沉香化滯丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

郭巧技，肖麗和，熊 英（深圳市藥品檢驗(yàn)所，深圳市 518029）

沉香化滯丸為沉香、牽牛子、枳實(shí)等15味藥材組成的成方制劑[1]，具有理氣化滯的功效，用于由飲食停滯引起的胸膈脹滿、消化不良、吞酸嘈雜、腹中脹滿。原標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-中藥成方制劑》（第九冊）[1]，但僅收載了丸劑的通則檢查。為了提高中成藥的檢測標(biāo)準(zhǔn)，本研究增加木香、香附、山楂、大黃、厚樸、牽牛子的薄層色譜（TLC）鑒別及橙皮苷的高效液相色譜（HPLC）含量測定。

1 材料

1.1 儀器

P680A型HPLC儀、PDA-100型檢測器（美國戴安公司）；CP224S型電子天平（德國Sartorias公司）；XS205型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；AS20500A型超聲波清洗儀（天津奧特恩斯儀器有限公司，功率500 W，頻率40 kHz）。

1.2 試藥

去氫木香內(nèi)酯（批號：1525-200001）、木香烴內(nèi)酯（批號：1524-200101）、α-香附酮（批號：748-200406）、熊果酸（批號：110742-200314）、大黃酚(批號：0796-200311)、大黃酸（批號：0757-9703）、大黃素（批號：10756-200110）、厚樸酚（批號：0709-200006）、咖啡酸（批號 ：0885-200102）、橙 皮苷（721-200211）對照品及木香（批號：120921-200405）、香附（批號：1059-9801）、山楂（批號：121138-200403）、大黃（批號：120902-200408）對照藥材均由中國藥品生物制品檢定所提供；沉香化滯丸（批號：060801、060802、060803，規(guī)格：每袋6 g）由甘肅省河西制藥有限公司提供，處方中的15味中藥由河北安國藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供；水為超純水，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 木香、香附、山楂的鑒別 （1）供試品溶液的制備：取本品6 g，研細(xì)，加乙醚30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾渣備用，濾液揮干，殘?jiān)訜o水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。（2）對照品溶液的制備：取去氫木香內(nèi)酯、木香烴內(nèi)酯、α-香附酮、熊果酸對照品，分別加無水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。（3）對照藥材溶液的制備：取木香對照藥材0.2 g，香附、山楂對照藥材各0.5 g，同法制成對照藥材溶液。（4）陰性對照溶液的制備：按處方及制法，分別制成缺木香、香附、山楂的陰性樣品，取相當(dāng)于樣品的量，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。（5）木香的TLC測定：吸取上述相應(yīng)溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視（見圖1）。（6）香附的TLC測定：吸取上述相應(yīng)溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以甲苯-乙酸乙酯-冰醋酸（10∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液，放置片刻，日光下檢視（見圖2）。（7）山楂的TLC測定：吸取上述相應(yīng)溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視（見圖3）。

2.1.2 大黃、厚樸、牽牛子的鑒別 （1）供試品溶液的制備：取“2.1.1（1）”項(xiàng)下的備用藥渣，揮干，加甲醇30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。（2）對照品溶液的制備：取大黃酚、大黃酸、大黃素、厚樸酚、咖啡酸對照品，分別加無水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。（3）對照藥材溶液的制備：取大黃對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。（4）陰性對照溶液的制備：按處方及制法，分別制成缺大黃、厚樸、牽牛子的陰性樣品，取相當(dāng)于樣品的量，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。（5）大黃、厚樸的TLC測定：吸取上述相應(yīng)溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視（鑒別大黃，見圖4A）。再噴以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視（鑒別厚樸，見圖4B）。（6）牽牛子的TLC測定：吸取上述4種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上使成條狀，以二氯甲烷-甲醇-甲酸（100∶9∶4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸無水乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視（見圖5）。

圖1 木香的TLCFig 1 TLC ofA.lappa

圖2 香附的TLCFig 2 TLC of C.rotun

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Shim-Pack CLC-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（21∶79）；檢測波長：283 nm。理論塔板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取橙皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備[2]取本品適量，研細(xì)，取約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱重，置水浴上加熱回流1 h，取出，放冷，再稱重，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取不同濃度的橙皮苷對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以對照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝344.37X－1.553 4（r＝0.999 4）。結(jié)果表明，橙皮苷對照品濃度在0.024 2～0.483 2 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 專屬性考察 精密吸取橙皮苷對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，按含量測定方法測定。結(jié)果，陰性對照溶液對試驗(yàn)無干擾。色譜見圖6。

圖3 山楂的TLCFig 3 TLC of C.pinnati fida

圖4 大黃、厚樸的TLCFig 4 TLC of R.palmatum and M.officinalis

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品6份，按含量測定方法測定。結(jié)果，橙皮苷平均含量為15.4 mg·g-1，RSD＝0.8%，表明方法重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的樣品6份，分別精密加入一定量的橙皮苷對照品，按含量測定方法測定，結(jié)果見表1。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，自制備后按含量測定方法分別于 0、2、5、9、11 h 進(jìn)樣測定。結(jié)果，橙皮苷峰面積的RSD＝0.7%，表明供試品溶液自制備后11 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.9 樣品含量測定 取本品3批，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果見表2。

圖5 牽牛子的TLCFig 5 TLC of P.nil

3 討論

筆者采用TLC法對木香、香附、山楂、大黃、厚樸和牽牛子進(jìn)行定性鑒別，結(jié)果表明陰性對照無干擾、專屬性強(qiáng)，色譜清晰，特征斑點(diǎn)分離良好，斑點(diǎn)無拖尾現(xiàn)象，可以作為制劑定性鑒別的指標(biāo)。筆者還考察了不同色譜條件下莪術(shù)、三菱的TLC，結(jié)果均存在陰性干擾，因此未收載莪術(shù)、三菱的TLC鑒別。

圖6 高效液相色譜圖Fig 6 HPLC chromatogram

表1 橙皮苷的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery test of hesperidin

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝4）Tab 2Results of content determination（n＝4）

香附的TLC鑒別試驗(yàn)過程中，考慮到α-香附酮具有揮發(fā)性，因此供試品溶液的制備過程中經(jīng)乙醚超聲處理的時(shí)間不宜過長，20 min即可，且濾過后濾液應(yīng)室溫?fù)]干。試驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)，若點(diǎn)狀點(diǎn)樣，供試品溶液中α-香附酮的斑點(diǎn)較為擴(kuò)散，不易于觀察；尤其是噴以二硝基苯肼試液，放置片刻，需要觀察斑點(diǎn)是否漸變?yōu)槌燃t色時(shí)，則更加難以準(zhǔn)確判斷。因此，確定加大點(diǎn)樣量，且必須條狀點(diǎn)樣。

筆者曾分別考察超聲和加熱回流2種提取方式，提取時(shí)間考察了30、45、60、90 min。結(jié)果顯示，加熱回流60 min的提取效率最高。

在流動相方面，筆者考察了甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）[3]，分離效果不好；改用乙腈-水（21∶79），供試品色譜中橙皮苷峰與其它色譜峰能達(dá)到基線分離，保留時(shí)間適中，理論塔板數(shù)為6 727。

綜上，所建標(biāo)準(zhǔn)可用于沉香化滯丸的質(zhì)量控制。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-中藥成方制劑（第九冊）[S].1995：87.

[2]錢 妍，趙春景.反相高效液相色譜法測定胃舒顆粒中橙皮苷的含量[J].中國藥房，2005，16（2）：140.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：132．