藕節(jié)炭的TLC鑒別和浸出物含量測定Δ

劉善新，靳光乾，郭承軍，劉欣欣（.山東省中醫(yī)藥研究院，濟(jì)南市 5004；.山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南市 50355）

藕節(jié)為睡蓮科植物蓮Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根莖節(jié)部，具有止血、祛瘀的作用，用于治療吐血、咳血、尿血、衄血、崩漏。2005年版《中國藥典》（一部）記載藕節(jié)的加工炮制方法為加工制成藕節(jié)炭，但藕節(jié)炭的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較簡單，僅有加工程度描述，缺乏鑒別、浸出物、含量測定等項[1]。為此，筆者對不同地區(qū)市售藕節(jié)炭的鑒別及浸出物進(jìn)行了研究，旨在為制定藕節(jié)炭的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）。3-表白樺脂酸標(biāo)準(zhǔn)品（筆者從藕節(jié)炭中提取分離制得，純度：98.57%）；β-谷甾醇對照品（中國藥品生物制品鑒定所，批號：110851-200202）；乙酸乙酯、乙醇等試劑均為分析純。藕節(jié)炭為購于全國不同地區(qū)的市售品，粉碎過50目篩，備用；生藕節(jié)購于濟(jì)南建聯(lián)藥材公司，經(jīng)山東中醫(yī)藥研究院鐘方曉研究員鑒定為真品，炒制成藕節(jié)炭，粉碎過50目篩，備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 藕節(jié)炭鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備：取各地市售藕節(jié)炭樣品1.0 g，分別加入乙酸乙酯50 mL，回流提取0.5 h，過濾，濾液濃縮至約2 mL，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，以乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)、對照品溶液的制備：（1）3-表白樺脂酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：稱取3-表白樺脂酸標(biāo)準(zhǔn)品4.21 mg，置2 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，制成每1 mL含2.11 mg的3-表白樺脂酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液。（2）β-谷甾醇對照品溶液的制備：稱取β-谷甾醇對照品2.46 mg，置2 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，制成每1 mL含1.23 mg的β-谷甾醇對照品溶液。

2.1.3 薄層層析：照薄層色譜（TLC）法[1]試驗。精密吸取供試品溶液、3-表白樺脂酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液各5μL，分別點于同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（2∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，以10%硫酸乙醇噴霧，105℃加熱顯色至斑點清晰，自然光下檢視，供試品色譜中在與標(biāo)準(zhǔn)品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點；365 nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中在與標(biāo)準(zhǔn)品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。所得TLC見圖1。

精密吸取供試品溶液、3-表白樺脂酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液、β-谷甾醇對照品溶液各5μL，分別點于同一以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（8∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，以10%硫酸乙醇噴霧，105℃加熱顯色至斑點清晰，自然光下檢視，供試品色譜中在與標(biāo)準(zhǔn)、對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點；365 nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中在與標(biāo)準(zhǔn)、對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點。所得TLC見圖2。

2.2 浸出物測定

2.2.1 提取溶劑乙醇百分?jǐn)?shù)的確定：取自制藕節(jié)炭樣品2.0 g，精密稱定，分別精密加入95%、85%、75%、65%、55%乙醇50 mL，按2005年版《中國藥典》（一部）浸出物測定法項下熱浸法[1]操作，結(jié)果見表1。

圖1 藕節(jié)炭的TLC（以3-表白樺脂酸為對照）Fig 1 TLC of charred N.nucifera（3-epibetulinic as reference substance）

圖2 藕節(jié)炭的TLC（以3-表白樺脂酸、β-谷甾醇為對照）Fig 2 TLC of charred N.nucifera（3-epibetulinic and β-sitosterol as reference substance）

表1 不同濃度乙醇浸出物測定結(jié)果（n＝3）Tab 1 Result of determination of the extract under different alcohol concentration（n＝3）

由表1可見，55%乙醇不易過濾，95%、85%、75%乙醇雖然易于過濾，但其對應(yīng)的浸出物含量偏低。結(jié)合藕節(jié)炭活性部位篩選情況，確定采用65%乙醇作為溶劑進(jìn)行浸出物測定。

2.2.2 浸出物含量測定：取各地市售藕節(jié)炭樣品2.0 g，精密稱定，分別加入65%乙醇50 mL，按2005年版《中國藥典》（一部）浸出物測定法項下熱浸法[1]操作，測定各地藕節(jié)炭的浸出物含量，結(jié)果見表2。

表2 藕節(jié)炭浸出物含量測定結(jié)果Tab 2 Determination of the extract of charred N.nucifera

3 討論

文獻(xiàn)報道生藕節(jié)中含有3-表白樺脂酸[2]。目前，藕節(jié)、藕節(jié)炭止血有效成分尚不明確。筆者從藕節(jié)炭的乙酸乙酯提取部位中分離出3-表白樺脂酸、β-谷甾醇，并以3-表白樺脂酸、β-谷甾醇為對照鑒別藕節(jié)炭。結(jié)果表明，9個市售藕節(jié)炭樣品在與標(biāo)準(zhǔn)、對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點，而福州藕節(jié)炭斑點不明顯，擴(kuò)大點樣量斑點亦不清晰；這是否與加工工藝有關(guān)有待研究，因為其它藕節(jié)炭樣品均為原藥材直接炒制而成，而福州藕節(jié)炭為藕節(jié)切成片狀后的加工品。

對自制藕節(jié)炭樣品采用毛細(xì)管凝血法進(jìn)行止血活性部位篩選，結(jié)果乙酸乙酯、水提取物部位均具有止血活性。筆者在試驗中曾擬以乙酸乙酯、水為溶劑，取藕節(jié)炭2.0 g，按2005年版《中國藥典》（一部）浸出物測定法項下熱浸法[1]操作，分別測定藕節(jié)炭的乙酸乙酯、水浸出物。結(jié)果，乙酸乙酯浸出物含量太低，測定誤差較大；水浸出物測定時過濾困難，不便于操作。因此，考察了系列乙醇百分?jǐn)?shù)為溶媒，其浸出物的測定過程及結(jié)果，最后采用65%乙醇為溶劑測定藕節(jié)炭的浸出物。

測定結(jié)果表明，不同市售地藕節(jié)炭65%乙醇浸出物含量差異較大，為10.91%～20.88%。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：264～265，附錄38、56.

[2]周軍平，王愛蘭，潘仁滿.藕節(jié)中3-表白樺脂酸的分離與鑒定[J].同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1995，24（1）：52.