劑峰面積 Y對濃度 X,進行線性回歸。實驗重復 3次。

1.5 精密度實驗 按 1.3色譜條件,取各對照品溶液重復進樣 5次,記錄色譜圖,并計算結果考察精密度。

1.6 重復性實驗 精密稱取 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸或扎托洛芬 1.0 g,共 6份,分別置 10 mL容量瓶中,用 DMF溶解并稀釋至刻度,搖勻。分別按 1.3.1及 1.3.2色譜條件測定,按外標法計算。

1.7 回收率實驗 精密稱取 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸 1.0 g,共 12份,分別置 10 mL容量瓶中,前 6份精密加入四氯化碳和三氯甲烷的對照品貯備液 2.0 mL,后 6份精密加入甲醇對照品貯備液,均用 DMF溶解并稀釋至刻度,搖勻。分別按1.3.1及 1.3.2色譜條件測定。同時測定各相應對照品溶液。計算回收率。精密稱取扎托洛芬樣品約1.0 g,共 6份,分別置 10 mL容量瓶中,精密加入乙醇對照品貯備液 2.0 mL,用 DMF溶解并稀釋至刻度,搖勻。按 1.3.2色譜條件測定。同時測定其對照品溶液,計算回收率。

1.8 樣品測定 精密稱取 3批 5-(1-羧基乙基)-2-苯硫基苯乙酸樣品約 1.0 g,置 10 mL容量瓶中,用DMF溶解并稀釋至刻度,搖勻得供試品溶液 a、b。按 1.3.1及 1.3.2色譜條件測定,按外標法計算樣品中四氯化碳、三氯甲烷及甲醇的殘留量。精密稱取扎托洛芬樣品約 1.0 g,置 10 mL容量瓶中,用DMF溶解并稀釋至刻度,搖勻得供試品溶液 c。按1.3.2色譜條件測定,按外標法計算樣品中乙醇的殘留量。

2 結果

2.1 線性關系考察 見表 1。四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇的檢測限分別為 0.012、0.168 6、4.75及 0.986 6 ng。

表 1 4種有機溶劑的回歸方程和線性范圍

2.2 精密度實驗 四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇的 RSD分別為 2.62%、4.25%、2.38%及 2.79%。2.3 重復性實驗 結果表明該樣品中不含四氯化碳、三氯甲烷、甲醇和乙醇,方法重復性良好。

2.4 回收率實驗 四氯化碳、三氯甲烷及甲醇的平均回收率分別為 98.0%、97.9%和 98.8%,RSD分別為 3.42%、3.70%和 0.30%(n=6)。乙醇的平均回收率為 103.9%,RSD為 5.01%(n=6)。

2.5 樣品測定 3批檢測樣品均未檢出四氯化碳、三氯甲烷、甲醇和乙醇。對照品和樣品的氣相色譜圖見圖 1。其中峰 6為溶劑雜質(zhì),該雜質(zhì)在測定方法中無干擾,不影響測定。

圖 1 對照品溶液(A)和樣品溶液(B)的氣相色譜圖結果A:對照品;B:樣品;1:三氯甲烷;2:四氯化碳;3:甲醇;4:乙醇;5:DMF;6:溶劑雜質(zhì)。

3 討論

HP-5是非極性毛細管柱,適用于多核芳烴、酚、酯、碳氫化合物、藥物及醇等,比較適合用于殘留溶劑分析。在該研究條件下各物質(zhì)均可達到有效分離,且峰形好,靈敏度高,重現(xiàn)性好。

人用藥物注冊技術要求國際協(xié)調(diào)會議(ICH)中關于有機溶劑殘留量的指導原則,將乙醇列為三類溶劑,而四氯化碳列為必須避免使用的一類溶劑,三氯甲烷和甲醇列為必須限制使用的二類溶劑[2]。根據(jù) ICH的控制指標,四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇 4種溶劑的限度規(guī)定為 0.000 4%、0.006%、0.3%和 0.5%。上述測定結果遠遠小于這個限度。方法學研究表明該法對四氯化碳、三氯甲烷、甲醇和乙醇的檢測具有很高的靈敏度、很好的精密度和準確性,所配制的溶液穩(wěn)定性也能滿足分析的要求。該方法快速簡便,適用于扎托洛芬原料藥中四氯化碳、三氯甲烷、甲醇及乙醇殘留量的測定。

[1]金輝.非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥扎洛芬合成研究[D].四川大學,2003.

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