風(fēng)寒感冒片中鹽酸麻黃堿含量的 RP-HPLC法測定

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院，濟南 250021)

風(fēng)寒感冒片由十一味中藥材組成，具有辛溫解表和宣肺止咳之功效，對風(fēng)寒感冒引起的頭痛、畏寒、發(fā)熱、流涕和咳嗽等具有良好的療效。方中君藥麻黃具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘和利尿消腫等功能，其主要有效成分為麻黃堿和偽麻黃堿。2008年 1月 ～ 2009年 1月，本文建立了用高效液相色譜測定風(fēng)寒感冒片中鹽酸麻黃堿含量的方法，用于控制風(fēng)寒感冒片的質(zhì)量。

儀器和藥物:高效液相色譜儀、LC2002色譜工作站、鹽酸麻黃堿(中國藥品生物制品檢定所，批號:200303)、風(fēng)寒感冒片(0.50 g/片，自制)、色譜醇、超純水、分析純，酸性甲醇為 0.3%鹽酸甲醇液。

方法與結(jié)果:①色譜條件:Diamonsil C 18色譜柱(4.6 mm×200 mm，5μm)，流動相為甲醇 0.01mol/L、KH2PO4(8∶92，磷酸調(diào) pH 3.0);流速為 1ml/min、檢測波長 210 nm、柱溫 25℃。理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算不得低于3 000。②鹽酸麻黃堿對照品溶液的制備:精密稱取鹽酸麻黃堿對照品 11.45mg，置 100ml量瓶中，加酸性甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，得 0.114 5mg/ml的鹽酸麻黃堿對照品貯備液。取貯備液 5ml加酸性甲醇液溶于25ml量瓶，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過即得對照品稀釋液(22.90μg/ml)。③供試品溶液的制備:取本品適量，研細后取細粉約 0.5g，精密稱量，置 100ml容量瓶中，加入酸性甲醇至刻度，密塞，超聲處理 30min，放冷，用酸性甲醇補足至刻度，搖勻，普通濾紙濾過，取續(xù)濾液 5ml，用酸性甲醇定容至 25ml，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。④線性關(guān)系考察:精密吸取對照品貯備液 10μl，對照品稀釋液 5.0、7.5、10.0、12.5μl，依上述色譜條件分別注入液相色譜儀，以鹽酸麻黃堿的質(zhì)量(M)為橫坐標，峰面積積分值(A)為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為 A=4.244×106M+3.164×104，r=0.9999，鹽酸麻黃堿在 0.1145～1.1450μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。⑤方法專屬性:按同樣工藝制備缺麻黃藥材的陰性對照，再按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。分別精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液，供試品溶液和陰性對照品溶液各 10μl，注入液相色譜儀，結(jié)果表明陰性對照無干擾。⑥精密度試驗:精密吸取鹽酸麻黃堿貯備液 10μl注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，其峰面積的 RSD=0.85%，表明進樣精密度良好。⑦重復(fù)性試驗:取本品(批號:030601)細粉約 0.5g共 6份，按下面的樣品測定方法測定，6份樣品中鹽酸麻黃堿含量的 RSD=1.70%。⑧加樣回收率試驗:取本品(批號:030601)，研細，按高、中、低 3個濃度每個濃度精密稱定 3份。分別加入定量的鹽酸麻黃堿對照品，按下面的樣品測定方法測定，平均回收率為 99.73%，RSD=1.50%。結(jié)果見表 1。⑨樣品測定方法與結(jié)果:取本品 3批，按以上方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液和對照品稀釋液，按上述色譜條件進樣各 10 μl，以峰面積按外標法計算含量，結(jié)果 3批片劑麻黃堿含量(mg/片 )分別為 1.79、1.78、1.79。

表1 加樣回收率結(jié)果

討論:麻黃堿是麻黃藥材的主要有效成分，故選用麻黃堿作為指標成分控制本品的質(zhì)量。選擇流動相時，篩選了甲醇—水、乙腈—水等流動相系統(tǒng)，試用了三乙胺、磷酸、冰醋酸等對色譜峰分離有影響的試劑，最后確定采用文中所述流動相系統(tǒng)，分離效果較好。用甲醇超聲提取樣品，進樣后色譜峰拖尾，柱效為 2500，而采用 3‰鹽酸甲醇液超聲提取樣品可使色譜峰的拖尾情況得到改善，柱效可達 4000。