絡(luò)通口服液的制備及質(zhì)量控制

姜 卓

實(shí)驗(yàn)研究

絡(luò)通口服液的制備及質(zhì)量控制

姜 卓

目的 探討絡(luò)通口服液的制備及質(zhì)量控制方法。方法 用薄層色譜，鑒別方中的當(dāng)歸、黃芪、紅花；采用HPLC法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充亮劑；甲醇-水（75∶25）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm測(cè)定了丹參酮ⅡA的含量。結(jié)果 丹參酮ⅡA在（0.45～2.7μg）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法平均回收率為99.95%，RSD為0.56%。結(jié)論 定性鑒別斑點(diǎn)明顯，定量測(cè)定方法快速、準(zhǔn)確，適用于該制劑的質(zhì)量控制。

口服液；制備與質(zhì)控；HPLC

絡(luò)通口服液是永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院中醫(yī)科的協(xié)定處方，運(yùn)用于臨床十余年，療效顯著，本制劑驅(qū)風(fēng)勝濕，溫經(jīng)通絡(luò)，活血化瘀，強(qiáng)筋壯骨，用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，頸椎、腰椎骨質(zhì)增生，坐骨神經(jīng)痛，肢體麻木等癥。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者用薄層色譜法對(duì)方中藥物進(jìn)行定性鑒別，用高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

絡(luò)通口服液由本院制劑室生產(chǎn)，所用藥材購(gòu)于永州市藥材公司，經(jīng)永州市藥檢所鑒定，符合《中國(guó)藥典》一部2010年版規(guī)定，各陰性樣品系除處方中的某些相應(yīng)藥材后，按絡(luò)通口服液工藝制備而成，對(duì)照品由中國(guó)生物制品鑒定所提供；硅膠G由青島海洋化工廠生產(chǎn)，其它試劑均為分析純。美國(guó)HP109M液相色譜儀；陳列檢測(cè)儀；自動(dòng)進(jìn)樣器。

2 處方與制備

2.1 處方

當(dāng)歸150g、桂枝100g、紅花65g、五加皮150g、杜仲150g、威靈仙150g、秦芄150g、牛夕150g、丹參200g、黃芪150g，制成1000mL。

2.2 制備

以上10味藥照浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法，當(dāng)歸、桂枝、杜仲、紅花分別用原生藥數(shù)7倍，杜仲用原生藥數(shù)6倍的70%乙醇浸漬48h分別進(jìn)行滲漉。其中當(dāng)歸，紅花分別收集初濾液180和90mL，另器保存，繼續(xù)滲漉收集全漉液。五加皮、威靈仙、秦芄、牛夕、丹參、黃芪及上述藥渣煎煮2次，每次2h合并煎液濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度約為1.20，加乙醇使含醇量為50%，攪勻，靜置濾過(guò)，濾液與續(xù)濾液合并，回收乙醇濃縮至適量，加上述當(dāng)歸、紅花初濾液及草糖漿294mL，再用乙酸調(diào)配便成1000mL，攪勻，靜置濾過(guò)、即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 當(dāng)歸的鑒別

取本品20mL，用乙醇萃取2次，每次20mL，合并萃取液，自然揮干，用1.0mL甲醇溶解，作為樣品供試液。另取缺當(dāng)歸陰性樣品液20mL經(jīng)同法制成陰性對(duì)照液。當(dāng)歸陽(yáng)性對(duì)照液，為取當(dāng)歸對(duì)照藥材0.5g，加20mL乙醚冷浸1h，時(shí)時(shí)振搖，過(guò)濾，濾液自然揮干，再加1.0mL甲醇溶解，作為對(duì)照品溶液，吸取樣品供試液，陰性對(duì)照液各5μL，對(duì)照液1μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G-薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑展開取出，晾干，置紫外燈365nm下檢視，供試液色譜中與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

3.2 黃芪的薄層鑒別

3.2.1 取本品10mL，置分液漏斗中，加乙醚15mL，振搖10min，分取醚層，濾過(guò)，揮干乙醚后，加10%香草醛硫酸溶液，顯紫紅色。

3.2.2 取本品10mL，加甲醇10 mL加熱回流1h，濾過(guò)，濾液加入中性氧化鋁柱（100～120目，5g，內(nèi)徑為10～15mm）上，用40%甲醇100mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲酸制成每1mL含1mg的溶液，對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液，各2分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈（365nm）下顯相同橙黃色的熒光斑點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

3.3 紅花的薄層鑒別

取本品10mL，加80%的丙酮5mL密塞，振搖15min，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液。另取紅花對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μL，點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7∶2∶3∶0.4）為展開劑，展開、取出、晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖3。

圖1 當(dāng)歸薄層鑒別

圖2 黃芪薄層鑒別

圖3 紅花薄層鑒別

3.5 含量測(cè)定

3.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

固定相：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水（25∶75）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

3.5.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品適量置棕色瓶中加甲醇溶解制成每1mL含丹參酮ⅡA16μg的溶液，即得（圖4）。

圖4 3種溶液對(duì)照色譜圖

3.5.3 供試品溶液制備

精密量取不同批號(hào)的絡(luò)通口服液10mL（5份），置分液漏斗中，用乙醚萃取3次（20、15、15mL）合并萃取液，揮去乙醚，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ苡?mL量瓶中，搖勻、備用。

3.5.4 空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)

取不含丹參的供試品溶液，按供試液制備法制備作為空白對(duì)照液，分別吸取丹參酮ⅡA對(duì)照液，供試品溶液和空白對(duì)照液4μL按上品溶液述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明其它成份對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

3.5.5 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6μL于上述色譜條件下測(cè)定峰面積，以丹參酮ⅡA進(jìn)樣量為橫生標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為：Y＝2910.602X－47.865，r=0.9996。結(jié)果表明原兒茶醛在0.45～2.7μg/mL的范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5.6 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密移取絡(luò)通口服液10mL共5份，置分液漏斗中，加入對(duì)丹參酮ⅡA照品0.465mg，用乙醚萃取3次（20、15、15mL）合并萃取液，揮去乙醚殘?jiān)眉姿崛芙獠⒍ㄈ苤?mL，搖勻、備用，將上述處理好的樣品經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)下表1。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)表

精密吸取供試液5～10μL，對(duì)照品溶液10μL，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積結(jié)果3批樣品（批號(hào)分別為100310、100421、100512）中丹參酮ⅡA的含量分別為0.59、0.58、0.58mg/支。

4 討 論

永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院根據(jù)經(jīng)驗(yàn)方制成的絡(luò)通口服液，臨床觀察療效確切，易于攜帶貯藏。為臨床提供了療效肯定，服用方便，且價(jià)格低廉的成藥。

從當(dāng)歸、黃芪、紅花的薄層鑒別圖看，斑點(diǎn)明顯，專屬性強(qiáng)。絡(luò)通口服液由多種中藥材制備而成，丹參是主要成份之一，其生理活性成份是丹參酮及丹酚酸B等，本人用高效液相色譜法對(duì)方中的丹參作了定量分析。該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、準(zhǔn)確，排除了方中其他主藥的干擾，可以作為進(jìn)一步對(duì)制劑提取和質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的研究方法[1,2]。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:70.

[2] 王寶琴.中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1994:213-245.

R282.710.3

B

1671-8194（2010）24-0045-02

湖南永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院附屬醫(yī)院（425006）