尖銳濕疣患者皮損人乳頭瘤病毒的基因分型及預(yù)后觀察

陳天雷 ，張弦 ，徐文娟 ，阮建波 ，張霞 ，李俊杰 ，林邵華

（1..廣東省東莞市厚街醫(yī)院，東莞523945；2.廣東省東莞市太平人民醫(yī)院，東莞523905；3.廣東省東莞市人民醫(yī)院，東莞523000）

尖銳濕疣（condyloma acuminatum,CA）是由人乳頭瘤病毒（human papillomavirus,HPV）感染泌尿生殖器肛門部位一種常見性傳播疾病，近年來我國發(fā)病率越來越高。居性傳播疾病第二位[1]。該病傳播性強(qiáng)，潛伏期長，易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)HPV基因型有100余種，以感染泌尿生殖器上皮為主的約有40型，且不同基因型HPV感染與生殖道侵襲性細(xì)胞損害密切相關(guān)[2]。我們應(yīng)用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片分型技術(shù)（Hybrin Max)對CA患者疣體皮損進(jìn)行HPV的分型檢測，并觀察治療后頑固性復(fù)發(fā)患者HPV型別情況?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 對象為2008年1月—2009年6月東莞地區(qū)醫(yī)院皮膚性病科門診就診CA患者200例，所選病例臨床上符合CA的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。全部病例為發(fā)病后首次就診病例，其中男145例，女55例，年齡18～60歲，平均35.5歲。嚴(yán)格活檢取材法采集CA組織樣本送檢。

1.2 檢測儀器及試劑 選用美國ABI-700實(shí)時熒光定量檢測儀，香港凱普公司的HPV基因微陣列分型檢測試劑盒和Hybrin MaxTM運(yùn)用核酸分子快速雜交儀。達(dá)安公司DNA回收提取試劑盒。

1.3 HPV分型檢測原理及實(shí)驗步驟 本試劑盒是以凱普運(yùn)用核酸分子快速雜交儀為平臺，利用導(dǎo)流雜交的原理在已經(jīng)固定好核算探針的低密度基因芯片膜上，可一次性快速檢測至 21 種亞型，包括 13 種高危亞型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。5 種低危亞型：6、11、41、42、44。 3 種中國人群常見亞型：53、66和CP8304型。

實(shí)驗步驟：嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行，濕疣組織標(biāo)本DNA提取，PCR擴(kuò)增，核酸分子快速導(dǎo)流雜交，按芯片上HPV亞型分布相應(yīng)著色點(diǎn)判斷，如出現(xiàn)2點(diǎn)或2點(diǎn)以上陽性即為多重感染。

1.4 治療方法及預(yù)后觀察 治療方法是對所有病例采用同一或者相似治療方案，應(yīng)用電灼或CO2激光去除疣體；外涂莫匹羅星軟膏；口服無環(huán)烏苷0.2g/次,5次/d；肌注干擾素300萬U，隔日1次共7次。上述方案為1個療程。

預(yù)后觀察：術(shù)后第1個月每周復(fù)查1次，無復(fù)發(fā)者隨后每兩周復(fù)查1次，3個月后無復(fù)發(fā)者每月復(fù)查1次。期間若發(fā)現(xiàn)新發(fā)CA病灶或者醋酸白試驗陽性亞臨床感染病灶應(yīng)再次手術(shù)。以最后1次手術(shù)結(jié)束為起始觀察6個月，未發(fā)現(xiàn)新生CA病灶及醋酸白試驗陰性者為臨床治愈。

1.5 預(yù)后觀察 基因檢測分型后進(jìn)行分組，同一亞型為一組，了解各組復(fù)發(fā)情況，總結(jié)分析首次治療至觀察隨訪6個月內(nèi)復(fù)發(fā)3次或3次以上患者的型別請況，進(jìn)一步探討CA復(fù)發(fā)和型別是否存在密切關(guān)聯(lián)。

2 結(jié)果

2.1 CA患者HPV檢測陽性的型別情況 200例CA患者的標(biāo)本檢測HPV陽性153例，陽性率為76.5%。在156例陽性中檢出15種型別，包括5種低危型的HPV6、11、41、42、44、及 10 種高危型的 HPV16、18、31、33、35、45、51、52、58、68。主要型別及所占比例如下：HPV11（32.68%、50/153）、HPV6（25.49%、39/153）、HPV16（16.34%、25/153）、HPV52（9.15%、14/153）、HPV33（7.84%、12/153）,HPV18(7.19%、11/153)。對多型感染者，各亞型的陽性率重復(fù)計算。其中單一亞型HPV感染111例，單一型感染率為72.55%（111/153）；混合型HPV感染42例，其感染率為27.45%（42/153），其中二重感染為33例，感染率為21.57%（33/153），三重感染6例，感染率為3.92%（6/153），四重及四重以上感染3例，感染率為1.96%（3/153）。

2.2 頑固性復(fù)發(fā)CA患者的型別情況 153例陽性檢出型別后，同一型別為一組，首次治療后隨診6個月～1年中，大部分型別組中均有部分不同次數(shù)復(fù)發(fā)CA患者，復(fù)發(fā)3次或3次以上CA患者有21例。頑固性高復(fù)發(fā)的21例CA患者的型別為 HPV16+18（5）例、HPV16+52（4）例、HPV16（4）例、HPV18（3）例、HPV6+11（2）例、HPV33（2）例、HPV52（1）例。

3 討論

近年來隨著通過分子生物學(xué)等技術(shù)的研究，已發(fā)現(xiàn)HPV有近100種，約有40種與生殖器和肛門區(qū)感染有關(guān)，包括低危型的 6、11、42、43、44 等型和高危型如 16、18、31、33、35等，低危型以6、11型常見，高危型以16、18型常見，而且不同HPV亞型感染其致病性和后果也有差異[2]。本研究應(yīng)用凱普HPV分型檢測技術(shù)，檢測200例CA患者HPV感染，結(jié)果檢測出15種HPV型別，以低危型6、11為主（HPV11+6共占58.17%），與國內(nèi)外文獻(xiàn)報道基本一致。有47例患者不能檢測到HPV存在，可能是因本方法只檢測到21種亞型，不在這范圍的HPV感染，或者是這部分標(biāo)本HPV含量低，該試劑盒敏感性不夠，導(dǎo)致漏檢。我們檢出HPV 基因亞型依次為 11、6、16、52、33、18、58、42、45、31、35、41、44、51、68，以 11、6、16 為主要型別。呂曉萍等[4]報道重慶地區(qū)CA患者感染HPV的基因分型依次為11、6、16、18、52、58、31、33、35、66 為主要型別，型別類似。而洪少林等[5]報道北京地區(qū)CA患者感染的基因型別是HPV6型為主，感染率為70%以上，其次是11型?？赡苁堑貐^(qū)及人群不同，感染HPV基因類型會有差異。

臨床上治療CA方法很多，但復(fù)發(fā)率仍較高，CA復(fù)發(fā)原因尚不完全清楚，目前復(fù)發(fā)原因主要報道有：某些人群HPV有易感性，女性患者多發(fā)與雌激素、孕激素有關(guān)；郭華陽等[6]認(rèn)為CA患者真皮內(nèi)含有HPV，也可能是復(fù)發(fā)原因之一；楊朝輝等[7]認(rèn)為CA復(fù)發(fā)與細(xì)胞免疫功能顯著異常，其中自然殺傷細(xì)胞活性降低，機(jī)體產(chǎn)生干擾素、白介素(IL)-2功能降低，細(xì)胞免疫功能下降等有關(guān)；楊慶勇等[8]認(rèn)為CA的復(fù)發(fā)與治療不徹底或亞臨床感染有關(guān)。我們對頑固性復(fù)發(fā)的CA患者基因型別分析發(fā)現(xiàn)主要為混合型感染，特別是其內(nèi)含有高危型HPV16、HPV18感染，應(yīng)引起臨床重視?；旌闲图案呶Ｐ偷幕蛐蛣e可能和CA的復(fù)發(fā)有相關(guān)性。要全面了解和明確其相關(guān)性仍需多中心、大樣本的研究。

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