失血性休克大鼠血清TXB2等內(nèi)源性介質(zhì)水平變化及意義

許會彬，王化芬，王 青，王永清，劉文清，崔 慶

失血性休克（hemorrhagic shock，HS）是引起急診創(chuàng)傷患者死亡的首要因素，大量研究表明“炎性瀑布”及多器官功能衰竭是導(dǎo)致患者死亡的主要因素之一。在休克的發(fā)展過程中內(nèi)源性介質(zhì)起著重要的作用，它們相互影響、相互作用，共同促進(jìn)休克的發(fā)生和發(fā)展。近年來，有關(guān)介質(zhì)作用的研究受到廣泛關(guān)注，已成為研究休克的熱點(diǎn)[1-4]。本研究擬對不同程度HS及中度HS不同時相的大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α及8-iso-PGF2α水平進(jìn)行檢測（由于重度HS存活時間相對較短，本文未就重度HS不同時相大鼠的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行觀測），以探討TXB2、6-keto-PGF1α及8-iso-PGF2α水平與休克程度及時相的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 動物分組與模型制作 雄性Wistar大鼠50只，體重（250±10）g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心提供。隨機(jī)分為5組（每組10只）：正常對照（SHS）組；重度失血性休克 （RHS）組；中度失血性休克（MHS），按休克后采血時間的不同再將MHS組分為休克 30 min（MHS-30 min）組、休克 60 min（MHS-60 min）組及休克 120 min（MHS-120 min）組。各休克組以1%戊巴比妥鈉（35 mg/kg，ip）麻醉，左側(cè)股動脈插管連于恒流泵以備放血，1 kU/kg肝素鈉左側(cè)股靜脈注射使全血肝素化，手術(shù)燈照射給動物保溫。以控壓梯度放血模式，分三階段放血。動物手術(shù)后穩(wěn)定10 min，開始快速放血，此時記為失血模型的 0 min。RHS組第一階段：放血（10±1）min使平均動脈壓降至（35±1） mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），微量調(diào)整失血量維持血壓穩(wěn)定10 min；第二階段：微量調(diào)整失血量維持血壓在（40±1）mmHg，穩(wěn)定15 min；第三階段：微量調(diào)整失血量維持血壓在（45±1） mmHg，穩(wěn)定 30 min，三階段放血完畢，制成RHS模型。模型制成60 min后，快速從股動脈采血。MHS組三階段血壓分別控制在（55±1）mmHg、（60±1） mmHg及（65±1）mmHg。 MHS 組按模型制成后采血時間的不同又分為三組，即在模型制成后，分別在30、60和120 min快速從股動脈采血。SHS組除不通過股動脈放血致休克處理外，其余同HS組。1.2 儀器與試劑 酶標(biāo)儀由BIO-RAD公司生產(chǎn)，TXB2、6-keto-PGF1α 及 8-iso-PGF2α 試劑盒由美國ADL公司生產(chǎn)。

1.3 檢測方法 TXB2、6-keto-PGF1α 及 8-iso-PGF2α檢測均應(yīng)用ELISA方法。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS11.5軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)求出均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），各組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組 TXB2、6-keto-PGF1α 及 8-iso-PGF2α 水平及 （T/K） 比值 ①M(fèi)HS組及 RHS組 TXB2、6-keto-PGF1α及8-iso-PGF2α水平均顯著高于SHS組（P 均<0.01）；②RHS 組與 MHS 組比較，TXB2及8-iso-PGF2α 水平顯著升高（P<0.01），6-keto-PGF1α水平顯著降低 （P<0.05）；MHS組及RHS組T/K比值顯著高于SHS組（P均<0.01），RHS組較MHS組T/K比值顯著升高（P<0.01）。見表1。

2.2 MHS 三不同時相組之間 TXB2、6-keto-PGF1α及8-iso-PGF2α水平及（T/K）比值 ①TXB2水平呈上升-下降-上升的趨勢（三組水平均高于SHS組），三組間兩兩比較，TXB2水平均具有顯著性差異（P<0.01），MHS-120 min 組水平最高； ②6-keto-PGF1α水平呈上升-上升-下降的趨勢 （三組水平均高于SHS組），三組間兩兩比較，6-keto-PGF1α水平均具有顯著性差異（P<0.01），MHS-60 min組水平最高；③8-iso-PGF2α水平隨休克時間的延長呈持續(xù)上升的趨勢，三組間兩兩比較，8-iso-PGF2α水平均具有顯著性差異（P<0.01）；④T/K比值呈上升-下降-上升的趨勢（三組水平均高于SHS組），三組間兩兩比較，T/K比值均具有顯著性差異（P<0.01），MHS-120 min組T/K比值最高。見表2。

表 1 MHS組、RHS組及SHS組血漿脂類介質(zhì)水平±s）

表 1 MHS組、RHS組及SHS組血漿脂類介質(zhì)水平±s）

與 SHS 組比較，△P<0.01；與 RHS 組比較，＃P<0.01；與 RHS 組比較，*P<0.05

組別 n TXB2（pg/ml） 6-keto-PGF1α（ng/ml） T/K 8-iso-PGF2α（pg/ml）SHS 組 10 165.99±26.99 14.33±1.65 11.58±1.31 77.20±14.96 MHS 組 30 560.96±87.88△ 34.52±2.01△ 16.25±1.79△ 121.59±27.55△RHS 組 10 653.11±60.68△＃ 26.42±3.58△* 24.72±1.98△＃ 229.20±52.48△＃

與 SHS 比較，△P<0.01；與 MHS-60 比較，＃P<0.01；與 MHS-60 比較，*P<0.05；與 MHS-120 比較，☆P<0.01

3 討論

HS是一個危急的進(jìn)行性的病理過程，救治時機(jī)至關(guān)重要。HS的有效救治時間為傷后1 h，稱為“黃金時間”（Golden Hour），很多傷者因?yàn)槌^了救治的“黃金時間”而死亡。這主要是因?yàn)樵诩毙允а孕菘藯l件下會造成機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)過度，從而引發(fā)一系列的“炎性連鎖反應(yīng)”，機(jī)體會產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞因子，進(jìn)而產(chǎn)生自由基等物質(zhì)，全身血液灌注障礙，血流減緩又會造成微循環(huán)障礙[5，6]。由于細(xì)胞損傷的不斷加重，出現(xiàn)多器官功能障礙，造成休克的惡性循環(huán)，此時全身血管反應(yīng)性降低，使休克向難治性階段不可逆發(fā)展，亦即轉(zhuǎn)變成了使用常規(guī)治療失血性休克的方法和手段都無效的難治性休克[7]。而炎性損傷、自由基損傷及其導(dǎo)致的多器官功能障礙成為創(chuàng)傷和休克的常見并發(fā)癥和主要死亡原因。因此在急性失血的早期及時監(jiān)測機(jī)體的炎癥反應(yīng)，給予有效的抗炎、抗自由基損傷的藥物，阻斷炎性瀑布的啟動，打斷休克的惡性循環(huán)，防止休克后器官功能障礙成為臨床工作人員及科研工作者關(guān)注的熱點(diǎn)。

血栓素 A2（thromboxane，TXA2）是一種強(qiáng)烈的縮血管物質(zhì)，主要來源于血小板。LDL、白三烯B4和D4等都可刺激內(nèi)皮細(xì)胞合成TXA2。該產(chǎn)物非常不穩(wěn)定，在體液中的壽命僅30 s，而迅速變成穩(wěn)定產(chǎn)物TXB2。 前列環(huán)素（prostacyclin PGI2）為花生四烯酸代謝產(chǎn)物，它是血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種前列腺素族物質(zhì)，具有強(qiáng)烈的舒張血管與抑制血小板功能的作用。PGI2的半衰期只有6 min，它在血漿中迅速代謝為6-酮-PGF1α。正常情況下，兩者處于動態(tài)平衡之中，從而保持血管一定的緊張性并控制著血小板的聚集與血栓形成。因此，測定TXB2、6-keto-PGF1α的含量可以反映TXA2和PGI2的變化。8-異前列腺素 F2α（8-iso-PGF2α）是細(xì)胞生物膜的花生四烯酸經(jīng)自由基脂質(zhì)過氧化作用后產(chǎn)生的特異性產(chǎn)物，屬非酶催化的脂質(zhì)過氧化物，是衡量機(jī)體氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化損傷強(qiáng)度的理想指標(biāo)[8，9]。同時8-iso-PGF2α還具有多種重要的生物學(xué)活性：①促進(jìn)炎癥反應(yīng)；②促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子的表達(dá)和中性粒細(xì)胞的活性及粘附力；③具有較強(qiáng)的極性，氧化損傷后細(xì)胞膜上8-iso-PGF2α增多，使細(xì)胞膜的完整性進(jìn)一步受到破壞，流動性發(fā)生改變，導(dǎo)致細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能受損，甚至引起細(xì)胞死亡；④促進(jìn)自由基的產(chǎn)生及血小板的粘附、聚集和變形[10-13]。

本研究對HS大鼠血漿TXB2、6-keto-PGF1α及8-iso-PGF2α進(jìn)行了檢測，同時對TXB2/6-keto-PGF1α（T/K）比值進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示：（1）各組TXB2水平比較：①M(fèi)HS各組及RHS組TXB2水平均顯著高于SHS組（P均<0.01）；②RHS組與MHS組比較，TXB2水平顯著升高（P<0.01）；③MHS 三不同時相組之間比較：TXB2水平呈上升-下降-上升的趨勢，三組間兩兩比較，TXB2水平均具有顯著性差異（P<0.01），MHS-120 min組水平最高；該結(jié)果提示隨著HS的加重，機(jī)體炎癥反應(yīng)增強(qiáng)；在HS早期機(jī)體就出現(xiàn)了較強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)；隨后機(jī)體出現(xiàn)代償反應(yīng)，炎性反應(yīng)有所緩解；而隨著HS持續(xù)時間的延長，機(jī)體可能出現(xiàn)失代償，導(dǎo)致炎性反應(yīng)進(jìn)一步加??；（2）各組6-keto-PGF1α水平比較：①M(fèi)HS各組及RHS組6-keto-PGF1α水平均顯著高于SHS組（P均<0.01）；②RHS組與 MHS組比較，6-keto-PGF1α 水平顯著降低（P<0.05）；③MHS三不同時相組之間比較：6-keto-PGF1α水平呈上升-上升-下降的趨勢，三組間兩兩比較，6-keto-PGF1α水平均具有顯著性差異（P<0.01），MHS-60 min組水平最高；該結(jié)果提示HS狀態(tài)，機(jī)體在炎癥刺激下，出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，機(jī)體抗炎機(jī)制啟動；而隨著HS程度的加重，機(jī)體的抗炎反應(yīng)減弱，說明在HS早期機(jī)體就出現(xiàn)了較強(qiáng)的抗炎反應(yīng)，以緩解炎性刺激；而隨著HS持續(xù)時間的延長，機(jī)體的抗炎反應(yīng)開始減弱；（3）各組8-iso-PGF2α水平比較：①M(fèi)HS各組及RHS組8-iso-PGF2α 水平均顯著高于SHS組 （P均<0.01）；②RHS組與MHS組比較，8-iso-PGF2α水平顯著升高（P<0.01）；③MHS三不同時相組之間比較：8-iso-PGF2α水平隨休克時間的延長呈持續(xù)上升的趨勢，三組間兩兩比較，8-iso-PGF2α水平均具有顯著性差異（P<0.01），提示細(xì)胞膜的損傷隨著HS程度的加重或/和HS時間的延長而加??；另一方面，高水平的8-iso-PGF2α具有多種生物學(xué)功能，可能進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)，加劇細(xì)胞結(jié)構(gòu)及功能的損傷；（4）各組 TXB2/6-keto-PGF1α（T/K）比值比較：①M(fèi)HS 各組及 RHS組 T/K比值顯著高于 SHS組 （P均<0.01）；②RHS組與MHS組比較，T/K比值顯著升高（P<0.01）；③MHS三不同時相組之間比較：T/K比值呈上升-下降-上升的趨勢，三組間兩兩比較，T/K比值均具有顯著性差異（P<0.01），MHS-120 min組T/K比值最高，提示HS時，由于組織缺氧，組胺釋放，補(bǔ)體系統(tǒng)的激活等因素作用，粘附聚集的PLT產(chǎn)生TxA2增多；同時血管內(nèi)皮因缺氧，酸中毒或內(nèi)毒素作用而受損，PGI2生成減少，導(dǎo)致TxA2占優(yōu)勢的TxA2-PGI2平衡失調(diào)而促進(jìn)PLT進(jìn)一步聚集，微血管形成，加重組織損傷，引起血壓下降。另一方面在HS起始階段機(jī)體即出現(xiàn)了強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)；隨后機(jī)體出現(xiàn)代償反應(yīng)，在抗炎性機(jī)制啟動后，炎性反應(yīng)有所緩解；隨著HS時間的持續(xù)，抗炎機(jī)制減弱，炎癥反應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)。TXB2、6-keto-PGF1α及8-iso-PGF2α均為生物膜上花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，與HS狀態(tài)機(jī)體的炎癥反應(yīng)密切相關(guān)；另一方面，它們均發(fā)揮多種生物學(xué)功能，對HS狀態(tài)花生四烯酸的代謝可能進(jìn)行反饋調(diào)節(jié)。

綜上說明，檢測 TXB2、6-keto-PGF1α 及 8-iso-PGF2α的變化對了解HS狀態(tài)機(jī)體炎癥反應(yīng)具有重要意義，為失血性休克的救治提供新的思路和干預(yù)靶點(diǎn)。

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