柴郁湯對(duì)小鼠應(yīng)激性胃潰瘍的預(yù)防作用

劉紅艷，張莉華，方步武，田在善

柴郁湯由郁金、柴胡兩味中藥組成，具疏肝活血、清心涼血、理氣開郁作用，可視為金鈴子散的變方，可單用或作為輔助藥物用于急腹癥和慢性腹部疾病。束縛-水浸法可引起應(yīng)激性胃潰瘍，但是否同時(shí)引起肝損傷未見報(bào)道[1]。本研究探討引起胃潰瘍的束縛-水浸法是否可致肝損傷，并觀察柴郁湯對(duì)該應(yīng)激性胃潰瘍的預(yù)防作用，并從抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷和保護(hù)肝功能等方面探討其作用機(jī)理，為祖國(guó)醫(yī)學(xué)“肝木乘脾土”、“肝脾同病”的理論提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠60只，SPF級(jí)，雌雄各半，體重(20±2)g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK-(軍)2002-001。

1.1.2 藥品 柴郁湯由郁金和柴胡組成,二者比例為4∶1，水煎制而成，濃度為1 g/mL，由天津市南開醫(yī)院藥物研究室制備；Vit E軟膠囊:天津中新藥業(yè)集團(tuán)有限公司第六中藥廠，批號(hào)666001；雷尼替丁膠囊:天津太平洋制藥有限公司，批號(hào)060702；大豆調(diào)和油:廣州市粵皇食品科技有限公司，批號(hào)20061109。

1.1.3 試劑 丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)20070113；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測(cè)試劑盒，批號(hào)20061207；考馬斯亮蘭蛋白定量試劑盒，批號(hào)20070115，均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。其余皆市售分析純?cè)噭?/p>

1.1.4 主要儀器 722型可見光分光光度計(jì):北京瑞科分析儀器公司；游標(biāo)卡尺,放大鏡；小鼠水浴固定器。

1.2 方法

1.2.1 藥物配制 柴郁湯高、中、低劑量:柴郁湯用藥量分別為19.50g/kg、6.50g/kg、2.17 g/kg，濃度分別為0.975 g/mL、0.325 g/mL、0.109 g/mL，用藥體積均為20mL/kg。其中6.50g/kg為臨床等效劑量。Vit E油劑:將Vit E膠囊(100mg/粒)殼剪開，以大豆調(diào)和油沖洗、溶解其內(nèi)容物，振蕩，配成3.9mg/mL的Vit E油劑。雷尼替丁混懸液:取雷尼替丁膠囊內(nèi)容物，用蒸餾水溶解，配成3.9mg/mL的雷尼替丁混懸液。用時(shí)振蕩搖勻。

1.2.2 分組與用藥 小鼠60只，按體重隨機(jī)區(qū)組法分為6組，每組10只:正常組，模型組，柴郁湯高、中、低劑量組，陽(yáng)性藥物組。實(shí)驗(yàn)周期為7 d。前5 d，各組分別灌胃各自的藥物:正常組和模型組灌胃蒸餾水20mL/kg；柴郁湯高、中、低劑量組分別灌胃高、中、低劑量的柴郁湯，皆為20mL/kg；陽(yáng)性藥物組:同時(shí)灌胃VitE及雷尼替丁的混懸液各10mL/kg，均為每日1次。

1.2.3 束縛-水浸法應(yīng)激性胃潰瘍模型制備 末次給藥后禁食24 h，不禁水。除外正常對(duì)照小鼠，將其余小鼠裝入特制鼠籠，浸入(18±1)℃的水，水面平小鼠劍突處，水浸應(yīng)激20 h后，取出吹干。摘眼球取血；頸椎脫臼處死小鼠，剖腹，留取肝臟；結(jié)扎幽門部，灌胃0.4%福爾馬林溶液1mL，結(jié)扎賁門部，游離胃，固定30min后，沿胃大彎剪開，0.9%氯化鈉溶液沖去胃內(nèi)容物，展平。

1.2.4 指標(biāo)觀測(cè) 按Guth標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算各組小鼠潰瘍指數(shù)和抑制率[2],按潰瘍或糜爛面積計(jì)分。點(diǎn)狀出血:每3個(gè)點(diǎn)狀潰瘍(黏膜缺損小于1mm或出血性糜爛小點(diǎn),稱點(diǎn)狀潰瘍)計(jì)1分。條狀出血:以游標(biāo)卡尺測(cè)量潰瘍面的最大長(zhǎng)徑和垂直于最大長(zhǎng)徑的最大寬徑，二者的乘積即為潰瘍指數(shù)。1mm寬者每毫米長(zhǎng)為1分；2mm寬者每毫米長(zhǎng)為2分；3mm寬者每毫米長(zhǎng)為3分。潰瘍抑制率(%)=(模型對(duì)照組平均潰瘍指數(shù)－用藥組平均潰瘍指數(shù))/模型對(duì)照組平均潰瘍指數(shù)。這里，用藥組平均潰瘍指數(shù)改為用藥組每只動(dòng)物的潰瘍指數(shù)，以便計(jì)算出用藥組潰瘍抑制率的平均數(shù)而進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

肝組織MDA:用0.86%氯化鈉(4℃預(yù)冷)將肝沖洗干凈，以濾紙吸干水分，稱重，液氮中凍存，以1∶9(W∶V)制備肝組織勻漿，離心取上清。對(duì)上清液中的蛋白定量并按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定MDA。血清ALT按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定。

2 結(jié)果

2.1 藥物對(duì)小鼠應(yīng)激性胃潰瘍的影響 與正常組比較，模型組潰瘍指數(shù)顯著增高(P<0.01)；與模型組比較，柴郁湯高、中劑量組和陽(yáng)性藥物組潰瘍指數(shù)明顯降低(P<0.01)。柴郁湯高劑量組的潰瘍指數(shù)和潰瘍抑制率分別與陽(yáng)性藥物組比較差異無(wú)顯著性意義，但柴郁湯中、低劑量組的作用弱于陽(yáng)性藥物對(duì)照組(P<0.01)。柴郁湯降低潰瘍指數(shù)和提高潰瘍抑制率的作用呈一定的量效關(guān)系（見表1）。

2.2 藥物對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍小鼠血中ALT的影響與正常組比較，模型組血中ALT顯著增高(P<0.01)；與模型組比較，柴郁湯各劑量組和陽(yáng)性藥物對(duì)照組ALT明顯降低(P<0.01)，且高劑量的柴郁湯的作用明顯優(yōu)于中、低劑量的柴郁湯(P<0.01)，柴郁湯降低ALT的作用呈一定的量效關(guān)系（見表2）。

2.3 藥物對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍小鼠肝組織MDA的影響與正常組比較，模型組肝組織MDA顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，柴郁湯高、中劑量組和陽(yáng)性藥物組MDA明顯降低(P<0.01)，且高劑量的柴郁湯的作用明顯優(yōu)于中、低劑量的柴郁湯(P<0.01)，柴郁湯降低MDA的作用呈一定的量效關(guān)系（見表2）。

表1 柴郁湯對(duì)小鼠應(yīng)激性胃潰瘍的影響(）

表1 柴郁湯對(duì)小鼠應(yīng)激性胃潰瘍的影響(）

注:與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01；與柴郁湯高劑量組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與陽(yáng)性藥物組比較，$$P<0.01，ΔP=0.298

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表2 柴郁湯對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍小鼠血中ALT和肝組織MDA的影響(）

表2 柴郁湯對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍小鼠血中ALT和肝組織MDA的影響(）

注:與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01；與柴郁湯高劑量組比較，▲▲P<0.01；與陽(yáng)性藥物組比較，$$P<0.01

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3 討論

本研究采用束縛-水浸法引起小鼠胃潰瘍，潰瘍指數(shù)和形態(tài)觀察表明造模成功，并發(fā)現(xiàn)應(yīng)激性胃潰瘍小鼠同時(shí)存在肝損害，該小鼠血中ALT和肝臟MDA水平均顯著升高。胃潰瘍和肝損害皆為應(yīng)激性損傷所致，至于肝損傷是否加重胃潰瘍尚待明確。小鼠一次性拘束 l8 h即可明顯損害肝功能(ALT升高4.5倍)，本研究束縛-水浸法亦明顯損害肝功能(ALT升高1.4倍)，故水浸并未能加重肝損傷，而是束縛引起小鼠肝損傷。另有研究表明，相同水溫下束縛-浸水應(yīng)激和單純浸水應(yīng)激導(dǎo)致大鼠產(chǎn)生同等程度的胃潰瘍，故“冷水刺激”在束縛-浸水應(yīng)激導(dǎo)致的胃潰瘍中起重要作用，而“束縛刺激”不起重要作用，冷水刺激引起體溫降低是胃潰瘍的誘發(fā)因素。可見，束縛-水浸法所致胃潰瘍模型中，主要是浸入冷水引起了胃潰瘍，而束縛則主要引起肝損傷，這兩種應(yīng)激刺激引起的損傷是有差別的，而脂質(zhì)過(guò)氧化損傷為其共同的病理機(jī)制之一。

同名方柴郁湯(但組成與本研究的柴郁湯不同)對(duì)幽門結(jié)扎、消炎痛或利血平所致大鼠胃潰瘍有抑制作用[3]，但其對(duì)應(yīng)激性胃潰瘍的影響未見報(bào)道。本研究以柴郁湯(19.50g/kg、6.50g/kg、2.17 g/kg)預(yù)防束縛-水浸應(yīng)激法所致小鼠應(yīng)激性胃潰瘍，結(jié)果高、中、低劑量對(duì)潰瘍的抑制率分別為53.97%、35.31%和20.55%，高、中劑量的柴郁湯能顯著降低潰瘍指數(shù),作用存在量效關(guān)系，并且柴郁湯高劑量的作用與雷尼替丁并用Vit E相似（P>0.05），產(chǎn)生了明顯的抗應(yīng)激性胃潰瘍的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，柴郁湯對(duì)束縛-水浸法所致應(yīng)激性潰瘍小鼠血中ALT和肝組織MDA均有顯著的降低作用，并存在量效關(guān)系。19.50g/kg柴郁湯的作用與Vit E并用雷尼替丁的作用相似，表明柴郁湯具有確切的保肝作用，其作用機(jī)理之一仍是該方具有抗脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的作用?？傊?，抗脂質(zhì)過(guò)氧化和保肝作用為柴郁湯抗應(yīng)激性胃潰瘍的部分作用機(jī)制。

[1]謝果，寶麗，何蓉蓉，等.榴蓮殼醇提物對(duì)應(yīng)激性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[J].中藥新藥與臨床藥理，2008,19(1):22.

[2]張玉玉，祝文興，孫一耕，等.大鼠束縛-浸水應(yīng)激模型體溫降低與應(yīng)激性胃潰瘍的關(guān)系[J].生物醫(yī)學(xué)工程研究,2007,26(3):282.

[3]韓兆豐，陳蘭羽，尤春來(lái).柴郁湯抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2002,4(4):320.