仁術(shù)健胃顆粒抗胃癌癌前病變的免疫研究

司海鵬 張心海 朱長(zhǎng)樂(lè) 單兆偉 江蘇省中醫(yī)醫(yī)院病理科 (南京 210029)

胃癌癌前病變指胃粘膜腺上皮腸化和異型增生,研究認(rèn)為胃癌源于這些病變,胃癌是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康和生命的常見(jiàn)病、多發(fā)病,但其形成需要相當(dāng)長(zhǎng)的演變過(guò)程,因此對(duì)癌前期病變的研究,無(wú)疑對(duì)胃癌的防治具有重要的意義。根據(jù)前期臨床觀察,我院研制的仁術(shù)健胃顆粒,可以明顯降低致癌物造成的損傷,使腫瘤生長(zhǎng)得到不同程度的抑制。本文為了進(jìn)一步探討仁術(shù)健胃顆粒的作用機(jī)制,作了如下研究。

臨床資料 選擇 2005年～2007年在江蘇省中醫(yī)院消化科門(mén)診及住院的患者 86例,隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。其中治療組 44例,男 23例,女 21例;平均年齡 48.3± 9.2歲;腺體萎縮伴腸化中度 28例,重度 16例;病程 0.3～20年 ,平均 13.5±9.7年;伴胃潰瘍 23例,異型增生 13例。對(duì)照組 42例,男 22例,女 20例;平均年齡 47.3±10.1歲;腺體萎縮伴腸化中度 26例,重度 16例;病程 0.4～21年 ,平均 12.5±10.4年;伴胃潰瘍 21例,異型增生 11例。兩組患者性別、年齡、病程等經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理差異無(wú)顯著性(P＞ 0.05)。

納入標(biāo)準(zhǔn) 以新悉尼系統(tǒng)和 2000年 5月全國(guó)慢性胃炎會(huì)議(井崗山)制定的胃炎分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)[1],凡符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)和中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)的中度以上慢性萎縮性胃炎(CAG)伴腸上皮化生或 /和輕、中、重度異型增生者;慢性胃潰瘍、胃息肉、殘胃炎,年齡在 20～75歲者方可入選。

治療方法 治療組給予仁術(shù)健胃顆粒(江蘇省中醫(yī)院藥劑科提供,批號(hào):031101)由黃芪、白術(shù)、莪術(shù)、黃芩、薏苡仁等組成,每包 10g,口服每次 1包,3次 /d沖服,3個(gè)月為 1個(gè)療程,連服 2個(gè)療程。對(duì)照組給予胃復(fù)春片 (批號(hào):030408),每片 0.359g,口服 4片 /次,3次 /d,療程同治療組。治療期間停服影響本研究的藥物,在治療前及停止治療后半個(gè)月內(nèi)行胃鏡檢。

療效標(biāo)準(zhǔn) 組織化學(xué)染色 以 AB/PAS及AB1.0進(jìn)行腸化亞型染色,計(jì)分以無(wú),Ia+ IIa,Ia+Ib、 IIa+ Ib,Ia+IIb、IIa+ IIb分別記為 1、 2、3、4分。

免疫組化染色 試劑盒均購(gòu)自福州邁新技術(shù)公司,采用 Evision二步法按試劑說(shuō)明書(shū)染色。 P53陽(yáng)性細(xì)胞定位于細(xì)胞核,COX-2、MDM2蛋白以細(xì)胞漿為主,隨機(jī)選取 5個(gè)區(qū)域計(jì)數(shù),每區(qū)計(jì) 100個(gè)細(xì)胞求陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù): ＜10為(-),＜25為(+ ),＜50為(++),＞ 50為 (+++),分別記為 1、2、3、4分。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,對(duì)資料進(jìn)行 t檢驗(yàn)。

治療結(jié)果 兩組治療前后免疫病理積分改善各項(xiàng)比較,治療組免疫病理中的 COX-2、P53積分與對(duì)照組相比,顯著增強(qiáng)(P＜0.01,P＜0.05),詳見(jiàn)表1、圖1。

表1 患者免疫病理積分各項(xiàng)改善情況

患者治療前后組織化學(xué)病理積分改善比較,腸化亞型治療前病例數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);治療后腸化亞型改善率,χ2=31.00,治療組優(yōu)于對(duì)照組(P ＜0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)表2、圖 2。

表2 患者治療前后腸化亞型改善情況比較(例)

討 論 現(xiàn)代中醫(yī)研究認(rèn)為,氣虛、血瘀、熱郁是胃癌、癌前變化的病理基礎(chǔ),治當(dāng)標(biāo)本兼顧,尤其是益氣、活血、清熱 ,是阻斷和逆轉(zhuǎn) CAG、胃潰瘍、胃癌多因素、多途徑癌變的關(guān)鍵。胃復(fù)春片常用于治療胃癌癌前病變、胃癌手術(shù)后輔助治療等。我院研制的仁術(shù)健胃顆粒抗胃癌、癌前變化就是體現(xiàn)益氣活血清熱法的臨床運(yùn)用。如方中的黃芪、白術(shù)益氣扶正,調(diào)節(jié)免疫;白術(shù)、薏苡仁同用,健脾助運(yùn)之力可增,同時(shí)薏苡仁性平微涼,可減白術(shù)溫燥之弊,故有揚(yáng)長(zhǎng)補(bǔ)短之功;莪術(shù)、白花蛇舌草、半枝蓮可清熱解毒、活血化瘀;黃芩、仙鶴草有清解郁熱之功。

胃黏膜萎縮腸化的分型一般分為不完全性小腸化生(Ⅱ a)、完全性小腸化生(Ia)、完全性大腸化生(Ib)和不完全性大腸化生(IIb)四種亞型,學(xué)術(shù)界認(rèn)為 IIb發(fā)生胃癌的危險(xiǎn)性較大,本文觀察到治療后腸化亞型改善率治療組明顯優(yōu)于對(duì)照組。前期觀察[2]治療組對(duì)病理中炎癥程度、萎縮、活動(dòng)度的積分改善均優(yōu)于對(duì)照組;而對(duì) HP感染、異型增生的積分,與對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),可見(jiàn)中藥仁術(shù)健胃顆粒改善臨床癥狀是一大優(yōu)勢(shì)。野生型 P53是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類(lèi)腫瘤相關(guān)性最高的抑癌基因,50%以上的人類(lèi)腫瘤都可以檢測(cè)到其突變,突變型 P53獲得增殖轉(zhuǎn)化和致瘤潛能。 MDM2是 P53蛋白的負(fù)調(diào)控因子,當(dāng) P53水平增高時(shí),激活 MDM2基因轉(zhuǎn)錄并表達(dá),形成 P53-P90蛋白復(fù)合物,升高的 MDM2表達(dá)過(guò)強(qiáng)可封閉 P53介導(dǎo)的反式激活作用,使 P53功能喪失,導(dǎo)致基因的不穩(wěn)定及細(xì)胞增生,參與腫瘤形成。有關(guān)MDM2與 P53的相關(guān)性有不同報(bào)道[3],兩組患者經(jīng)過(guò)藥物治療后,MDM2、P53表達(dá)較治療前減少,可能是藥物抑制 P53的表達(dá),減少其突變后而引起的生物學(xué)作用;同時(shí)又活化了野生型 P53,調(diào)控胃癌細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng)、增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,最終達(dá)到抑制 MDM2癌基因的活化和 P53抑癌基因的失活,從而維持 P53基因的穩(wěn)定性,這與文獻(xiàn)的報(bào)道[4]相一致。環(huán)氧合酶(COX)是前列腺素(PGs)合成初始步驟中的關(guān)鍵限速酶,有二種同工酶,即 COX-1和 COX-2。 COX-1在體內(nèi)發(fā)揮“看家”作用,促使 PGs的合成,以維護(hù)自身穩(wěn)定和調(diào)節(jié)正常組織細(xì)胞的生理活動(dòng)。COX-2在細(xì)胞靜息時(shí)并不表達(dá),但在細(xì)胞受到炎性介質(zhì)、癌基因產(chǎn)物等因素刺激時(shí)在細(xì)胞內(nèi)迅速產(chǎn)生,促進(jìn)腫瘤血管的形成;改變腫瘤細(xì)胞的表型,增加細(xì)胞的侵襲力,促進(jìn)轉(zhuǎn)移[5]。同樣治療前患者 COX-2表達(dá)增高,與趙[6]發(fā)現(xiàn)在胃癌和癌前病變中 COX-2表達(dá)明顯高于正常組研究一致,經(jīng)藥物治療后 COX-2的表達(dá)明顯下降,患者的癥狀減輕,胃鏡、病理好轉(zhuǎn),甚至痊愈。說(shuō)明仁術(shù)健胃顆粒能抑制 P53、MDM2等刺激下的 COX-2的異常表達(dá),抑制其催化細(xì)胞釋放前列腺素 PGE2的活性,減少胃癌血管生成,從而抑制胃癌細(xì)胞的增殖作用?，F(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明,本品中黃芪、白術(shù)、黃芩等可誘生 IL-2、IFN的產(chǎn)生,促進(jìn)癌前細(xì)胞發(fā)生凋亡,而黃芪還可刺激機(jī)體分泌腎上腺皮質(zhì)激素,提高機(jī)體激素分泌水平,誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生。

本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)觀察胃癌癌前病變患者治療前后 COX-2、P53、MDM2的表達(dá),發(fā)現(xiàn)治療組COX-2、P53蛋白的表達(dá)下降明顯優(yōu)于對(duì)照組。但對(duì)MDM2表達(dá)的下調(diào)作用不明顯,可能是由于體內(nèi)存在除野生型 P53以外的刺激 MDM2表達(dá)的途徑。綜上所述,治療組所用仁術(shù)健胃顆粒治療胃癌癌前病變有效,可能是通過(guò)抑制癌基因的活化和抑癌基因的失活;抑制 COX-2對(duì)胃癌前細(xì)胞的促增殖作用,即仁術(shù)健胃顆粒調(diào)控了 P53、COX-2和 MDM2相互作用的基因網(wǎng)絡(luò)。但是胃癌的發(fā)生是多階段、多基因調(diào)控的過(guò)程,這個(gè)網(wǎng)絡(luò)在胃癌癌前變化向胃癌發(fā)展的過(guò)程中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用,必然還有更復(fù)雜的分子生物學(xué)因素,有待進(jìn)一步探索。

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