鼻咽癌的PET/CT顯像與細(xì)胞己糖激酶-II和增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)的對(duì)照研究

石衛(wèi)民 ，范義湘，黎 靜，尹吉林

（1.廣東省第二人民醫(yī)院，廣東 廣州 510317；2.廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院，廣東 廣州 510010）

臨床研究表明，18F-FDG-PET顯像對(duì)鼻咽癌的診斷具有重要價(jià)值，腫瘤組織18F-FDG的攝取較正常組織顯著增加[1]，但其增加的機(jī)理并不清楚，目前發(fā)現(xiàn)多種實(shí)體瘤的FDG過度攝取和積聚與己糖激酶-II（HK-II）有關(guān)[2-5]，同時(shí)腫瘤細(xì)胞快速增殖可能引起能量需求的增加，增殖細(xì)胞核抗原 （PCNA）是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，能夠較準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖狀況，因此我們用免疫組織化學(xué)方法對(duì)40例鼻咽癌組織的HK-II和PCNA過度表達(dá)與18F-FDG-PET顯像FDG攝取的情況進(jìn)行對(duì)照研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2005年3月～2006年10月本院收治的40例鼻咽癌患者，男32例，女 8例，年齡19～67歲（平均46歲），診斷均經(jīng)我院病理證實(shí)，非角化分化型20例，非角化未分化型20例，完善分期檢查 （包括頭頸部MRI，胸部X片，腹部B超，骨ECT等）后按福州92分期確定分期：I期12例，II期28例，所以患者均于放療前行PET檢查，16例行全身PET檢查，24例行頭頸部局部PET檢查；40例患者的腫瘤組織檢測(cè)HKII，PCNA蛋白的表達(dá)。

1.2 PET檢查

采用德國西門子公司產(chǎn)Biograph PET/CT掃描儀。檢查前禁食6h以上，按150μCi/kg靜脈給予FDG，給藥1h后開始采集。采用三維采集模式與全身PET采集程序，取5～6個(gè)床位，每個(gè)床位發(fā)射采集與透射掃描時(shí)間比例為7∶3。以迭代法重建圖像，層厚5mm，測(cè)量腫瘤的最大標(biāo)準(zhǔn)攝取值（SUVmax），用感興趣區(qū)（ROI）工具測(cè)量同一層面的平均攝取值（SUVmean）。

1.3 HK-II，PCNA 表達(dá)檢測(cè)

采用免疫組化方法。腫瘤標(biāo)本經(jīng)過4%甲醛固定，石蠟包埋，切片厚4μm，應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶親和 （SP）免疫組化法染色。多克隆兔抗人HK-II抗體或PCNA，工作濃度1∶400，SP染色試劑盒為福州邁新生物試劑公司產(chǎn)品。設(shè)立不加多克隆兔抗人HK-II或PCNA抗體（PBS代替）染色組為陰性對(duì)照。結(jié)果判斷：染色陽性細(xì)胞率：由有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生分別在顯微鏡上隨機(jī)選擇3個(gè)低倍視野（10×10），計(jì)數(shù)每張切片上至少100個(gè)細(xì)胞中HK-II或PCNA染色陽性的細(xì)胞數(shù)，計(jì)算其陽性細(xì)胞的百分率，這樣計(jì)數(shù)3次，取其平均值即為染色陽性細(xì)胞率，然后分為5級(jí)記錄：1級(jí)0～20%，2級(jí) 21～40%，3級(jí) 41～60%，4級(jí) 61～80%，5級(jí)81～100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果以±s或百分率表示。SUV比較采用t檢驗(yàn)，HK-II，PCNA表達(dá)陽性率比較采用χ2檢驗(yàn)，不同指標(biāo)之間的關(guān)系比較采用Pearson相關(guān)分析。統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 14.0軟件。

2 結(jié)果

2.1 PET檢查結(jié)果

40例患者的鼻咽癌原發(fā)灶在PET檢查中均顯影，見圖1。原發(fā)灶的SUVmax與SUVmean分別為9.45±1.87和6.04±1.09。

2.2 鼻咽癌細(xì)胞HK-II表達(dá)

40例早期鼻咽癌患者的腫瘤組織HK-II染色均為陽性，陽性細(xì)胞率為68.33%，其中染色陽性細(xì)胞率1級(jí)3例，2級(jí)5例，3級(jí)6例，4級(jí)16例，5級(jí)10例。鼻咽癌組織染色陽性細(xì)胞呈散在分布，無明顯區(qū)域性。HK-II陽性信號(hào)為棕黃色，定位于細(xì)胞質(zhì)，見圖2a。

2.3 鼻咽癌細(xì)胞PCNA表達(dá)

40例早期鼻咽癌患者的腫瘤組織PCNA染色均為陽性，陽性細(xì)胞率為36.18%，其中染色陽性細(xì)胞率1級(jí)8例，2級(jí)19例，3級(jí)6例，4級(jí)2例，5級(jí)1例。鼻咽癌組織染色陽性細(xì)胞呈散在分布，無明顯區(qū)域性。PCNA陽性信號(hào)為棕黃色，定位于細(xì)胞核，見圖2b。

2.4 鼻咽癌原發(fā)灶的FDG攝取和腫瘤細(xì)胞HK-II，PCNA表達(dá)的關(guān)系

鼻咽癌組織FDG攝?。⊿UVmax）和HK-II表達(dá)的細(xì)胞陽性率呈顯著相關(guān)（r=0.493，P=0.001），見圖 3；鼻咽癌組織FDG攝?。⊿UVmax）和PCNA表達(dá)的細(xì)胞陽性率無相關(guān)（r=0.135，P=0.407），見圖 4。

3 討論

近年來18F-FDG的PET顯像廣泛應(yīng)用于臨床的惡性腫瘤的診斷，標(biāo)記了18F的脫氧葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)到腫瘤細(xì)胞內(nèi)，被己糖激酶磷酸化為18F-FDG-磷酸，但FDG不能繼續(xù)參加代謝，就堆積在細(xì)胞內(nèi)，能夠通過PET顯像直接觀察。鼻咽癌的SUV值較高，高于其他頭頸部惡性腫瘤的報(bào)道[5-7]，說明其高代謝和生長增殖的旺盛，腫瘤原發(fā)灶的FDG攝取與T分期相關(guān)，與腫瘤分化程度無明顯相關(guān)，與報(bào)道的頭頸部腫瘤的FDG攝取情況相似[6-8]。

葡萄糖的利用，首先是標(biāo)記了18F的脫氧葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)到腫瘤細(xì)胞內(nèi)，其次被己糖激酶磷酸化為18F-FDG-磷酸，不能繼續(xù)參加代謝，堆積在細(xì)胞內(nèi)，通過PET顯像直接觀察，HKII是最重要的己糖激酶。本研究發(fā)現(xiàn)，40例鼻咽癌組織中HK-II都有過表達(dá)，染色陽性細(xì)胞率為68.33%，并且集中在IV～V級(jí)，雖然本組病例均為早期，但鼻咽癌分化程度差，倍增時(shí)間短，因此代謝旺盛，能量需求高，與其它中晚期頭頸癌的HK-II表達(dá)程度相似[2-5]。本組鼻咽癌組織FDG攝取（SUVmax）和HK-II表達(dá)的細(xì)胞陽性率顯著相關(guān)，與部分頭頸部惡性腫瘤的研究結(jié)果接近，說明腫瘤組織HK-II的過度表達(dá)對(duì)攝取FDG起到重要作用[3-5]。

PCNA是DNA聚合酶δ的輔助蛋白，在細(xì)胞周期的G1晚期出現(xiàn)，靜止期細(xì)胞（G0）含量很少，其表達(dá)能夠反映細(xì)胞的增殖狀態(tài)。PCNA在鼻咽癌組織中常過表達(dá)，并且與腫瘤的臨床分期，頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)[9]。我們研究的40例鼻咽癌標(biāo)本全部都有PCNA表達(dá)，陽性細(xì)胞率為36.18%，與以往報(bào)道相似[9-10]。

18F-FDG攝取增加是惡性細(xì)胞對(duì)其所處特殊生理微環(huán)境的反應(yīng)，惡性腫瘤快速生長、增殖，代謝旺盛，能量供應(yīng)相對(duì)不足，則細(xì)胞增加18F-FDG的攝取以滿足能量需求，因此理論上腫瘤細(xì)胞的增殖會(huì)影響腫瘤18F-FDG的攝取，但既往的研究中二者的關(guān)系則存在爭議。在小樣本的淋巴瘤和非小細(xì)胞肺癌研究中，18F-FDG與腫瘤組織增殖相關(guān)[11-12]。然而卵巢腺癌和胰腺癌的FDG攝取似乎和增殖無關(guān)[13-14]。本組研究顯示，鼻咽癌的18F-FDG攝取與腫瘤細(xì)胞的PCNA蛋白表達(dá)無相關(guān)。本研究入選病例為I，II期的鼻咽癌，目的是希望減少患者臨床資料的異質(zhì)性，但是鼻咽癌的PCNA蛋白表達(dá)是與腫瘤分期情況相關(guān)的[9-10]，所以我們的結(jié)果也僅初步顯示了早期鼻咽癌FDG攝取和細(xì)胞增殖的關(guān)系，中晚期鼻咽癌的情況還有待進(jìn)一步的研究。

綜上所述，鼻咽癌的FDG攝取與腫瘤組織的HK-II過度表達(dá)有關(guān)，而和PCNA表達(dá)無關(guān)，18F-FDG的PET顯像得到的腫瘤的SUV值反映了鼻咽癌組織的葡萄糖代謝情況，而非增殖情況。

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