針刺對(duì)家兔坐骨神經(jīng)損傷后 AChE變化的影響*

王瑞輝 張西翠 屈紅艷 陜西中醫(yī)學(xué)院(咸陽(yáng) 712046)

坐骨神經(jīng)損傷是周?chē)窠?jīng)損傷中常見(jiàn)的一種病癥,臨床上具有病程長(zhǎng)、恢復(fù)慢、治療難、預(yù)后差等特點(diǎn)。針刺治療能明顯促使損傷坐骨神經(jīng)肢體功能的恢復(fù),但針刺治療的復(fù)雜機(jī)理還不十分清楚,以往的實(shí)驗(yàn)研究中證明,針刺能促使受損實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肢體功能的恢復(fù),影響損傷神經(jīng)組織中雪旺細(xì)胞的表達(dá)[1]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察針刺治療對(duì)家兔坐骨神經(jīng)損傷后乙酰膽堿酯酶(ACh E)的影響,來(lái)探討針刺治療坐骨神經(jīng)損傷治的部分機(jī)理。

1 材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康成年雄性家兔 48只,由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,體重 2.0±0.2kg,隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A)、模型對(duì)照組(B)、針刺治療組(C),每組 16只。

1.2 模型制備 參照文獻(xiàn)[2],選取家兔右側(cè)為手術(shù)側(cè)對(duì)其進(jìn)行定位、定量的坐骨神經(jīng)擠壓造模手術(shù)。具體方法如下:首先將 B、C組家兔固定于手術(shù)臺(tái)上,對(duì)其右側(cè)臀部及股前外側(cè)部脫毛,分別用 20%烏拉坦(5m L/kg)于耳緣靜脈麻醉,麻醉后于右下肢后外側(cè)髖關(guān)節(jié)后下方直下 1cm處,縱環(huán)形切開(kāi)皮膚,向兩側(cè)分離外皮及皮下組織,暴露出梨狀肌及股二頭肌,平梨狀肌外緣水平線(xiàn)向下,沿股二頭肌深面用玻璃棒游離出 2～3cm長(zhǎng)的坐骨神經(jīng),用螺旋測(cè)微儀卡口擠壓約 0.5cm長(zhǎng)的坐骨神經(jīng)60s,夾至 0.20mm處,松開(kāi)停 30s,再夾 60s,然后逐層縫合傷口,損傷局部涂以紅霉素軟膏,無(wú)菌紗布覆蓋,復(fù)蘇。經(jīng)病理證實(shí)所造成的損傷為 SunderlandⅡ～Ⅲ度損傷,術(shù)后用青霉素進(jìn)行抗感染處理,連續(xù) 7d。

1.3 處理方法 A組光照條件下正常喂養(yǎng),B組造模成功后相同條件下喂養(yǎng),模擬捉拿但不施加針刺影響,C組在造模成功后相同條件下正常喂養(yǎng),第 2日開(kāi)始針刺治療,參考李忠仁[3]對(duì)家兔常用針灸穴位的定位,選取相當(dāng)于人體的“環(huán)跳”、“足三里”兩個(gè)穴位,選用 30號(hào)的 1寸毫針,采用平補(bǔ)平瀉手法 ,每次捻轉(zhuǎn) 30s,間隔 10m in捻轉(zhuǎn) 1次 ,30m in后起針,1d1次,7d為 1療程,休息 2d,開(kāi)始下 1療程;從第 2療程開(kāi)始用G6805-2A電針治療儀導(dǎo)線(xiàn)連于針尾上,負(fù)極接“足三里”,正極接“環(huán)跳”,選用疏密波 ,頻率 18～20Hz,電壓 1.5V,留針15m in。分別于第 2療程與第 4療程結(jié)束后當(dāng)日進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。

1.4 觀察指標(biāo) 1.4.1 一般活動(dòng)觀察:著重觀察模型對(duì)照組與針刺治療組家兔患肢的活動(dòng)度、伸趾情況、牽拉反射等,并進(jìn)行比較。

1.4.2 Ach E檢測(cè):在第 2和第 4療程結(jié)束后當(dāng)日,每組各取 8只家兔 ,將其以造模同樣方法麻醉后,分離腓腸肌 ,切取損傷側(cè)腓腸肌約 0.3g,用生理鹽水沖洗后,電子天平稱(chēng)重。然后分別將組織剪碎并置于玻璃勻漿器管中,按照重量體積比 1:9加生理鹽水制備組織勻漿,以 3000r/m in的速率離心 10m in取上清液,立即放入 4℃冰箱保存待測(cè)。嚴(yán)格按照蛋白定量(雙縮脲法)測(cè)試盒及乙酰膽堿酯酶測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,計(jì)算得出乙酰膽堿酯酶含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理采用 SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理。結(jié)果用±s表示,組間比較進(jìn)行單因素方差分析,顯著性水平設(shè)定為 0.05。

2 結(jié) 果 2.1 一般情況觀察 第 4療程結(jié)束后,電針治療組家兔癥狀明顯改善,伸趾基本恢復(fù),立足基本正常 ,牽拉反射、擠壓反射均比較明顯,爬行時(shí)造模后肢可屈伸,協(xié)助爬行。模型對(duì)照組家兔僅表現(xiàn)出輕微伸趾,立定能力差,牽拉反射弱,擠壓反射較弱。

2.2 各組腓腸肌組織中 ACh E含量的變化 見(jiàn)附表。

附表各組家兔坐骨神經(jīng)損傷側(cè)腓腸肌組織ACh E含量比較(mm ol/g,±s)

附表各組家兔坐骨神經(jīng)損傷側(cè)腓腸肌組織ACh E含量比較(mm ol/g,±s)

注:與空白對(duì)照組比較,△表示 P＜0.01;與模型對(duì)照組比較,▲表示 P＜0.01。

組 別n第 2療程后第 4療程后空白對(duì)照組80.364±0.0590.350±0.071模型對(duì)照組80.209±0.055△0.195±0.055△針刺治療組80.256±0.053△0.293±0.058▲

結(jié)果顯示,第 2和第 4療程結(jié)束后,模型對(duì)照組坐骨神經(jīng)損傷側(cè)腓腸肌處 AChE含量明顯低于空白對(duì)照組,有非常顯著性差異(P＜0.01);第 2療程結(jié)束后,電針治療組與模型對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P＞0.05),而明顯低于空白對(duì)照組,有非常顯著性差異(P＜0.01);第 4個(gè)療程后,電針治療組明顯高于模型對(duì)照組,組間具有非常顯著性差異(P＜0.01),而與空白對(duì)照組間沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05),說(shuō)明電針能夠使家兔損傷側(cè)坐骨神經(jīng)腓腸肌組織中 ACh E增加。

3 討 論 ACh E是膽堿能神經(jīng)傳導(dǎo)中的一種關(guān)鍵酶,它是顯示膽堿能神經(jīng)元功能的重要標(biāo)志酶,其活性和含量能提示神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(Ach)的多少和神經(jīng)元興奮性的高低。而坐骨神經(jīng)、脛神經(jīng)和腓總神經(jīng)是膽堿能神經(jīng)的主要組成部分,其信息傳遞主要是通過(guò)神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿(Ach)作為媒介進(jìn)行的,它釋放后通過(guò)乙酰膽堿酯酶(AChE)分解。大部分Ach在膽堿能神經(jīng)末梢合成,與骨骼肌相關(guān)的 Ach,主要存在于神經(jīng)元和神經(jīng)-肌肉接頭處。由于乙酰膽堿很不穩(wěn)定,目前尚無(wú)特異標(biāo)示乙酰膽堿的方法,所以常用乙酰膽堿酯酶的變化間接反映乙酰膽堿的變化[4-6]及膽堿能神經(jīng)的功能狀態(tài)。本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定坐骨神經(jīng)損傷家兔腓腸肌 ACh E含量的變化,結(jié)果顯示針刺治療可以使坐骨神經(jīng)損傷側(cè)腓腸肌組織中的 ACh E含量增加且以治療 4個(gè)療程效果更加明顯,間接反映出電針刺激能夠使受損神經(jīng)肌肉接頭處由于神經(jīng)損傷而導(dǎo)致的 Ach釋放水平逐漸趨于恢復(fù),這對(duì)于促進(jìn)神經(jīng)再生,防止肌肉萎縮,使受損神經(jīng)得以修復(fù)有重要意義。這進(jìn)一步提示針刺在坐骨神經(jīng)的治療和功能恢復(fù)方面具有廣闊的研究與應(yīng)用前景,但還需要我們更深入的研究與探索。

[1] 屈紅艷 ,王瑞輝,劉飛虎.電針對(duì)家兔坐骨神經(jīng)損傷后 IL-1β的影響 [J].陜西中醫(yī) ,2007,28(4):506.

[2] 王瑞輝,戴靜宜,屈紅艷,等.針刺對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后雪旺細(xì)胞的影響[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,31(2):30.

[3]李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué) [M].北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社,2003:415.

[4]劉希偉,胡 濤,趙冬梅.大鼠坐骨神經(jīng)損傷后肌肉組織乙酰膽堿酯酶的變化 [J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,25(3):163.

[5] 劉希偉,胡 濤,王海燕,等.大鼠周?chē)窠?jīng)損傷后肌肉組織乙酰膽堿酯酶的變化[J].解剖學(xué)雜志,2003,26(1):78.

[6]張皚峰,歐喜超,楊朝陽(yáng),等.大鼠脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)終板內(nèi)乙酰膽堿酯酶和降鈣素基因相關(guān)肽的變化 [J].中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐,2008,14(11):1030.