• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    B7-H4與移植免疫

    2010-08-21 00:21:04金成彥趙吉光李金東張興義
    關(guān)鍵詞:調(diào)節(jié)性胰島負(fù)性

    金成彥,姜 睿,趙吉光,孫 梅,李金東,張興義*

    (1.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院 胸外科,吉林長(zhǎng)春 130041;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 骨科;吉林 長(zhǎng)春 130033;3.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院 心血管內(nèi)科,吉林 長(zhǎng)春 130041;4.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院 病理科,吉林 長(zhǎng)春 130041)

    B7-H4與移植免疫

    金成彥1,姜 睿2,趙吉光3,孫 梅4,李金東1,張興義1*

    (1.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院 胸外科,吉林長(zhǎng)春 130041;2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 骨科;吉林 長(zhǎng)春 130033;3.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院 心血管內(nèi)科,吉林 長(zhǎng)春 130041;4.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院 病理科,吉林 長(zhǎng)春 130041)

    B7-H4是2003年發(fā)現(xiàn)的B7家族成員,在T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫中起負(fù)調(diào)節(jié)作用,抑制T細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌。盡管其mR NA在淋巴組織和非淋巴組織均有表達(dá),但其蛋白質(zhì)在正常組織、細(xì)胞中不表達(dá)或極低表達(dá)。本文就B7-H4與移植免疫的相關(guān)研究進(jìn)展作一綜述。

    B7-H4;共刺激分子;移植;免疫學(xué)

    (Chin J Lab Diagn,2010,14:0954)

    在T細(xì)胞活化和耐受的免疫調(diào)節(jié)中,CD40:CDL,尤其是B7:CD28及家族成員介導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞共刺激信號(hào)傳導(dǎo)途徑起著至關(guān)重要的作用。它們不僅在啟動(dòng)、增強(qiáng)和維持T細(xì)胞應(yīng)答中提供了關(guān)鍵的正性信號(hào),而且還可提供重要的負(fù)性信號(hào)來(lái)限制、終止或削弱T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。T細(xì)胞活化需要識(shí)別雙信號(hào)系統(tǒng),即MHC-抗原肽提供的第一信號(hào)和共刺激分子提供的協(xié)同刺激信號(hào)。第一信號(hào)具有抗原特異性;第二信號(hào)是非抗原特異性的,但是T細(xì)胞抗原特異性激活所必需的,它決定抗原刺激的T細(xì)胞是進(jìn)入增殖、分化過(guò)程成為效應(yīng)細(xì)胞,還是進(jìn)入無(wú)反應(yīng)狀態(tài)或凋亡。共刺激分子中有正性和負(fù)性分子之分。免疫活化及反應(yīng)過(guò)程中,T細(xì)胞表達(dá)受體同時(shí)接受正性和負(fù)性共刺激信號(hào),免疫反應(yīng)的最終結(jié)局取決于免疫刺激和抑制系統(tǒng)平衡的結(jié)果,即正性和負(fù)性共刺激分子之間的平衡(圖1)。這些共激活分子多屬于B7分子。B7類(lèi)分子屬于免疫球蛋白超家族,成員間根據(jù)其氨基酸序列和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的特異性相互區(qū)別。B7類(lèi)分子胞外區(qū)含有單一IgV和IgC結(jié)構(gòu)域,并且有20-40%氨基酸相同,與T細(xì)胞表面其相應(yīng)受體結(jié)合后,在抗原特異性免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮正性或負(fù)性調(diào)控作用。在病毒感染、腫瘤、移植免疫排斥以及自身免疫性疾病過(guò)程中適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)或干預(yù)這些共刺激信號(hào),將有助于這些疾病的治療及改善疾病癥狀。

    圖1 移植免疫應(yīng)答

    近幾年,隨著新的共刺激信號(hào)分子不斷被發(fā)現(xiàn)及相關(guān)功能研究進(jìn)展,B7:CD28家族成員迅速增加。這些新成員包括 B7-H1/B7-DC/PD-1、B7-H2/ICOS、B7-H3、B7-H4和 BTLA 等。B7-H4(又稱(chēng) B7S1和B7x)是B7:CD28家族中的最新發(fā)現(xiàn)的一個(gè)成員,它能通過(guò)抑制T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞周期的進(jìn)程來(lái)負(fù)性調(diào)控T細(xì)胞的免疫應(yīng)答,而且在外周免疫耐受中可能具有非常重要的作用。本文就B7-H4與移植免疫的相關(guān)研究進(jìn)展作一綜述。

    1 B7-H4的結(jié)構(gòu)及功能特點(diǎn)

    2003年,Chen等三個(gè)實(shí)驗(yàn)室利用生物信息學(xué)的方法相繼發(fā)現(xiàn)了B7-H4分子這個(gè)B7家族新成員。他們是以現(xiàn)有的B7家族成員的胞外段可變區(qū)(IgV+IgC)為查詢(xún)序列,對(duì)GenBank中的EST序列(表達(dá)序列標(biāo)簽)進(jìn)行搜索時(shí)發(fā)現(xiàn)的,并在人胎盤(pán)cNDA文庫(kù)中得到了全長(zhǎng)序列。人B7-H4的cDNA長(zhǎng)約1.8 kb,位于人的染色體1p11.1,在基因組上跨越66 Kbp,含有6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子。第6個(gè)外顯子存在兩種可變剪切形式,由此產(chǎn)生兩種不同的剪切本。此外,在人染色體20p11.1有一個(gè)假基因(pseudogene),它在編碼區(qū)僅含有一個(gè)外顯子和兩個(gè)終止密碼子且與編碼B7-H4的cDNA在核酸水平的相似性高達(dá)94%。兩者之間在序列上的差異主要在IgV和IgC區(qū)。兩個(gè)終止密碼子分別位于第21位和540位,這兩個(gè)點(diǎn)分別為信號(hào)肽區(qū)和跨膜區(qū)的外側(cè),阻止了全長(zhǎng)B7-H4蛋白的合成。因此,這個(gè)可變的B7-H4基因組DNA被認(rèn)為是B7-H4的假基因。這個(gè)假基因的功能尚未明了,但據(jù)最近的報(bào)道所述能表達(dá)的假基因在調(diào)控與它同源的編碼基因mRNA的穩(wěn)定性上起著重要的作用。

    B7-H4表達(dá)在專(zhuān)職APC,并廣泛分布在非淋巴組織上。RT-PCR分析示,在胎盤(pán)、肝、骨骼肌、腎、胰腺、前列腺、睪丸、卵巢、小腸,有其mRNA表達(dá)。然而,用人B7-H4特異性單克隆抗體進(jìn)行免疫組化,從正常來(lái)源的上述組織中未發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。流式細(xì)胞術(shù)(FACS)分析示,新鮮分離的T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、DC表面無(wú)B7-H4表達(dá),在體外刺激后,能被誘導(dǎo)表達(dá)。FACS和RT-PCR顯示,即使在用TNF-α和IFN-γ刺激后,人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞也不表達(dá)B7-H4。鼠組織Northern雜交分析顯示,據(jù)組織類(lèi)型的不同,mB7-H4有4個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本。鼠B7-H4轉(zhuǎn)錄本在心臟、肺、肝、骨骼肌、腎、睪丸能檢測(cè)到,但在腦、脾未檢測(cè)到[1]。Chen等在人的B7-H4分子被鑒定的基礎(chǔ)上,利用類(lèi)似的生物信息學(xué)的方法找到了小鼠的B7-H4分子,該分子在蛋白結(jié)構(gòu)上與人B7-H4同源性高達(dá)87%,位于小鼠3號(hào)染色體上有6個(gè)編碼區(qū)。

    B7-H4基因有兩個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,分別為2.0 kb和800 bp,共同存在于各種組織中,不具有組織特異性。B7-H4(2.0 kb)的表達(dá)水平高于B7-H4(800 bp),兩者與全長(zhǎng)B7-H4 cDNA同源,包含外顯子I至V,B7-H4(800 bp)是外顯子VI被部分剪接的產(chǎn)物。B7-1和B7-2經(jīng)選擇性剪接得到某些跨膜區(qū)缺失的蛋白質(zhì)分子,與此剪接機(jī)制不同,兩種B7-H4分子的跨膜區(qū)均保持完整,只是3'非翻譯區(qū)不同,可能影響B(tài)7-H4基因的翻譯效率[2]。

    B7-H4 mRNA存在許多人體組織和器官中,如胎盤(pán) 、腎 、肝 、肺 、卵巢 、睪丸 、脾等 ,但在腦組織和心臟未發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。B7-H4在非淋巴組織中表達(dá)說(shuō)明其可能在這些組織中起到調(diào)控免疫應(yīng)答的作用。在胸腺中的少量細(xì)胞,如CD4、CD8等細(xì)胞中可以檢測(cè)到B7-H4表達(dá),而在B220+脾細(xì)胞中,B7-H4基因則呈現(xiàn)組成性表達(dá)的特點(diǎn),另外B7-H4還表達(dá)于CD11b+巨噬細(xì)胞和骨髓來(lái)源的CD11c+樹(shù)突狀細(xì)胞,B7-H4在大量專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞表達(dá)特征說(shuō)明其可能參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫應(yīng)答[3]。RT-PCR顯示,在所有組織中均檢測(cè)到mRNA。盡管B7-H4的mRNA廣泛的分布于正常組織,然而免疫組化研究顯示正常人的組織、器官表達(dá)均陰性表明,正常外周組織能在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)B7-H4的表達(dá)進(jìn)行嚴(yán)密的調(diào)控,同時(shí)提示該分子的表到可能具有重要功能[4]。已發(fā)現(xiàn),一些腫瘤細(xì)胞也呈組成性表達(dá)B7-H4,如卵巢癌[5]和肺癌細(xì)胞[6]、乳腺癌細(xì)胞[7]等。此外,小鼠脾細(xì)胞組成性表達(dá)B7-H4,而活化后則下調(diào)表達(dá)。對(duì)小鼠組織的Northern blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),根據(jù)組織類(lèi)型的不同,小鼠的B7-H4共有4種不同的mRNA剪切形式。肝組織擁有這四種剪切形式的高水平表達(dá),它們的大小分別為715 kb,4 kb,216 kb和118 kb。高靈敏的RT-PCR分析顯示,人類(lèi)的組織至少擁有兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本[2]。

    1.1 B7-H4與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

    調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的免疫抑制作用機(jī)制有很多種,IL-10介導(dǎo)的復(fù)雜作用是其中的一種。通過(guò)研究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與抗原呈遞細(xì)胞(Antigen presenting cells,APCs)的相互作用,發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞會(huì)觸發(fā)APCs分泌大量的IL-10,IL-10可以誘導(dǎo)APCs細(xì)胞表達(dá)大量的B7-H4,導(dǎo)致APCs產(chǎn)生免疫抑制。敲除APCs上的B7-H4,可以抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞介導(dǎo)的APCs的免疫抑制作用。由APCs細(xì)胞分泌的IL-10可以刺激其本身表達(dá)更多的B7-H4,這是最新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫抑制機(jī)制,這種機(jī)制是在APCs水平上發(fā)揮作用。實(shí)驗(yàn)證明,B7-H4在APCs上過(guò)表達(dá),產(chǎn)生了“調(diào)節(jié)性APCs”,從而抑制了免疫應(yīng)答反應(yīng)。為了進(jìn)一步研究在腫瘤環(huán)境中的B7-H4、巨噬細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞之間的病理關(guān)系,KryczekI等對(duì)103個(gè)患者體內(nèi)卵巢癌細(xì)胞和卵巢癌相關(guān)巨噬細(xì)胞上的B7-H4表達(dá)量進(jìn)行了統(tǒng)計(jì),觀察到巨噬細(xì)胞上的B7-H4的密度與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上的數(shù)量正相關(guān),且調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量和B7-H4的表達(dá)量與卵巢癌患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。同時(shí),調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能通過(guò)促使巨噬細(xì)胞自分泌IL-10和IL-6,刺激B7-H4在巨噬細(xì)胞上表達(dá)增多,通過(guò)B7-H4的作用,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞將抑制信號(hào)傳遞給APCs(巨噬細(xì)胞來(lái)源)[3]。

    1.2 B7-H4與B細(xì)胞

    眾所周知,B7家族的共刺激分子在調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫應(yīng)答中起著重要的作用。如B7-1和B7-2與CD28結(jié)合時(shí),可以發(fā)揮正性的刺激作用,當(dāng)B7-1和B7-2與CTLA-4結(jié)合時(shí),發(fā)揮著抑制性作用。然而,B7家族共刺激分子如何調(diào)節(jié)B細(xì)胞的功能卻知之甚少。有-些研究證明,經(jīng)過(guò)LPS和CD40的刺激可以誘導(dǎo)B細(xì)胞表面B7家族分子的表達(dá),激活B細(xì)胞。SuvaS等證明了表達(dá)在細(xì)胞表面的B7家族分子,對(duì)正常的B細(xì)胞和B細(xì)胞淋巴瘤都發(fā)揮著重要的作用,因此可以認(rèn)為B7家族分子在決定B細(xì)胞的最終命運(yùn)上發(fā)揮著重要的作用[2]。

    1.3 B7-H4在巨噬細(xì)胞表面的表達(dá)

    經(jīng)過(guò)對(duì)抑制性免疫細(xì)胞數(shù)十年的研究,人們對(duì)主要的免疫抑制性細(xì)胞CD4-CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能了解已經(jīng)比較透徹。最近在卵巢癌患者體內(nèi)又發(fā)現(xiàn)了一群新的免疫抑制性細(xì)胞,稱(chēng)為B7-H4+腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是卵巢癌間質(zhì)中的重要組成成分,且與腫瘤的進(jìn)程密切相關(guān)[8]。且現(xiàn)在多數(shù)B7-H4的實(shí)驗(yàn)都集中于腫瘤方面。

    1.4 B7-H4的功能—負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化

    目前大量的研究表明B7-H4負(fù)性調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化。Sica等通過(guò)固相化的抗CD3單克隆抗體模擬抗原對(duì)T細(xì)胞的第一信號(hào),從而分析了B7-H4交聯(lián)對(duì)T細(xì)胞激發(fā)作用,結(jié)果表明B7-H4抑制了T細(xì)胞反應(yīng)。在該實(shí)驗(yàn)中作者采用用固相化的抗CD3單抗作為抗原模擬刺激,檢測(cè)B7-H4與T細(xì)胞反應(yīng)之間的關(guān)系??笴D3單抗能刺激從DO11.10轉(zhuǎn)基因小鼠新鮮分離的幼稚CD4+T細(xì)胞增殖,且呈劑量依賴(lài)關(guān)系。在培養(yǎng)開(kāi)始加入固相化的mB7-H4-Ig明顯抑制T細(xì)胞增殖,而對(duì)照Ig無(wú)此作用。B7-H4-Ig也明顯抑制了IL-2和IL-10的產(chǎn)生??扇苄訠7-H4-Ig雖然不能抑制T細(xì)胞增殖,但在體外實(shí)驗(yàn)中,卻能部分抑制同種反應(yīng)性細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)的產(chǎn)生。除上述作用外Sica等還發(fā)現(xiàn)B7-H4能夠負(fù)性抑制B7-CD28共刺激作用。B7-CD28是T細(xì)胞增殖的早期活化信號(hào)。研究證實(shí),B7-H4誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖和IL-2分泌的抑制效應(yīng)僅能部分被CD2信號(hào)所逆轉(zhuǎn)。這也表明B7-H4是T細(xì)胞的一個(gè)強(qiáng)有力的減弱因子[3,4,9]。B7-H4的信號(hào)途徑與CTLA-4信號(hào)途徑頗為相似。CFSE(羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯)標(biāo)記的T細(xì)胞與固相化的抗CD3mAb和B7-H4-Ig融合蛋白共培養(yǎng)后,流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)在單獨(dú)CD3mAb刺激下T細(xì)胞在48小時(shí)出現(xiàn)了適度的細(xì)胞分裂,96小時(shí)約有70%的細(xì)胞發(fā)生超過(guò)了4次的分裂。而在同時(shí)加入B7-H4-Ig實(shí)驗(yàn)組的T細(xì)胞在48-96小時(shí)卻發(fā)生了顯著的細(xì)胞分裂抑制,分裂峰細(xì)胞比例的下降和分裂峰數(shù)目的減少。更進(jìn)一步的研究顯示B7-H4能把T細(xì)胞抑制在細(xì)胞周期的G0/G1期,但并不明顯促進(jìn)T細(xì)胞凋亡[3,9]。B7-H4對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制可能是通過(guò)IL-2依賴(lài)的機(jī)制。這可表現(xiàn)在外源性IL-2能逆轉(zhuǎn)B7-H4-Ig誘導(dǎo)的增殖抑制作用。至今B7-H4作用的確切機(jī)制尚不明確,但已有的研究發(fā)現(xiàn)活化的T細(xì)胞在B7-H4的作用下,JunB分子呈明確下調(diào)表達(dá)。而JunB分子的作用之一是在T細(xì)胞活化后誘導(dǎo)調(diào)節(jié)IL-2的轉(zhuǎn)錄水平[3]。而B(niǎo)7-H4Ig的存在明顯抑制了增殖和IL-2分泌。B7-H4-Ig能抑制B7-H1共刺激的T細(xì)胞分泌IL-2、4、10和 IFN2-γ。結(jié)果顯示B7-H4誘導(dǎo)的 T細(xì)胞增殖抑制不能被CD28共刺激所逆轉(zhuǎn)。B7-H4具有選擇性的阻斷某一途徑的作用。將B6小鼠脾細(xì)胞輸入亞致死劑量照射的BDF1(B6×DBA/2),后者用B7-H4-Ig處理,發(fā)現(xiàn)B7-H4-Ig明顯減少了針對(duì)P815細(xì)胞的CTL活性,B7-H4-Ig在體內(nèi)能抑制CD8+CTL的增殖和成熟[4]。

    1.5 B7-H4的可能受體—BTLA

    BTLA(B和T淋巴細(xì)胞衰減子)的分子,可能是B7-H4在活化T細(xì)胞上的受體。BTLA作為CD28家族的新成員表達(dá)于活化T細(xì)胞和靜止B細(xì)胞,在其胞質(zhì)尾區(qū)有兩個(gè)ITIM并可能通過(guò)該結(jié)構(gòu)抑制T細(xì)胞反應(yīng)。然而,迄今唯一提示BTLA是B7-H4受體的現(xiàn)象是B7-H4-Ig融合蛋白可以與野生型T細(xì)胞而不能與BTLA缺陷T細(xì)胞結(jié)合[10]。但這僅只能作為間接證據(jù),因?yàn)锽7-H4的受體有可能是因?yàn)槿狈TLA而被下調(diào)或者BTLA影響B(tài)7-H4與其特異受體的結(jié)合表面。但另有實(shí)驗(yàn)表明,BTLA不是B7-H4的受體[11]。BTLA是否為B7-H4受體尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。

    2 B7-H4與移植免疫

    已知B7-H4能抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的增殖,減少細(xì)胞因子 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ的生成,抑制免疫應(yīng)答[12,13],錢(qián)韻等在實(shí)驗(yàn)中用表達(dá)的mB7-H4與經(jīng)CD3刺激的T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng),并通過(guò)CCK-8、ELISA等方法分別檢測(cè)T細(xì)胞增殖情況及細(xì)胞因子(如 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ)的分泌變化 ?;钚澡b定結(jié)果表明,加入Ppic9-mB7-H4轉(zhuǎn)染酵母提取的蛋白的實(shí)驗(yàn)組與經(jīng)CD3誘導(dǎo)的其他對(duì)照組相比,顯著地抑制T細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌,尤其是IL-2和IFN-γ的分泌水平。而與未經(jīng)CD3誘導(dǎo)的T細(xì)胞組相比,沒(méi)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明表達(dá)的mB7-H4具有抑制活化T細(xì)胞的生物學(xué)活性,進(jìn)一步證明了mB7-H4重組酵母表達(dá)質(zhì)粒的成功構(gòu)建與mB7-H4重組蛋白的成功表達(dá)。mB7-H4表達(dá)質(zhì)粒的成功構(gòu)建與mB7-H4重組蛋白的成功表達(dá)為研究B7-H4的理化性質(zhì)、生物學(xué)活性及單克隆抗體制備提供了條件[14]。

    迄今,利用B7-H4修飾的細(xì)胞或蛋白產(chǎn)物,觀察移植免疫耐受方面的報(bào)導(dǎo)不多。有實(shí)驗(yàn)室培育并鑒定出B7-H4基因敲除小鼠,實(shí)驗(yàn)證明:該小鼠在抵抗感染時(shí)可產(chǎn)生強(qiáng)烈的Th1反應(yīng)并產(chǎn)生大量IFN-γ,即小鼠B7-H4分子確實(shí)在免疫反應(yīng)中發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用,不過(guò)這種基因缺陷所體現(xiàn)對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的影響僅限于一定的免疫環(huán)境下,因?yàn)樵诙喾N因素影響的免疫反應(yīng)中,其他負(fù)向調(diào)控分子的作用可能掩蓋B7-H4基因缺陷所表現(xiàn)出的效應(yīng)[15]。

    人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBMSCs)能夠抑制T細(xì)胞活化和增殖,但其機(jī)制尚未明確。Woong-Kyung等在實(shí)驗(yàn)中調(diào)查了負(fù)面刺激分子B7-H4對(duì)T細(xì)胞活化hBMSCs免疫效果的作用,結(jié)果表明,B7-H4表達(dá)對(duì)hBMSCs通過(guò)抑制細(xì)胞周期阻滯和抑制因子誘導(dǎo)T細(xì)胞活化和NF-κ B核轉(zhuǎn)位。阻斷B7-H4將減少活化的T細(xì)胞上清與hBMSCs共同培養(yǎng)的TGF-β1(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1)。明確了B7-H4分子可以抑制hBMSCs對(duì)T細(xì)胞的活化與增值。這些結(jié)果強(qiáng)調(diào),hBMSCs在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的作用及在移植治療應(yīng)用的可能性,移植治療抗宿主病(GVHD)和自體免疫疾病[16]。

    有實(shí)驗(yàn)室報(bào)道了關(guān)于注射人B7-H4-Ig融合蛋白抑制移植排斥反應(yīng)的研究,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)B7-H4-Ig融合蛋白以劑量依賴(lài)方式抑制T細(xì)胞的活化和IL-2的產(chǎn)生,在GVHD模型中,B7-H4-Ig可有效地抑制CTL的增殖、分化和成熟,從而延長(zhǎng)小鼠的壽命[17]。另-項(xiàng)新的研究報(bào)道了在胰腺β細(xì)胞中轉(zhuǎn)基因表達(dá)共刺激分子CD154可加速單個(gè)核細(xì)胞性胰島炎(包括DC、T細(xì)胞、B細(xì)胞)進(jìn)程,隨即導(dǎo)致β細(xì)胞功能缺陷,表明將免疫共刺激分子的基因轉(zhuǎn)染胰島細(xì)胞后可獲得有效表達(dá),并進(jìn)一步誘導(dǎo)相應(yīng)免疫效應(yīng)的增強(qiáng)。這提示使胰島細(xì)胞攜帶并表達(dá)負(fù)向調(diào)控分子B7-H4,可能有效誘導(dǎo)特異性免疫耐受以保障移植物的存活,并可能有助于抑制 IDDM的發(fā)生和發(fā)展[18]。

    在針對(duì)B7-H4的細(xì)胞移植實(shí)驗(yàn)中,研究人員構(gòu)建了B7-H4-hrGFP重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)胰島細(xì)胞,制備B7-H4修飾的胰島細(xì)胞,利用RT-PCR法獲得小鼠B7-H4基因的特異性片段,經(jīng)雙酶切后與質(zhì)粒rAAV-IRES-hrGFP連接,成功構(gòu)建表達(dá)該目的基因的重組質(zhì)粒mB7H4-hrGFP,純化出胰島細(xì)胞,將重組質(zhì)粒 mB7H4-hrGFP轉(zhuǎn)染胰島細(xì)胞。再將B7-H4基因修飾的胰島細(xì)胞移植給STZ誘導(dǎo)建立的同種異體糖尿病小鼠模型,緩解糖尿病癥狀,調(diào)節(jié)血糖至正常水平,與對(duì)照組相比,明顯延長(zhǎng)了移植胰島的平均存活期,并得出B7-H4基因修飾的胰島細(xì)胞在體外刺激T淋巴細(xì)胞增殖的能力顯著下降,并可明顯抑制IL-2、IFN-γ分泌的結(jié)論[19]。但移植組小鼠未能得到長(zhǎng)期生存,可能與B7-H4有與其他受體結(jié)合可能或其他信號(hào)傳導(dǎo)路徑尚未被發(fā)現(xiàn)。

    3 展望

    共刺激分子為移植免疫耐受的實(shí)現(xiàn)提供了嶄新的前景,成為目前的研究熱點(diǎn)。B7家族是最重要的共刺激分子,而B(niǎo)7-H4作為近期研究的熱門(mén),通過(guò)負(fù)性共刺激通路抑制免疫排斥反應(yīng),并已在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中取得了一定的成功。現(xiàn)階段對(duì)B7-H4在移植免疫方面的研究還不多,但隨著對(duì)共刺激通路研究的深入,B7-H4必將成為新的移植排斥研究熱點(diǎn)。

    [1]Hirotsune S,Yoshida N,Chen A,et al.An expressed pseudogene regulates the messenger-RNA stability of its homologous coding gene[J].Nature,2003,423(6935):91.

    [2]Choi IH,ZhuG,Sica GL,et al.Genomic organization and expression analysis of B7-H4,an immune inhibitory molecule of the B7 family[J].J Immunol,2003,171(9):4650.

    [3]Prasad DV,et al.B7S1,a novel B7 family member that negatively regu-lates T cell activation[J].Immunity,2003,18:863.

    [4]Sica GL,Choi IH,Zhu G,et al.B7-H4,a molecule of the B7 family,negatively regulates T cell immunity[J].Immunity,2003,18(6):849.

    [5]SIMON I,ZHUO S Q,CORRAL L,et al.B7-H4 Is a Novel membranebound proteinand a candidate serum and tissue biomarkerforovarian cancer[J].Cancer Research,2006,66(3):1570.

    [6]TringlerB,Liu W,Corral L,et al.B7-H4 overexpression in ovarian tumors[J].Gynecol Oncol,2006,100(1):44.

    [7]Tringler B,Zhuo S,Pilkington G,et al.B7-h4 is highly expressed in ductal and lobular breast cancer[J].Clin Cancer Res,2005,11(5):1842.

    [8]Kryczek I,Zou L,Rodriguez P,et al.B7-H4 expression identifies a novel suppressive macrophage population in human ovarian carcinoma[J].J Exp Med,2006,203(4):871.

    [9]Zang X,Loke P,Kim J,et al.B7x:a widely expressed B7 family member that inhibits T cell activation[J].Proc Natl Acad Sci USA,2003,100(18):10388.

    [10]Watanabe N,GavrieliM,Sedy JR,et al.BTLA is a lymphocyte inhibitory receptorwith similarities to CTLA-4 and PD-1[J].Nat Immunol,2003,4(7):670.

    [11]Sedy JR,Gavrieli M,Potter KG,et al.B and T lymphocyte attenuator regulates T cell activation through interaction with herpesvirus entry mediator[J].Nat Immunol,2005,6(12):90.

    [12]WAN G S,CHEN L.Cosignaling molecules of the B7-CD28 family in positive and negative regulation of T lymphocyte responses[J].M icrobes Infect,2004,6(8):759.

    [13]MAO YX,CHEN YJ,MA HB,et al.Recombinant human B7-H4 expressed in Escherichia coli inhibits T lymphocyte proliferat ion and IL-2 secretion in vitro[J].Acta Pharmacol Sin,2006,27(6):741.

    [14]Qian Y,Yao HP,Cheng LF,Shen L,Gu LJ,Tao L,Zhang LH.Expression and identification of recombinant mouse gene B7-H4.Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban,2009,38(2):117.

    [15]Woong-Kyung Suh,Seng Wang,Gordon S.Duncan,et al.Generation and Characterization of B7-H4/B7S1/B7x-Deficient Mice,2006,26(17):6403.

    [16]Xueguang Zhang,Xiying Luan.The biological effect of human bone marrow derived mesenchymal stem cells expressing B7-H4[J].Cell Research,2008,(18):s118.

    [17]Ou DW,Wang XJ,Daniel L,et al.Suppression of Human T-Cell Responses to β-Cells by activation of B7-H4Pathway[J].Cell Transplantation,2006,15(5):399.

    [18]Haase C,Skak K,Michelsen BK,et al.Local activation of dendritic cells leads to insulitis and development of insulin-dependent diabetes in transgenic mice expressing CD154 on the pancreatic β cells[J].Diabetes,2004,53(10):2588.

    [19]Chun-lei Yuan,Fang Zheng and Fei-li Gong,et al.B7-H4 transfection prolongsβ-cell graft survival[J].Transplant Immunology,2009,21(3):143.

    B7-H4 and transplantation immunology

    JIN Cheng-yan1,JIANGRui2,ZHAOJi-guang3,et al.(Dept.of ThoracicSurgery1Cardiology3,and Pathology4,and the Second Bethune Hospital of Jilin University,Changchun130041,China.Dept.of Orthopediac Surgery2,Sino-Japan Union Hospital of Jilin University,Changchun130033,China)

    B7-H4,a B7 family member,which was found in 2003 plays negatively regulating effect of T-cell mediated immune response via inhibiting T-cell proliferation and cytokines production.Although B7-H4 mR NA expression is seen in lymph and nonlymph tissues,protein is down-expressed or not expressed in normal tissues and cells.This study is to review advances in B7-H4 associated-transplantation immunology.

    B7-H4;co-stimulating molecule,transplantation,immunology

    R446.6

    A

    1007-4287(2010)06-0954-05

    國(guó)家自然科學(xué)基金資助(合同號(hào):30870354);吉林省科技廳資助(合同號(hào):20070720;200805120);吉林省發(fā)展與改革委員會(huì)資助(合同號(hào):2009Y042J12314);吉林省衛(wèi)生廳科研資助(合同號(hào):20089002);2007年吉林大學(xué)科研種子基金資助

    *通訊作者

    金成彥(1982-),男,醫(yī)師,主要從事胸外科及移植研究;張興義(1963-),男,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事肺癌和食癌外科及器官移植研究。

    2010-03-18)

    猜你喜歡
    調(diào)節(jié)性胰島負(fù)性
    非負(fù)性在中考中的巧用
    調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在急性白血病中的作用
    胰島β細(xì)胞中鈉通道對(duì)胰島素分泌的作用
    個(gè)性化護(hù)理干預(yù)對(duì)子宮全切患者負(fù)性情緒的影響
    人及小鼠胰腺癌組織介導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞聚集的趨化因子通路
    部分調(diào)節(jié)性?xún)?nèi)斜視遠(yuǎn)期療效分析
    大學(xué)生孤獨(dú)感、負(fù)性情緒與手機(jī)成癮的關(guān)系
    家兔胰島分離純化方法的改進(jìn)
    探討CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在HCV早期感染的作用
    非編碼RNA在胰島發(fā)育和胰島功能中的作用
    亚洲自偷自拍三级| 午夜激情福利司机影院| 久久人妻av系列| 少妇熟女aⅴ在线视频| 两个人的视频大全免费| 亚洲av成人av| 精品欧美国产一区二区三| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 91在线观看av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国国产精品蜜臀av免费| 免费观看人在逋| 亚洲性夜色夜夜综合| 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品久久久久久久电影| 男人舔女人下体高潮全视频| 天堂√8在线中文| 美女cb高潮喷水在线观看| 中出人妻视频一区二区| 久久九九热精品免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 日韩欧美三级三区| 久久久久久久久久黄片| 久久九九热精品免费| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 白带黄色成豆腐渣| eeuss影院久久| 国产精品女同一区二区软件| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 网址你懂的国产日韩在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲人成网站在线播| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日本与韩国留学比较| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产美女午夜福利| 成人永久免费在线观看视频| 国产精品无大码| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜福利18| 看免费成人av毛片| 精品一区二区三区人妻视频| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久国产成人精品二区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久综合国产亚洲精品| 一级av片app| 特级一级黄色大片| 日本 av在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 中文资源天堂在线| 亚洲成人久久性| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲人成网站在线播| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日韩精品有码人妻一区| 99久国产av精品国产电影| 日本在线视频免费播放| 在线观看66精品国产| 国产成人91sexporn| 亚洲va在线va天堂va国产| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 熟女电影av网| 九九热线精品视视频播放| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产午夜精品论理片| 国产男靠女视频免费网站| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产高清不卡午夜福利| 国产成人福利小说| 美女 人体艺术 gogo| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 俄罗斯特黄特色一大片| 极品教师在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 精品无人区乱码1区二区| 免费av观看视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日韩欧美免费精品| 成人亚洲精品av一区二区| 黄色配什么色好看| 亚洲av美国av| 久久精品国产亚洲网站| 婷婷亚洲欧美| 波多野结衣高清作品| 亚洲国产色片| 免费看光身美女| 男女下面进入的视频免费午夜| 性插视频无遮挡在线免费观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲电影在线观看av| 国产精品一区二区三区四区久久| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲,欧美,日韩| 国产不卡一卡二| 美女内射精品一级片tv| 国产精品野战在线观看| av国产免费在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 天堂影院成人在线观看| 嫩草影视91久久| 中国国产av一级| 久久久国产成人精品二区| 国产精品国产高清国产av| 日本 av在线| 最近手机中文字幕大全| 久久亚洲国产成人精品v| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美zozozo另类| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲欧美精品自产自拍| 一级毛片电影观看 | 国产黄色小视频在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲七黄色美女视频| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产亚洲91精品色在线| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品熟女少妇av免费看| 久久久久久国产a免费观看| 国产亚洲欧美98| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品一及| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 国产午夜精品论理片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲色图av天堂| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 乱系列少妇在线播放| 国产精品亚洲美女久久久| avwww免费| 亚洲高清免费不卡视频| 在线国产一区二区在线| 婷婷六月久久综合丁香| 51国产日韩欧美| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久精品影院6| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲最大成人中文| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产日本99.免费观看| 成年版毛片免费区| 97超视频在线观看视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲欧美精品自产自拍| 成人午夜高清在线视频| 久久久精品大字幕| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲五月天丁香| 亚洲在线观看片| 欧美又色又爽又黄视频| 99riav亚洲国产免费| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 午夜老司机福利剧场| 欧美最黄视频在线播放免费| 美女大奶头视频| videossex国产| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品人妻视频免费看| 日韩欧美精品免费久久| 97超碰精品成人国产| 最好的美女福利视频网| 十八禁网站免费在线| 久久精品影院6| 插阴视频在线观看视频| 国产精品人妻久久久久久| 一a级毛片在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产精品一区二区免费欧美| 日本五十路高清| 美女内射精品一级片tv| 国产精品亚洲美女久久久| 99久久中文字幕三级久久日本| 99热6这里只有精品| 欧美不卡视频在线免费观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲欧美清纯卡通| 久久亚洲国产成人精品v| 国产成人91sexporn| 99热6这里只有精品| 伦理电影大哥的女人| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 两个人的视频大全免费| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 少妇的逼水好多| www日本黄色视频网| 久久久色成人| 日本熟妇午夜| 露出奶头的视频| 在线播放国产精品三级| 色在线成人网| 简卡轻食公司| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美一区二区亚洲| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲精品一区av在线观看| 久久久久国内视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 九九热线精品视视频播放| 直男gayav资源| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美成人a在线观看| 看片在线看免费视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产精品一区www在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 国产男靠女视频免费网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 中文字幕免费在线视频6| 看免费成人av毛片| 亚洲熟妇熟女久久| 99热这里只有精品一区| 无遮挡黄片免费观看| 在现免费观看毛片| 免费av不卡在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 麻豆乱淫一区二区| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲成av人片在线播放无| av免费在线看不卡| 免费看av在线观看网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 男女那种视频在线观看| avwww免费| 麻豆乱淫一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 欧美色视频一区免费| 精品福利观看| 天美传媒精品一区二区| 国产精品野战在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 又爽又黄a免费视频| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲国产色片| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| av卡一久久| 看黄色毛片网站| 国产精品一及| 亚洲第一电影网av| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产片特级美女逼逼视频| 国产毛片a区久久久久| 久久久久久国产a免费观看| 中文在线观看免费www的网站| 色在线成人网| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 51国产日韩欧美| av.在线天堂| av在线播放精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 精品午夜福利在线看| 内地一区二区视频在线| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产成人aa在线观看| 在线a可以看的网站| 嫩草影院新地址| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 欧美又色又爽又黄视频| 最近的中文字幕免费完整| 国产精品久久久久久久电影| videossex国产| 久久久久国产网址| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲三级黄色毛片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 免费黄网站久久成人精品| av在线观看视频网站免费| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 69av精品久久久久久| 色5月婷婷丁香| 亚洲国产欧美人成| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 色吧在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 少妇丰满av| 欧美中文日本在线观看视频| 村上凉子中文字幕在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产高潮美女av| 99riav亚洲国产免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 色综合色国产| 欧美激情在线99| 伦精品一区二区三区| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 一进一出好大好爽视频| 国产91av在线免费观看| 成人国产麻豆网| 国产精品伦人一区二区| 搡老岳熟女国产| 色视频www国产| 久久精品人妻少妇| 可以在线观看的亚洲视频| 三级国产精品欧美在线观看| 午夜老司机福利剧场| 网址你懂的国产日韩在线| 69人妻影院| 国产伦在线观看视频一区| 欧美性猛交黑人性爽| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| avwww免费| 老司机福利观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久久性生活片| 日本五十路高清| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 悠悠久久av| 日本欧美国产在线视频| 悠悠久久av| 在现免费观看毛片| 久久久久久九九精品二区国产| 在现免费观看毛片| 久久久久久九九精品二区国产| 久久久国产成人免费| 身体一侧抽搐| 亚洲成人久久爱视频| 1000部很黄的大片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩人妻高清精品专区| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 日韩av不卡免费在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 波多野结衣高清无吗| 久久九九热精品免费| 久久精品91蜜桃| 最近手机中文字幕大全| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久午夜亚洲精品久久| 国产高潮美女av| 亚洲国产精品成人久久小说 | 亚洲无线在线观看| 日韩成人伦理影院| 免费在线观看影片大全网站| 99在线视频只有这里精品首页| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人无遮挡网站| 日本成人三级电影网站| 日本a在线网址| 国产探花极品一区二区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 少妇高潮的动态图| 午夜福利在线观看吧| 在线观看66精品国产| 国模一区二区三区四区视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产亚洲精品久久久com| 亚洲第一区二区三区不卡| 99久国产av精品国产电影| 亚洲一区二区三区色噜噜| 日韩亚洲欧美综合| 又粗又爽又猛毛片免费看| 精品无人区乱码1区二区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 色视频www国产| 国产 一区精品| 晚上一个人看的免费电影| 久久精品国产自在天天线| 成年av动漫网址| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 免费看美女性在线毛片视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲精品国产av成人精品 | 国产69精品久久久久777片| 少妇人妻一区二区三区视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产一区二区在线观看日韩| av黄色大香蕉| 少妇的逼好多水| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品国产成人久久av| 中文资源天堂在线| 欧美zozozo另类| av福利片在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩欧美 国产精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 波多野结衣高清无吗| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人国产麻豆网| 中文在线观看免费www的网站| 精品午夜福利在线看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产精品女同一区二区软件| 三级经典国产精品| 亚洲最大成人手机在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久人人爽人人片av| av在线观看视频网站免费| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 丰满的人妻完整版| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久精品综合一区二区三区| 国产探花极品一区二区| 最后的刺客免费高清国语| 寂寞人妻少妇视频99o| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久人人精品亚洲av| 如何舔出高潮| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产在线男女| 69人妻影院| 亚洲专区国产一区二区| 麻豆国产av国片精品| 午夜福利在线在线| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产精品三级大全| 18+在线观看网站| а√天堂www在线а√下载| 亚洲专区国产一区二区| 岛国在线免费视频观看| 国产精品1区2区在线观看.| 最后的刺客免费高清国语| 国产午夜福利久久久久久| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲自拍偷在线| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲av免费在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 激情 狠狠 欧美| 国产探花极品一区二区| 亚洲精品国产av成人精品 | 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久久久久久大av| 99精品在免费线老司机午夜| 免费大片18禁| 白带黄色成豆腐渣| 麻豆国产av国片精品| 亚洲精品一区av在线观看| 99热这里只有精品一区| АⅤ资源中文在线天堂| 国产伦在线观看视频一区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 九九在线视频观看精品| 午夜激情欧美在线| 在线观看一区二区三区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 欧美一区二区亚洲| 在线观看免费视频日本深夜| 最近2019中文字幕mv第一页| 欧美bdsm另类| 黄色欧美视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 在线观看66精品国产| 人妻少妇偷人精品九色| www日本黄色视频网| 十八禁国产超污无遮挡网站| 日韩强制内射视频| 精品福利观看| 人妻少妇偷人精品九色| 色噜噜av男人的天堂激情| 精品久久久久久久久久免费视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 免费av不卡在线播放| 能在线免费观看的黄片| 一a级毛片在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 99九九线精品视频在线观看视频| 免费av不卡在线播放| 熟女人妻精品中文字幕| 最新中文字幕久久久久| 成人欧美大片| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久久久久大av| 少妇的逼水好多| 日日摸夜夜添夜夜爱| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产美女午夜福利| 久久亚洲精品不卡| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 岛国在线免费视频观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产精品人妻久久久影院| 91狼人影院| 午夜免费激情av| av在线观看视频网站免费| 亚洲第一电影网av| 激情 狠狠 欧美| 成人亚洲欧美一区二区av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产高清激情床上av| 精品久久久噜噜| 国产一区二区在线av高清观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产一区二区激情短视频| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品人妻久久久影院| 天堂网av新在线| 亚洲自偷自拍三级| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品久久久久久久电影| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲精品色激情综合| 欧美+日韩+精品| 国产精华一区二区三区| 欧美日韩在线观看h| 精品久久久久久久久久免费视频| 一个人免费在线观看电影| 精品熟女少妇av免费看| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产男人的电影天堂91| 国产精品乱码一区二三区的特点| 精品欧美国产一区二区三| www日本黄色视频网| 欧美最黄视频在线播放免费| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产乱人视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 中文字幕熟女人妻在线| 全区人妻精品视频| 性欧美人与动物交配| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 国产人妻一区二区三区在| 热99在线观看视频| 人人妻人人看人人澡| 午夜福利在线观看吧| 免费看a级黄色片| 男女那种视频在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲图色成人| 18禁在线播放成人免费| 在线a可以看的网站| 国产精品嫩草影院av在线观看| h日本视频在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 网址你懂的国产日韩在线| 毛片女人毛片| 久久热精品热| 午夜激情欧美在线| 日本 av在线| 91在线观看av| 在现免费观看毛片| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 18+在线观看网站| 99久久精品国产国产毛片| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人无遮挡网站| 成人三级黄色视频| 成人欧美大片| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 女人十人毛片免费观看3o分钟| 在线观看免费视频日本深夜| 精品欧美国产一区二区三| 国产三级中文精品| 久久久国产成人精品二区| eeuss影院久久| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产av不卡久久| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美性感艳星| 三级经典国产精品| 热99re8久久精品国产| 丰满人妻一区二区三区视频av| 看免费成人av毛片| 99热6这里只有精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 伦理电影大哥的女人| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 看十八女毛片水多多多| 成年免费大片在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品1区2区在线观看.| 免费看av在线观看网站| 成年女人永久免费观看视频| 全区人妻精品视频| 99热这里只有精品一区| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美一区二区精品小视频在线| 别揉我奶头 嗯啊视频| 天美传媒精品一区二区|