胎兒安方對(duì)先兆流產(chǎn)大鼠β-HCG、TXB2及6-Keto-PGF1 α水平的影響

張 瑾 袁惠霞 西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院產(chǎn)科 (西安 710038)

胎兒安方是導(dǎo)師袁惠霞教授根據(jù)多年中醫(yī)藥保胎經(jīng)驗(yàn),依據(jù)“凡出血,必有瘀血”、“血以流為貴,以滯為患”、“瘀血不去,新血不得歸經(jīng)”等理論,在壽胎丸基礎(chǔ)上加減變化而來(lái),具有益氣補(bǔ)腎,和血安胎之效,且臨床運(yùn)用療效顯著。為了探索胎兒安方用于先兆流產(chǎn)的保胎作用機(jī)理,我們?cè)O(shè)立了動(dòng)物實(shí)驗(yàn),現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下:

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及來(lái)源 選取清潔級(jí)SD雌性大鼠 60只(未孕 ,體重 180～220g,周齡 10W～12W)和清潔級(jí) SD雄性大鼠 30只,體重 230g～250g。由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

1.2.1 藥品及試劑 胎兒安方:菟絲子 15g,黃芪 20g,川斷、丹參、白芍、杜仲各 10g,川芎、蘇梗各6g,煎成濃縮液,放冰箱 4℃保存;黃體酮注射液:10mg/mL浙江仙居制藥股份有限公司生產(chǎn);催產(chǎn)素注射液:10u/mL安徽豐原藥業(yè)有限公司馬鞍山藥廠

1.3 實(shí)驗(yàn)方法及步驟

1.3.1 分組及給藥:將雌性受孕大鼠隨機(jī)分為 6組,每組10只。 A組:空白組;B組:模型組;C組:胎兒安方小劑量組,4.74g/kg/d灌胃;D組:胎兒安方中劑量組 9.48g/kg/d灌胃;E組:胎兒安方大劑量組,18.96g/kg/d灌胃;F組:黃體酮組,6mg/kg隔天肌注。

從妊娠第 5天起,B組每只按 2mL/d的劑量灌服生理鹽水;C、D、E組分別灌服胎兒安方小、中、大劑量,每日 1次,共 4次(大鼠藥物用量按人與動(dòng)物體表面積的等效比值表折算[3]);F組隔天肌注黃體酮 1次,共 2次。孕 9～10d采用張晉峰等[2]的報(bào)道,用針刺加催產(chǎn)素的方法建立先兆性流產(chǎn)動(dòng)物模型,孕11d起按原劑量與方法繼續(xù)用藥 3d,孕 14d將大鼠處死后采用放免法檢測(cè)血清β-HCG、TXB2及 6-Keto-PGF1 α的含量。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用 t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn) ,P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 造模前后各組大鼠體重改變 經(jīng)妊娠及各種不同的方法給藥后,各組大鼠在體重方面較前有明顯增加;在活動(dòng)方面,A、D、E、F組的大鼠較 B、C組明顯增多;在進(jìn)食量方面,A、D、E、F組大鼠也較 B、C組明顯增多;經(jīng)針刺與催產(chǎn)素共同作用的 B、C、D、E和 F組大鼠均出現(xiàn)不同程度的陰道出血,但未見(jiàn)妊娠產(chǎn)物排出,說(shuō)明應(yīng)用該方法造模是成功的。造模后,因操作等方面原因 ,B組 1只大鼠完全流產(chǎn),E組 1只大鼠造模失敗,未流產(chǎn),D組 1只大鼠針刺時(shí)意外死亡,剩余大鼠均造模成功,故后期實(shí)驗(yàn)剔除以上 3只大鼠。造模前后各組大鼠體重改變見(jiàn)表 1:

表1 各組大鼠造模前后體重比較()

表1 各組大鼠造模前后體重比較()

組別 n 造模前體重(g) 造模后體重(g)A組 10 243.0014.18 263.0010.59 B組 9 235.5517.40 251.1112.69 C組 10 228.0019.32 256.0021.71 D組 9 224.4412.36 247.7717.16 E組 9 230.0021.21 247.7719.22 F組 10 221.0012.87 246.0018.37

表1結(jié)果顯示:各組大鼠造模后體重較造模前均有增高,其中 D、E組增高較多,C、F組增高較少,B組最少,但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn)),各組大鼠造模前后體重?zé)o差異(P＞0.05)。組間比較,B、C、D、E、F組與正常妊娠 A組造模前體重、造模后體重分別比較,均無(wú)差異(P＞ 0.05)。

2.2 各組大鼠子宮濕重、胚胎數(shù)、子宮內(nèi)有瘀血例數(shù)比較解剖后肉眼見(jiàn) A組正常妊娠的 10只大鼠子宮呈結(jié)節(jié)狀膨大,色紅潤(rùn),周圍血供豐富,解剖后見(jiàn)胚胎完好;其余 5組大鼠子宮膨大的結(jié)節(jié)明顯小于 A組,而且胚胎之間界限不明顯,有些胚胎有明顯瘀血痕跡,有些大鼠子宮無(wú)膨大結(jié)節(jié),形狀似未孕大鼠,但子宮周圍可見(jiàn)明顯充血;但胎兒安方各劑量組大鼠子宮有瘀血例數(shù)較 B組少,見(jiàn)表 2:

表2 各組大鼠子宮濕重、胚胎數(shù)、子宮內(nèi)有瘀血例數(shù)比較()

表2 各組大鼠子宮濕重、胚胎數(shù)、子宮內(nèi)有瘀血例數(shù)比較()

注:與 E組相比,△ P＜0.05

組別 n 子宮濕重(g) 胚胎數(shù)(個(gè))子宮內(nèi)有瘀血例數(shù)(%)A組 10 1.3470.154 9.401.65△ 0(100)B組 9 1.2030.153 4.891.83 6(66.7)C組 10 1.2240.203 7.001.70 5(50)D組 9 1.3460.164 10.113.02 4(44.4)E組 9 1.3220.152 11.672.78 3(33.3)F組 10 1.2760.179 8.202.86△ 4(40)

表2結(jié)果顯示:各組大鼠的子宮濕重和子宮內(nèi)有瘀血例數(shù)相比,均無(wú)差異(P＞0.05);E組較 F組和 A組的孕胎個(gè)數(shù)多,相比有差異(P＜0.05)。

2.3 各組大鼠血清中β-HCG含量對(duì)比 見(jiàn)表 3。

表3 各組大鼠血清中β-HCG含量對(duì)比()

表3 各組大鼠血清中β-HCG含量對(duì)比()

注:與 B組相比 ,△P＜0.05,▲P＜0.01;與 F相比,◇P＞ 0.05

組別 n β-HCG(mIu/mL)A組 10 15.182.24▲B(niǎo)組 9 10.872.56 C組 10 12.931.61△◇D組 9 13.692.09△◇E組 9 14.122.61◇F組 10 14.451.83▲

表3標(biāo)明,模型組大鼠血清β-HCG含量較空白組明顯降低 (P＜0.01);與模型組相比 ,用藥后各組大鼠血清β-HCG均有上升(P＜0.05),其中西藥組上升較明顯(P＜0.01);但中藥各劑量組與西藥組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05),中藥各劑量組之間也無(wú)明顯差異(P＞0.05)。

2.4 各組大鼠血清中 TXB2及 6-Keto-PGF1 α含量對(duì)比見(jiàn)表 4。

表4 各組大鼠血清中 TXB2及 6-Keto-PGF1α含量對(duì)比()

表4 各組大鼠血清中 TXB2及 6-Keto-PGF1α含量對(duì)比()

注:與 B組相比,△P ＜0.05,▲P＜0.01;與 F相比,◇P＜0.05

A組 10 269.4440.69▲◇ 254.4722.95▲B(niǎo)組 9 355.4237.54 188.7149.28 C組 10 307.8725.50▲ 232.9432.04△D組 9 284.2329.47▲◇ 241.7727.22△E組 9 289.3319.07▲◇ 244.9721.08▲F組 10 317.9635.24△ 242.3551.02△)

TXB2方面:中藥各劑量組及西藥組大鼠體內(nèi) TXB2含量較模型組明顯降低(P＜0.05或 P＜0.0l),但中藥中、大劑量組較西藥組下降明顯(P＜0.05);中藥各劑量組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。說(shuō)明胎兒安方有降低體內(nèi) TXB2的作用,其效果較黃體酮效好。

6-Keto-PGF1α方面:中藥各劑量組與西藥組血漿中 6-Keto-PGF1α的含量較模型組均有升高(P＜0.05或 P＜0.0l),其中中藥大劑量組升高較明顯(P＜0.01);但中藥各劑量組與西藥組相比無(wú)明顯差異(P＞0.05);中藥各劑量組之間相比也無(wú)明顯差異(P＞0.05)。說(shuō)明胎兒安方有升高體內(nèi) 6-Keto-PGF1 α的作用 ,其效果與黃體酮相當(dāng)。

2.5 子宮病理切片 光鏡下觀察 A組正常妊娠大鼠子宮內(nèi)蛻膜組織正常,未見(jiàn)充血壞死,胚胎發(fā)育正常;B組可見(jiàn)胎盤(pán)部分充血壞死,絨毛結(jié)構(gòu)模糊,面積減少,部分絨毛纖維素化,絨毛間隙增寬,有炎細(xì)胞滲出(以中性粒細(xì)胞為主);中藥治療組蛻膜完整 ,絨毛面積增寬,間隙變窄,充血及炎細(xì)胞滲出較B組減少。

3 討 論 導(dǎo)師袁惠霞教授在治療先兆流產(chǎn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),大部分先兆流產(chǎn)患者除陰道少量出血及小腹痛外,B超提示常伴有宮內(nèi)少量積血,或化驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抗心磷脂抗體為陽(yáng)性。依據(jù)腎為先天之本,元?dú)庵?主人體生長(zhǎng)發(fā)育、生殖,胞絡(luò)系于腎,腎虛則胎失所系、沖任不固,故安胎先補(bǔ)腎 ,腎氣足胎自安;而人體又是一個(gè)有機(jī)整體,有賴于氣血的正常運(yùn)行,氣血貴流不宜滯,以流為貴、以通為順,今血行于脈外而不歸經(jīng),必有出血,凡出血必有瘀血,瘀血阻于胞脈,影響氣血運(yùn)行,再次成為致病因素,導(dǎo)致血瘀氣滯,瘀血不去,新血不能歸經(jīng),流于脈外而妄行。對(duì)于此類癥候,導(dǎo)師辯證為腎虛血瘀 ,并創(chuàng)導(dǎo)了安胎必和血,血和瘀去胎自安的理論,于補(bǔ)腎藥中加入活血化瘀之品,組方胎兒安方。本方組成為菟絲子 15g,川斷、丹參、白芍、杜仲各 10g,黃芪 20g,川芎、蘇梗各 6g。

方中菟絲子味辛甘平,入肝腎經(jīng),治腎虛體弱,可平補(bǔ)腎陰腎陽(yáng),固沖任。羅元愷認(rèn)為“菟絲子又補(bǔ)陽(yáng)又補(bǔ)陰,不辛燥,不滋膩,為安胎首選”。哈荔田認(rèn)為在補(bǔ)腎安胎藥中選用菟絲子、杜仲、川斷等,可于陰中求陽(yáng),水中補(bǔ)火,守而能走,效果滿意。配伍川斷滋腎育胎,共為君藥。黃芪長(zhǎng)于補(bǔ)脾肺之氣,為補(bǔ)氣要藥,補(bǔ)而不滯,且能升舉陽(yáng)氣,維系胞脈,固攝胎元;丹參性寒味苦,寒能涼血,功善活血化瘀,能祛瘀生新而不傷正,其活血養(yǎng)血作用廣為醫(yī)者所用?！度杖A子本草》記載丹參可“破宿血,補(bǔ)新生血,安生胎,落死胎”,川芎辛散溫通,為血中之氣藥,能行氣止痛安胎 ,三者共為臣藥,共奏和血活血、行瘀安胎之效。白芍味苦酸微寒,既可養(yǎng)血柔肝 ,又可緩急止痛安胎,與杜仲共為佐藥。蘇梗味辛甘,理氣散郁,止痛安胎為使藥。眾藥相伍,益氣補(bǔ)腎則腎精足胎自安,和血使瘀去血行,新血得生,改善胎兒供血,使胎兒正常發(fā)育至足月而娩。

現(xiàn)代藥理研究[4～5]證明,補(bǔ)腎益氣藥有促黃體功能的作用,能促進(jìn)垂體釋放黃體生成素,且能直接或間接作用于卵巢,促使孕酮合成和分泌?；钛鏊巹t具有改善血液循環(huán),擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)和血液的粘聚狀態(tài)、調(diào)節(jié)血小板功能等作用,另外還可提高機(jī)體免疫功能。胎兒安方中菟絲子具有雌激素樣活性,可促進(jìn)卵巢黃體的形成,促進(jìn)子宮及胚胎發(fā)育;黃芪對(duì)機(jī)體免疫功能有調(diào)節(jié)作用,并可升高白細(xì)胞;丹參具有明顯的對(duì)抗血栓形成作用,能改善血瘀患者微循環(huán)和血液流變學(xué)特性,促進(jìn)血液循環(huán),并有緩解平滑肌痙攣的作用;川芎所含的阿魏酸小劑量可促進(jìn)子宮平滑肌舒張;白芍具有抗血栓,增強(qiáng)免疫功能的作用;杜仲煎劑能松弛子宮平滑肌,使其恢復(fù)正常狀態(tài)。蘇梗有提高機(jī)體的非特異性免疫功能。正是由于這些藥物協(xié)同作用的結(jié)果,才使全方能增加體內(nèi) β-HCG含量,改善 TXB2及6-Keto-PGF1α二者的平衡 ,從而改善微循環(huán),擴(kuò)張血管,改善子宮缺血缺氧狀態(tài),起到防治先兆流產(chǎn)的作用。

[1]樂(lè) 杰.婦產(chǎn)科學(xué) [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004,6:91.

[2]沈映君.中藥藥理學(xué) [M].上海:上海科技出版社,1997,1:12.

[3]張晉峰,張玉芬,劉光珍,等.孕安沖劑治療先兆流產(chǎn)的臨床及實(shí)驗(yàn)研究 [J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2000;20(4):253.

[4]李承珠,林嘉寶,楊詩(shī)春,等.丹參素對(duì)血小板釋放血管收縮物質(zhì)的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志.1984,4(9):565.

[5]侯家玉.中藥藥理學(xué) [M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社.2002,1:132.