乳腺癌中ASAH1蛋白的表達(dá)

齊 攀 ，金 艷 ，曹興玥 ，張 冰

（1.河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤外科，河南新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院組胚教研室，河南新鄉(xiāng) 453003；3.河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院兒科，河南新鄉(xiāng) 453000）

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，全世界每年有120萬婦女患乳腺癌，50萬婦女死于乳腺癌，其發(fā)病率以每年2%～8%的速度遞增，嚴(yán)重危害婦女健康。為了對臨床診治乳腺癌患者提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，筆者采用免疫組織化學(xué)法檢測ASAH1蛋白在乳腺癌中的表達(dá)，以評價(jià)其在乳腺癌診治中的價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

選取新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院病理科2003～2005年73例乳腺癌患者石蠟組織包塊，均有完整的隨訪資料，患者年齡37～78歲，平均56歲；2例為導(dǎo)管內(nèi)癌，6例為浸潤性特殊癌，65例為浸潤性非特殊癌。另選取25例正常乳腺組織及23例良性乳腺癌腫瘤（16例乳腺腺病，5例纖維瘤，1例葉狀腫瘤）作為對照。

1.2 方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)法對73例乳腺癌組織、23例乳腺良性腫瘤組織及25例正常對照標(biāo)本ASAH1蛋白進(jìn)行檢測。

1.3 結(jié)果判定

胞漿中出現(xiàn)澄清的棕黃色顆粒為陽性，采用半定量積分法判斷結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)比較組間差異，以及ASAH1表達(dá)增強(qiáng)對5年生存率的影響。

2 結(jié)果

2.1 ASAH1在乳腺癌、乳腺良性腫瘤及正常組織中的表達(dá)情況

免疫組化結(jié)果顯示，ASAH1蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞胞漿，表現(xiàn)為棕黃色顆粒沉淀，且呈彌漫性著色，其陽性表達(dá)率（表1）：乳腺癌中占72.6%，乳腺良性腫瘤中占53.3%，正常乳腺組織中占44.0%。ASAH1在乳腺癌及乳腺正常組織中表達(dá)具有差異性（P＜0.05）。 具體見圖 1～3。

表1 ASAH1在乳腺癌、乳腺良性腫瘤及正常乳腺組織中的表達(dá)（例）Tab.1 Expression of ASAH1 in breast cancer,benign breast tumor and normal breast tissues(case)

圖1 ASAH1蛋白在正常組織內(nèi)的表達(dá)（400×）Fig.1 ASAH1 protein expression in normal tissues(400×)

圖2 ASAH1蛋白在乳腺良性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)（400×）Fig.2 ASAH1 protein expression in benign breast tumor cells(400×)

圖3 ASAH1蛋白在乳腺癌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)（400×）Fig.3 ASAH1 protein expression in breast cancer cells(400×)

2.2 ASAH1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

見表2。在乳腺癌中ASAH1蛋白的表達(dá)與腫瘤大小具有相關(guān)性，腫瘤體積越大，ASAH1表達(dá)越強(qiáng)。

2.3 ASAH1蛋白表達(dá)與乳腺癌患者5年生存率關(guān)系

乳腺癌中ASAH1蛋白陽性表達(dá)與陰性表達(dá)，其5年生存率具有差異性，即表達(dá)越強(qiáng)，生存率越高。見表3。

3 討論

鞘脂類不僅作為細(xì)胞膜的主要結(jié)構(gòu)，還具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、衰老、凋亡、遠(yuǎn)處復(fù)發(fā)、耐藥性和血管生成等功能[1-3]。在正常細(xì)胞，凋亡與抗凋亡存在著鞘脂平衡，神經(jīng)酰胺、鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1-phosphate，S1P）以及調(diào)節(jié)二者代謝的酶發(fā)揮著關(guān)鍵作用[4-5]。由表1可知，乳腺癌組織中ASAH1陽性率為72.6%，乳腺良性腫瘤陽性率為53.3%，正常組織中陽性率為44.0%，表達(dá)具有差異性（P＜0.05），提示ASAH1蛋白在乳腺癌表達(dá)上調(diào)，可能參與乳腺癌的發(fā)生。

ASAH1蛋白表達(dá)與乳腺腫瘤大小成正相關(guān)，腫瘤越大，ASAH1表達(dá)越強(qiáng)。腫瘤體積大表明腫瘤生長旺盛，癌細(xì)胞增生活躍，細(xì)胞凋亡受到抑制，ASAH1蛋白表達(dá)與腫瘤大小成正相關(guān)，提示預(yù)后不良[6]。用柔紅霉素處理過的肝癌細(xì)胞，ASAH1被激活，細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)酰胺減少，S1P增加，與用ASAH1抑制劑處理過的細(xì)胞相比，細(xì)胞的存活率增加[7]。ASAH1過表達(dá)在癌細(xì)胞中亦可抵抗普通化療藥物的細(xì)胞毒作用。轉(zhuǎn)染ASAH1的前列腺癌細(xì)胞對順鉑、多柔比星、吉西他濱及人工神經(jīng)酰胺降低了敏感性[8-9]。以上證據(jù)支持ASAH1的抑制凋亡促進(jìn)增殖作用，且提示這與ASAH1表達(dá)增強(qiáng)后神經(jīng)酰胺減少有關(guān)。

表2 ASAH1表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系Tab.2 The relationship between expression of ASAH1 and the clinicopathological characteristics of breast cancer

表3 ASAH1與5年生存率的關(guān)系（例）Tab.3 The relationship between expression of ASAH1 and 5-year survival rate(case)

乳腺癌術(shù)后隨訪在于及早發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，以便及時(shí)治療。本研究表明ASAH1表達(dá)與否與5年生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，AHAS1蛋白表達(dá)提示生存率低。在腫瘤細(xì)胞中ASAH1的增加及激活可通過衰減神經(jīng)酰胺信號及增強(qiáng)S1P信號促進(jìn)細(xì)胞增殖和存活，ASAH1過表達(dá)的結(jié)果是增加了腫瘤細(xì)胞對死亡的抵抗力[10-11]。

總之，ASAH1可以作為一個(gè)可靠的腫瘤標(biāo)志物，在乳腺癌預(yù)后評估中具有很大價(jià)值。

[1]Hannun YA,Obeid LM.Principles of bioactive lipid signalling:lessons from sphingolipids[J].Nat Rev Mol Cell Biol,2008,9(2):139-150.

[2]Mao C,Obeid LM,Ceramidases:regulators of cellular responses mediated by ceramide,sphingosine and sphingosine-1-phosphate[J].Biochimicaet Biophysica Acta,2008,1781(9):424-434.

[3]Saad AF,Meacham WD,Bai A,et al.The functional effects of acid ceramidase overexpression in prostate cancer progression and resistance to chemotherapy[J].Cancer Biol Ther,2007,6(9):1455-1460.

[4]Shtraizent N,Eliyahu E,Park JH,et al.Autoproteolytic cleavage and activation of human acid ceramidase[J].J Biol Chem,2008,283(17):11253-11259.

[5]Nixon GF.Sphingolipids in inflammation:pathological implications and potential therapeutic targets[J].Br J Pharmacol,2009,158(4):982-993.

[6]Carl-McGrath S,Ebert MP,Lendeckel U,et al.Expression of the local angiotensinⅡsystem in gastric cancer may facilitate lymphatic invasion and nodal spread[J].Cancer Biol Ther,2007,6(8):1222-1224.

[7]Morales A,París R,Villanueva A,et al.Pharmacological inhibition or small interfering RNA targeting acid ceramidase sensitizes hepatoma cells to chemotherapy and reduces tumor growth in vivo[J].Oncogene,2007,26(6):905-916.

[8]Payne SG,Brindley DN,Guilbert LJ.Epidermal growth factor inhibits ceramide-induced apoptosis and lowers ceramide levels in primary placental trophoblasts[J].J Cell Physiol,1999,180(2):263-270.

[9]范正軍,郭廣成,薛建鋒,等.酸性神經(jīng)磷脂酶及神經(jīng)酰胺在吉西他濱誘導(dǎo)胰腺癌PANC-1細(xì)胞耐藥中的作用[J].中華肝膽外科雜志,2009,15(11):128-129.

[10]王福旭.線粒體神經(jīng)酰胺酶通過其下游代謝產(chǎn)物1-磷酸鞘氨醇,上調(diào)K562細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)水平[J].中國病理生理雜志2006,22(6):1055-1060.

[11]Chavez JA,Holland WL,Bar JK,et al.Acid ceramidase overexpression prevents the inhibitory effects of saturated fatty acids on insuli signaling[J].J Biol Chem,2005,280(7):20148-20153.