HPLC法測定夜寧糖漿中大黃素的含量

趙斌（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院藥劑科，江蘇南京210004）

HPLC法測定夜寧糖漿中大黃素的含量

趙斌
（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京市婦幼保健院藥劑科，江蘇南京210004）

目的建立夜寧糖漿中大黃素的含量測定方法。方法HPLC法，色譜柱C18，流動相：甲醇－0.1%磷酸溶液85∶15（V／V），流速：1.0mL／min，檢測波長：254 nm。結(jié)果大黃素在0.010 12～0.121 44μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 5），平均回收率為97.05%，RSD為1.98%（n＝3）。結(jié)論本方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性好，能有效控制夜寧糖漿的質(zhì)量。

夜寧糖漿；大黃素；高效液相色譜法

夜寧糖漿［1］是由合歡皮、靈芝、首烏藤、大棗、女貞子、甘草、浮小麥等藥組成，具有安神養(yǎng)心的功效。臨床上用于神經(jīng)衰弱、頭昏失眠、血虛多夢，該方現(xiàn)已收載于2005版《中國藥典》一部［1］。其質(zhì)量控制方法簡單，只有檢查項目，沒有含量測定。為了更方便有效地控制該制劑的質(zhì)量，確保療效，本文對首烏藤中主要成分大黃素的含量采用HPLC法［2］進(jìn)行測定，實驗結(jié)果令人滿意。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀（四元泵、脫氣機(jī)、紫外檢測器），HypersilODS柱（5μm，250×4.6mm）（均為Agilent公司），N2000色譜工作站（浙江大學(xué)智能信息研究所），F(xiàn)A1004電子分析天平（上海第二天平儀器廠），PHS-3C精密酸度計（上海雷磁儀器廠），KQ-50B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）等。甲醇為色譜純，磷酸、乙醚等為分析純，注射用水（自制）。樣品和陰性對照液均由制藥廠提供，大黃素對照品（含量測定用）、大黃酸對照品（含量測定用）、大黃酚對照品（含量測定用）、大黃素甲醚對照品（供鑒別用）均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Hypersil ODS柱（5μm，250× 4.6mm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）（在使用前均經(jīng)孔徑為0.45μm的微孔濾膜過濾，超聲處理）；流速：1.0 mL／min；檢測波長為254 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量為10μL，在上述色譜條件下大黃素峰與其它峰分離良好，陰性無干擾，其保留時間為8.2 min，理論塔板數(shù)按大黃素計算為10 000，色譜圖見圖1～3。

圖1 空白樣品HPLC色譜圖

圖2 對照品HPLC色譜圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液精密稱取大黃素對照品25.3mg～250mL于容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密量取2～50 mL于容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液精密量取夜寧糖漿25mL，加水50mL，搖勻，加乙醚振搖提取4次（40，30，30，20mL），分取乙醚液，揮干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 空白樣品溶液取缺首烏藤的1／10處方量的藥材，按夜寧糖漿生產(chǎn)工藝制備空白陰性樣品，然后精密量取此液25 mL按供試品溶液的的制備方法制備不含首烏藤的的空白陰性樣品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察精密稱取大黃素對照品25.3mg～250mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取此液1，2，4，8，12 mL至100mL容量瓶中，搖勻，分別量取10μL注入液相色譜儀，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明大黃素在0.010 12～0.121 44μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，線性方程為：Y＝21.997 736＋6 334 493.527X，r＝0.999 5。

2.4 精密度試驗精密量取對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，結(jié)果RSD為1.92%。

2.5 穩(wěn)定性試驗精密供試品溶液10μL，分別在0，2，4，6，8 h進(jìn)樣1次，測峰面積積分值，結(jié)果RSD為1.95%，表明供試品溶液中大黃素在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗取樣品5份，按3.2項下方法制備供試品溶液，測定大黃素的含量，結(jié)果平均含量為2.4μg／mL；RSD為1.68%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗精密量取樣品25mL，共4份，其中1份為原樣，另3份分別加入1.012μg／mL的大黃素對照品溶液10，20，50mL，混勻，按3.2項下方法制備所需溶液后，測定大黃素的含量，計算加樣回收率。結(jié)果平均回收率為97.05%，RSD為1.98%，n＝3。

2.8 樣品測定按上述色譜條件的3批樣品進(jìn)行含量測定，結(jié)果每毫升含首烏藤以大黃素計算分別為0.0028，0.0032，0.0035mg，均符合成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

3.1 色譜條件的確定夜寧糖漿中化學(xué)成分復(fù)雜，檢測時易受干擾，本法以大黃素為測定指標(biāo)，選用甲醇-0.1%磷酸溶液85∶15（V／V）作為流動相有較好的分離度，能使樣品中所含成分得到較好地分離，不干擾大黃素測定。

3.2 樣品的處理選擇樣品處理方法時，參考文獻(xiàn)資料［2-4］，比較了幾種處理方法，實驗證明，本文采用的樣品處理方法，其分離度較好，峰信號較強。

3.3 色譜圖中峰位的確認(rèn)筆者曾用大黃酚、大黃素甲醚對照品制成對照溶液，在同一色譜條件下，注入液相色譜儀，發(fā)現(xiàn)大黃酚、大黃素甲醚對照液中大黃酚、大黃素甲醚峰的保留時間分別與夜寧糖漿供試品溶液中10.0，14.6 min峰的保留時間一致，并且同時也采用此兩種標(biāo)準(zhǔn)液直接加入至供試品溶液中，在同一色譜條件下，注入液相色譜儀，發(fā)現(xiàn)10.0，14.6min兩峰的峰面積明顯增加，因此，筆者認(rèn)為夜寧糖漿供試品溶液中10.0，14.6min出現(xiàn)的兩峰為大黃酚、大黃素甲醚峰，可進(jìn)一步對此兩峰進(jìn)行鑒別與含量測定。

［1］國家藥典委員會編.中國藥典［M］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，附錄33-35.

［2］何建華，沈宇清，韋昌桂，等.高效液相色譜法測定通解口服液中大黃素的含量［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（12）：1483-1485.

［3］雷光，王登旭.HPLC法測定健腦寧合劑中大黃素的含量［J］.齊魯藥事，2006，25（3）：152-153.

［4］曾衛(wèi)陽，侯小明，段早紅.高效液相色譜法測定復(fù)方兒茶酊中大黃素的含量［J］.醫(yī)藥論壇雜志，2006，27（20）：67-68.

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