腐敗生物檢材中甲基異柳磷的檢驗

常 靖, 崔 巍, 張蕾萍, 邸玉敏, 楊 俊

(1.公安部物證鑒定中心,北京 100038;2.中國人民公安大學,北京 100038;3.貴州省畢節(jié)市公安局,貴州畢節(jié) 551700)

0 引言

甲基異柳磷(isofenphos-methyl),化學名稱:O-甲基-O-(2-異丙氧基羰基苯基)-N-異丙基柳代磷酸酯,分子式 C14H22NO4PS,結構式如圖1所示。甲基異柳磷純品為淡黃色油狀液體,易溶于苯、甲苯、二甲苯、乙醚等有機溶劑,難溶于水,常溫下穩(wěn)定,遇強酸和堿易分解,光和熱也能使其加速分解。

圖1 甲基異柳磷結構式

甲基異柳磷雖然對地下害蟲的防治效果與辛硫磷相近,是防治害蟲的優(yōu)良藥劑,但它是一種新型高毒有機磷土壤殺蟲劑,被國家列為禁用農藥。但在一些地區(qū)仍在使用。文獻報道,薄層色譜法[1](HPTLC)、紫外-可見分光光度法[2]、氣相色譜法[3-5](GC-FPD)、氣相色譜質譜聯用法[3,6](GC/MS)是分析甲基異柳磷普遍應用的方法。雖然農殘檢測部門已對蔬菜、水果、肉類、蛋類中建立起標準的檢測方法,這些檢測方法在檢材新鮮的情況下,方法快速、靈敏、簡便,而在法庭科學領域,檢材高度腐敗,如果采用該方法,油脂、色素、腐敗蛋白質難以去除,容易造成干擾或漏檢。因此,本文介紹一例因甲基異柳磷中毒死亡,尸體臟器組織已高度腐敗,檢測臟器組織中的甲基異柳磷的方法,供同行參考。

1 案例

2007年 7月 4日,吳 ××被人發(fā)現時口吐白沫,送醫(yī)院搶救無效死亡。2個月后當地公安機關將提取到的死者胃內容 4 g與肝組織 50 g(均已高度腐敗)、現場玻璃瓶碎片送至公安部物證鑒定中心檢測,要求檢驗常見有機磷農藥。公安部物證鑒定中心遂對該案例進行檢驗,將腐敗胃內容 4 g與肝組織 15g混合經丙酮水浸泡,揮去丙酮去除雜質后,液-液萃取、中性三氧化二鋁二次凈化,GC/MS分析。結果從死者胃內容及肝組織、現場的玻璃瓶碎片中均檢出甲基異柳磷。

2 試驗部分

2.1 儀器

島津公司 GC/MS-5050A氣相色譜-質譜聯用儀,配 GC-2010工作站。

SORVAU Biofuge Primeore離心機、EYELA CUTE MIXER CM100振蕩器。

2.2 試劑

乙酸乙酯、丙酮,均為分析純試劑。

2.3 色譜條件

色譜柱:DB-5/30m×0.25mm×0.25μm石英毛細管柱;柱溫:100℃恒溫 3min后以 40℃/min速率程序升溫至 280℃恒溫 17.5 min,柱流速 1 mL/min;EI源 70 eV,離子源溫度 250℃,全掃描,分流比 1∶20。

2.4 檢材的提取及凈化

玻璃瓶碎片直接用乙酸乙酯提取后經 GC/MS分析。

取死者的肝組織 15g,絞碎與死者胃內容 4 g混合,加丙酮水 30 mL浸泡,離心,取上清液濃縮揮去丙酮至 2mL左右,用乙酸乙酯 6mL×2提取,收集乙酸乙酯液并濃縮至 0.1mL,供 GC/MS分析。

3 結果與討論

(1)死者的胃內容和肝組織混合提取后經GC/MS分析,所得的總離子流色譜圖如圖2所示。圖2中,分析時間為 8.542min的色譜峰所對應的質譜碎片特征離子及豐度比如圖3所示,與 NIST譜庫中檢索到得甲基異柳磷一致。同時將現場玻璃碎片經有機溶劑提取后供 GC/MS分析,結果所得總離子流圖中色譜峰保留時間及其對應的質譜特征碎片離子與死者臟器組織中分析檢測結果一致。

圖2 胃內容及肝組織混合提取液GC/MS總離子流色譜圖

圖3 胃內容及肝組織混合提取液(Rt:8.542m in)GC/MS質譜圖

(2)甲基異柳磷屬高毒有機磷殺蟲劑,在生物體內易代謝、分解,在生物臟器組織中分析檢測困難。在本案例中由于尸體及生物檢材的保存不當,造成生物檢材高度腐敗,致使毒物在體內再分布、降解以及在腐敗檢材中的進一步代謝分解,致使檢測更加困難,極易漏檢?，F場物證材料玻璃碎片中檢出甲基異柳磷為生物檢材的檢測提供了一定的檢驗方向。因此,現場的物證材料對生物檢材中毒物檢測至關重要,在很大程度上能夠為毒物分析提供一定的方向。

(3)甲基異柳磷易溶于苯、甲苯、二甲苯、乙醚等有機溶劑,筆者曾采用苯、甲苯、二甲苯對肝組織進行提取,由于肝組織已高度腐敗,采用有機溶劑直接提取,雜質干擾嚴重,無法進行儀器分析;而采用丙酮水提取,一方面將待測物溶解在丙酮水液中,另一方面丙酮可沉淀檢材中腐敗蛋白質,同時在揮去丙酮的過程中去除部分油脂及雜質,在此過程中也起到凈化的目的,但是由于高度腐敗,儀器分析無法去除基質干擾,將提取液又經中性三氧化二鋁柱凈化后分析,雜質干擾去除卻仍未檢出甲基異柳磷。但將死者的胃內容及肝組織混合經上述提取過程提取,結果檢出甲基異柳磷。由此可見,對于高度腐敗的生物檢材,提取凈化是關鍵,需謹慎處理,否則極易漏檢。

(4)本案例中胃內容量僅僅 4 g,且已高度腐敗,單從胃內容或肝組織中提取有機磷農藥分析相當困難,完全有可能漏檢,筆者將二者合在一起提取,便于檢測,最終得到滿意結果。

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