保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠降糖及腎保護(hù)作用研究

陳慧琴

（江銅集團(tuán)東銅醫(yī)院，江西東鄉(xiāng) 331812）

保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠降糖及腎保護(hù)作用研究

陳慧琴

（江銅集團(tuán)東銅醫(yī)院，江西東鄉(xiāng) 331812）

目的：探討保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：將SD大鼠分為6組，測定第1、8周血清肌酐及血清胰島素、胰高血糖素、糖化血紅蛋白等生化指標(biāo)和尿液各項指標(biāo)；取腎上腺皮質(zhì)測定SOD、GSH-Px、MDA、NO2-/NO3-和NOS，評價保腎降糖膠囊的降糖作用及對糖尿病腎病的保護(hù)作用。結(jié)果：給藥保腎降糖膠囊60 d后，高劑量組和中劑量組大鼠的血糖值明顯降低，血清肌酐清除率顯著增加，尿微量清蛋白排泄率明顯降低，血清胰島素明顯升高，胰高血糖素、糖化血紅蛋白、尿微量清蛋白均顯著降低；腎上腺皮質(zhì)中的T-SOD、GSH-Px、NO2-/NO3-、NOS含量增加，MDA含量顯著降低。結(jié)論：保腎降糖膠囊可降低糖尿病大鼠的血糖，明顯減輕糖尿病大鼠蛋白尿，改善腎小球濾過率。通過提高抗氧化酶活性、清除ROS、增加NOS活性從而延緩腎小球硬化進(jìn)程，減輕糖尿病腎病并發(fā)癥。

保腎降糖膠囊；降糖；糖尿病腎病

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制之一，臨床與實驗研究均發(fā)現(xiàn)抗氧化劑可延緩糖尿病腎病發(fā)展進(jìn)程，對糖尿病腎病具有明顯的保護(hù)作用。保腎降糖膠囊主要由黃芪、山藥、生地黃、枸杞子、葛根、赤芍等中藥組成，具有滋陰補(bǔ)腎，除煩消渴的功效?，F(xiàn)代研究表明組成復(fù)方的多種藥物具有較強(qiáng)的抗氧化作用，同時，黃芪、生地黃及葛根等藥物還具有降血糖的作用。本研究旨在初步探討保腎降糖膠囊的降糖藥理作用及其對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)機(jī)制，為保腎降糖膠囊在糖尿病及其腎病的治療提供有力的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

SD 大鼠，體重（180±20）g，雄性，由上海斯萊克實驗動物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(滬)2003-0003。

1.2 藥物

保腎降糖膠囊主要由黃芪、山藥、生地黃、枸杞子、葛根、赤芍等中藥組成，具有滋陰補(bǔ)腎，除煩消渴的功效，取上述各藥物，90%乙醇提取后，藥物用水煎煮濃縮，混合后真空冷凍干燥，供實驗用。

1.3 儀器及試劑

鏈脲佐菌素：STZ，Sigma公司；文迪雅 （馬來酸羅格列酮片）：葛蘭素史克(天津)有限公司，4 mg/片，批號：08060126。 葡萄糖：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號：F20080128。全血血糖測定儀：GLUCOCARDTMG Meter GT-1080(Arkray,Inc,Kyoto,Japan)。血糖測定試紙條：G-sensor GLUCOCARDTM，批號：9C5B01。糖化血紅蛋白(HbA1c)、血清胰島素、尿微量清蛋白、肌酐、超氧化物歧化酶（SOD）、GSH-Px、丙二醛（MDA）、NO2-/NO3-和一氧化氮合成酶（NOS）由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 實驗方法

取健康雄性SD大鼠100只，尾靜脈注射STZ 60 mg/kg（溶于0.1 mmol/L pH4.5的枸櫞酸緩沖液）40 mg/kg，注射后72 h，斷尾取血測定血糖，選擇血糖值在20～33 mmol/L之間的大鼠，按血糖值隨機(jī)分為6組，分別為正常對照組、模型組、羅格列酮組(4 mg/kg)、保腎降糖膠囊高劑量組（16 g生藥/kg）、中劑量組（8 g生藥/kg）及低劑量組（4 g生藥/kg），每組 10只，灌胃給藥，連續(xù)給藥60 d，給藥體積10 ml/kg。最后一次給藥后收集24 h尿液，取血，離心取血清，測定空腹血糖（FBG）、糖化血紅蛋白(HbA1c)、血清胰島素、尿微量清蛋白，同時測定肌酐清除率 (CCr，1、8周血清肌酐)及尿微量清蛋白排泄率(UAE)。將動物處死，取左側(cè)8 mm3腎皮質(zhì)在分析天平上稱重，制成10%組織勻漿，離心取上清，測定腎皮質(zhì)SOD、GSHPx、MDA、NO2-/NO3-和 NOS。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠FBG、CCr、UAE的影響

實驗結(jié)果表明：注射STZ后，模型組的血糖明顯升高，血清肌酐清除率明顯降低，尿微量清蛋白排泄率明顯增加，與正常組比較均差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。給藥保腎降糖膠囊60 d后，高劑量組和中劑量組大鼠的血糖值明顯降低，血清肌酐清除率顯著增加，尿微量清蛋白排泄率明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05），提示保腎降糖膠囊可以降低大鼠的血糖，對腎臟的功能具有明顯的改善作用。實驗結(jié)果見表1。

與正常組比較，#P<0.01；與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05

2.2 保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠血清胰島素、胰高血糖素、尿微量清蛋白、HbA1c的影響

實驗結(jié)果表明：注射STZ后，由于其破壞了B細(xì)胞，使模型組大鼠胰島素降低，與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；同時模型組大鼠的胰高血糖素、尿微量清蛋白及糖化血紅蛋白均較正常組明顯增加（P＜0.01）。給藥保腎降糖膠囊60 d后，藥物組大鼠血清胰島素明顯升高，胰高血糖素、HbA1c、尿微量清蛋白均顯著降低，與模型組大鼠比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05）。 實驗結(jié)果見表 2。

表2 保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠血清胰島素、胰高血糖素、尿微量清蛋白、HbA1c的影響（x±s，n=10）Table 2 The renal sugar-down capsule diabetic rats serum insulin and glucagons and microalbuminuria and glycated hemoglobin(x±s,n=10)

2.3 保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠腎臟皮質(zhì)T-SOD、GSHPx、MDA、NO2-/NO3-、NOS 的影響

實驗結(jié)果表明：模型組大鼠注射STZ后，腎上腺皮質(zhì)中的 T-SOD、GSH-Px、NO2-/NO3-、NOS 含量明顯降低，MDA 含量則顯著增加，與正常組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。給藥保腎降糖膠囊60 d后，腎上腺皮質(zhì)中的T-SOD、GSHPx、NO2-/NO3-、NOS含量增加，MDA含量顯著降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.05），提示該復(fù)方藥物具有明顯的抗氧化作用。實驗結(jié)果見表3。

表 3 保腎降糖膠囊對糖尿病大鼠腎臟皮質(zhì)T-SOD、GSH-Px、MDA、NO2-/NO3-、NOS 的影響（x±s，n=10）Table 3 The renal sugar-down capsule diabetic rats renal cortex T-SOD,GSH-Px,MDA,NO2-/NO3-and NOS(x±s,n=10)

3 討論

糖尿病腎病(DN)是糖尿病嚴(yán)重而常見的并發(fā)癥，直接威脅糖尿病患者的預(yù)后[1]。目前DN已成為西方發(fā)達(dá)國家終末期腎病的首要原因，在我國也呈明顯增高趨勢。DN是在代謝紊亂與血流動力學(xué)基礎(chǔ)上，以高糖誘導(dǎo)的活性氧(ROS)、各種生長因子、血管活性物質(zhì)綜合作用的結(jié)果。活性氧通過對腎小球內(nèi)皮、上皮及系膜細(xì)胞的直接損傷和趨化作用，吸引中性粒細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞在血管周圍及血管內(nèi)浸潤，從而改變腎小球毛細(xì)血管和基底膜的通透性及腎小球內(nèi)血流動力學(xué)，造成大量持續(xù)性蛋白尿[2]。DN發(fā)展中自由基產(chǎn)生不斷增多，體內(nèi)抗氧化酶活性下降，信使蛋白結(jié)構(gòu)和功能改變，使NO滅活[3]。NO作為內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子可使細(xì)胞外基質(zhì)合成減少，分解增加而防止腎小球基質(zhì)中膠原纖維的積聚。研究發(fā)現(xiàn)，腎小球系膜區(qū)和基底Ⅳ膠原在DN時明顯增加，主要因為高糖和 AGEs使 ROS產(chǎn)生，ROS活化 PKC、MAPK和JAK-STAT 通道[4-5]，導(dǎo)致氧化應(yīng)激轉(zhuǎn)染因子如 NF-κB，AP-1，STAT和Egr-1迅速活化，從而增強(qiáng)TGF-β和CTGF基因編碼的轉(zhuǎn)活化使ECM蛋白表達(dá)上調(diào)[6]。資料報道，DN時NAPCD氧化和eNOS解偶聯(lián)導(dǎo)致腎小球ROS產(chǎn)生[6]，而氧化應(yīng)激可使NOS亞型表達(dá)下調(diào)，ROS介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化增加，用胰島素加抗氧化劑能夠使NOS亞型和ROS恢復(fù)正常[7]。本方經(jīng)臨床用于糖尿病患者有很好的療效，對糖尿病患者并發(fā)癥也有明顯的改善作用，為進(jìn)一步研究該復(fù)方治療糖尿病及其并發(fā)癥的作用機(jī)制，選擇大鼠注射STZ造成糖尿病模型后，連續(xù)給藥保腎降糖膠囊用于治療。研究結(jié)果表明[8-10]：保腎降糖膠囊可以增加糖尿病大鼠T-SOD及GSH-Px的活力，增強(qiáng)機(jī)體的還原抗氧化能力。SOD可以歧化O·-2生成H2O保護(hù)細(xì)胞不受氧自由基的損傷。糖尿病時，腎臟自由基防御機(jī)能下降，腎臟抗氧化酶活性減弱。保腎降糖膠囊抗氧化作用的機(jī)制一方面是對LPO直接作用，而主要是通過顯著升高SOD及GSH-Px活性而清除氧自由基，抑制膜脂質(zhì)過氧化。另一方面，保腎降糖膠囊還可以增加NOS的活性，從而增加NO2-/NO3-的含量。同時，該復(fù)方還可以降低大鼠血糖水平，促進(jìn)胰島素的釋放，抑制胰高血糖素及糖化血紅蛋白的生成。糖化血紅蛋白也是參與糖尿病血管性病變的主要因素之一，其生成量的增加促進(jìn)了血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，也會造成腎臟及神經(jīng)細(xì)胞的退化。從而改善糖尿病大鼠腎臟的排泄功能，保護(hù)糖尿病患者的腎性并發(fā)癥。因此，保腎降糖膠囊對糖尿病腎病保護(hù)作用與其降低血糖、促進(jìn)胰島素釋放及抗氧化作用密切相關(guān)，該復(fù)方可以作為一種廉價的治療糖尿病并發(fā)癥的藥物進(jìn)行開發(fā)，具有廣泛的臨床應(yīng)用價值。

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The kidney sugar-down capsule for rats hypoglycemic and renal protection

CHEN Huiqin(Jiangtong Dongtong Hospital,Jiangxi Province,Dongxiang 331812,China)

Objective:To study the kidney sugar-down capsule for diabetic rats renal protection function and mechanism.Methods:Made the SD rats were divided into 6 groups,the first 1,8 weeks,serum creatinine determination and serum insulin,glucagon,glycated hemoglobin and urine biochemical indicators;took adrenal cortex measured SOD,GSH-Px,MDA,NO2-/NO3-and NOS,evaluation and kidneys,and blood glucose and the hypoglycemic effect of capsule on diabetic nephropathy in rats.Results:Capsule administration and kidneys,and blood glucose 60 days after the high dose group and the middle dose group was significantly lower blood glucose,serum creatinine clearance rate was significantly increased,urinary albumin excretion rate was significantly lower,significantly higher serum insulin,pancreatic glucagon,glycated hemoglobin,microalbuminuria was significantly reduced;adrenal cortex in the T-SOD,GSH-Px,NO2-/NO3-,NOS was increased,MDA content was significantly reduced.Conclusion:Kidneys can reduce blood glucose of diabetic nephropathy,significantly reduce proteinuria in diabetic rats and improve the glomerular filtration rate.By increasing the activities of antioxidant enzymes to remove ROS,increase NOS activity and thus delay the process of glomerular sclerosis and reduce diabetic complications.

Kidneys;Sugar-down;Diabetic nephropathy

R587.1

A

1674-4721（2010）11（c）-015－03

2010-10-20）