注射用復(fù)方骨肽細菌內(nèi)毒素檢查法研究

張曉宇，劉 柳

（保定三九濟世生物藥業(yè)有限公司，河北定興 072656）

注射用復(fù)方骨肽適用于風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、頸椎病等疾病的癥狀改善，同時用于骨折及骨科手術(shù)后愈合，可促進骨愈合和骨新生，為我公司獲批生產(chǎn)的凍干粉針劑，其規(guī)格為30 mg的多肽物質(zhì)，熱原控制[1]采用家兔法。研究復(fù)方骨肽的細菌內(nèi)毒素檢查法的可行性，分析如下：

1 儀器與試藥

細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格：5 EU/支，批號：0903140，湛江博康海洋生物有限公司）；鱟試劑（TAL，規(guī)格：0.25 EU/ml，批號：0811040、0902202，湛江博康海洋生物有限公司與湛江安度斯生物有限公司）；細菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水，規(guī)格：5 ml/支，批號：090223，湛江博康海洋生物有限公司）；注射用復(fù)方骨肽（規(guī)格：30 mg，批號：091003、091108、091205，保定三九濟世生物藥業(yè)有限公司）；并按照2005年版《中國藥典》二部中方法所用試管、吸管等玻璃儀器準(zhǔn)備。

2 方法與結(jié)果

2.1 TAL靈敏度復(fù)核

采用BET水將細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 等系列濃度進行試驗。方法根據(jù)《中國藥典》2005年版二部附錄細菌內(nèi)毒素檢查法[2]進行。結(jié)果：兩批鱟試劑靈敏度測定值λc均在0.5 λ～2.0 λ范圍內(nèi)，靈敏度符合規(guī)定。

2.2 細菌內(nèi)毒素限值（L）的確定

由公式L=K/M計算，說明書中為L=2 EU/mg，本實驗最終限值定為1 EU/mg。

2.3 干擾試驗預(yù)試驗

干擾試驗預(yù)試驗是在進行干擾試驗之前要進行的試驗，主要目的是排除樣品中內(nèi)毒素的干擾。由同一批號鱟試劑，對不同稀釋級別做2支供試品管（NPC），2支供試品陽性對照（PPC），同時以BET水建立2支陰性對照（NC）和 2支陽性對照（PC）。實驗結(jié)果NC均為陰性，PC均為陽性，結(jié)果見表2，由結(jié)果可知，樣品最大不干擾濃度為30 mg/ml。

表1 干擾試驗預(yù)試驗Tab.1 Pre-experimental interference test

2.4 正式干擾試驗

選擇3批未檢測出熱原的供試品，以供試品溶液將細菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制備成 2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 系列濃度，同時最終供試品溶液的濃度為30 mg/ml，另外同時以BET水制備上述濃度系列的細菌內(nèi)毒素溶液。分別以上述供試品及BET水制備的內(nèi)毒素溶液與兩個廠家的鱟試劑混合進行干擾試驗，并建立兩管相應(yīng)的供試品及BET水陰性對照。結(jié)果見表3。由結(jié)果可知，Et均在0.5 ES～2.0 ES范圍內(nèi)，且 ES 在 0.5 λ～2.0 λ 范圍內(nèi)，故在 30 mg/ml濃度下，注射用復(fù)方骨肽不干擾細菌內(nèi)毒素與鱟試劑的凝聚反應(yīng)。

3 討論

細菌內(nèi)毒素檢查法已經(jīng)被各國藥典正式收載，作為一種新技術(shù)與新方法，已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。細菌內(nèi)毒素檢查法的優(yōu)點明顯優(yōu)于家兔法，《中國藥典》2000年版新增47種品種采用細菌內(nèi)毒素檢查法，其中生化藥品占13種。生化類藥品是繼抗生素類藥品之后需要進行熱源檢查的第二大類需檢藥品，而本文針對不同批號的注射用復(fù)方骨肽進行細菌內(nèi)毒素檢查法檢測，證明原液在30 mg/ml濃度的情況下，注射用復(fù)方骨肽對于細菌內(nèi)毒素與鱟試劑的凝聚反應(yīng)無干擾作用，足以說明對注射用復(fù)方骨肽采用細菌內(nèi)毒素法是可行的，具有重要的參考意義，建議《中國藥典》在鱟試劑的假陽性和特異性方面作一些修訂。筆者認為，有必要加快對以上生化藥品的研究步伐，充分發(fā)揮藥學(xué)教育和科研部門的潛力和積極性。相信隨著用鱟試劑檢測藥品細菌內(nèi)毒素的研究深入，將會有更多品種采用此種方法。

表2 注射用復(fù)方骨肽（30 mg/ml）細菌內(nèi)毒素干擾試驗Tab.2 Compound Ossotide Injection(30 mg/ml)bacterial endotoxin test

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