五海丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

周燕雪 青海省藥品檢驗(yàn)所(西寧 810003)

五海丸是由陳皮、昆布、浙貝母、桔梗等 8味中藥組成的大蜜丸,具有軟堅(jiān)、散結(jié)、理氣的作用,用于癭瘰初起。該制劑收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第八冊[1],有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)五海丸具有抑制小鼠肺腺癌生長,肺癌細(xì)胞自主性轉(zhuǎn)移和淋巴轉(zhuǎn)移的作用[3]。原標(biāo)準(zhǔn)中除顯微鑒別與碘化物理化鑒別外,無其他檢測項(xiàng)目。為了更好的控制五海丸質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)對其標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究,對其中的兩味君藥陳皮、桔梗進(jìn)行了薄層鑒別,并采用高效液相色譜法測定五海丸中橙皮苷的含量[2],方法簡便,專屬性強(qiáng),回收率好,結(jié)果準(zhǔn)確可靠?？筛每刂莆搴Ｍ璧馁|(zhì)量。

1 儀器與試藥 1.1 儀器 安捷倫 1100型G1314A高效液相色譜儀,SPD-10AVP紫外檢測器,化學(xué)工作站(美國 Agilent公司)。

1.2 試藥 陳皮對照藥材(120969-200507)、桔梗對照藥材(121028-200507),橙皮苷對照品(110721-200512)供含量測定用,均購自中國藥品生物制品鑒定所;甲醇為色譜純,其余試劑為分析純,水為超純水。薄層用硅膠 G板為青島海洋化工廠生產(chǎn)。

五海丸樣品與陰性藥材由青海省三普藥業(yè)股份有限公司提供,樣品批號分別為:060413,060508,060801。

2 方法與結(jié)果 2.1 薄層鑒別 2.1.1陳皮的鑒別[2]:取本品 12g,剪碎,加硅藻土 8g,研勻,加甲醇 100mL,超聲處理 30min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)铀?0mL溶解,用乙酸乙酯振搖提取 2次,每次 20mL,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘?jiān)蛹状?1mL使溶解,作為供試品溶液[2]。同法制的缺陳皮的陰性對照溶液。另取陳皮對照藥材 1g,加甲醇 20mL,同法制成對照藥材溶液。再取橙皮苷對照品,加甲醇制成飽和溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法,吸取供試品溶液 10 μ L;對照藥材、對照品溶液兩種溶液各 4 μ L。分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以乙酸乙酯-甲醇-水 (10∶ 2∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以 1%三氯化鋁乙醇溶液,置紫外燈(365nm)下檢視,供試品色譜中,在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性無干擾,見圖 1。

2.1.2 桔梗的鑒別[2]:取本品 18g,剪碎,加硅藻土 12g,研勻,加 7%硫酸乙醇-水(1:3)混合液 100mL,加熱回流 3h,濃縮至約 20mL,放冷,用三氯甲烷振搖提取 2次,每次 20mL,合并三氯甲烷液,加水 30mL洗滌,棄去洗液,三氯甲烷液用無水硫酸鈉脫水,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)蛹状?1mL使溶解,作為供試品溶液。同法制的缺桔梗的陰性對照溶液。另取桔梗對照藥材1g,加 7%硫酸乙醇-水(1∶3)混合液 20m L,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法,吸取上述兩種溶液各15 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上,以環(huán)己烷-乙酸乙酯(1.5∶ 1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以 10%硫酸乙醇溶液,105℃加熱至顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性無干擾,見圖 2。

2.2 含量測定 2.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱:Agilent ECLIPEX X DB-C18色譜柱(250mm×4.6mm,5um);柱溫:25℃;流動(dòng)相:甲醇-0.5%醋酸溶液 (45∶55);流速 1.0mL? min-1;檢測波長:283nm。在此條件下橙皮苷與其他組分基線分離良好,橙皮苷峰理論板數(shù)為 8540。

2.2.2 對照品溶液的制備:精密稱取橙皮苷對照品 11.42mg,置 50mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻;精密量取上述橙皮苷對照品溶液 1m L,置10mL容量瓶中,并加甲醇稀釋置刻度,搖勻即得,橙皮苷對照品溶液濃度為 0.02284mg/mL。

2.2.3 供試品溶液制備[2]:取本品 5丸,精密稱定,按本品:硅藻土 (3∶ 2)比例加入已經(jīng)精密稱定的硅藻土,研細(xì),混勻,取約 1g,精密稱定,加入甲醇 50mL,稱定重量,加熱回流提取 1h,放冷,再稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液20mL于 25mL量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備:除陳皮以外七味藥材按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備。在上述色譜條件下,精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各 10 μL,分別注入液相色譜儀,色譜圖見圖 3。橙皮苷的保留時(shí)間為 13min,橙皮苷與相鄰組分達(dá)基線分離,陰性對照在此無干擾。

2.2.5 線性關(guān)系:分別精密吸取上述對照品溶液(0.02284 mg/mL)4、 10、 16、 22、 28 μL,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo),橙皮苷進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),回歸方程為:Y=31.616X+50.579,r=1.0000。

結(jié)果表明,橙皮苷進(jìn)樣量在 0.09136mg～ 0.6395mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗(yàn):精密吸取橙皮苷對照品溶液(0.02284 mg/m L)10 μL,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣 5次,測定峰面積,峰面積的 RSD為 1.60%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在該條件下精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品(批號 060508)的樣品 5份,按“2”項(xiàng)下供試品溶液的方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下,每份樣品進(jìn) 2針,每針10 μL,計(jì)算含量 ,結(jié)果平均含量 (n=5)為 6.66mg/粒 ,RSD為 0.67%。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn):取供試品溶液 (批號060413),按上述色譜條件,分別在 0,5,10,15,24h進(jìn)樣 10 μL,測定峰面積,峰面積的 RSD為 0.94%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在 24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 回收率試驗(yàn):精密稱取橙皮苷,加甲醇制成濃度為 4.016 μ g/m L對照品溶液。取已知含量的五海丸樣品(批號 060508,橙皮苷含量為 6.69mg/丸)0.45g共 6份,精密稱定,分別精密加入橙皮苷對照品(0.2284mg/mL)溶液 5mL,按供試品制備的方法制成供試品溶液。在上述色譜條件下,分別進(jìn)樣 10 μ L,進(jìn)行測定,計(jì)算平均回收率,結(jié)果(n=6)為 99.13%(RSD=1.02%)。 見表 1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 樣品測定:按上述含量測定方法,對 3批樣品進(jìn)行含量測定,結(jié)果見表 2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討 論 3.1五海丸由昆布、海藻、陳皮、檳榔、浙貝母、蛤殼(煅)、桔梗、夏枯草八味中藥組成。五海丸原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡單,對藥品質(zhì)量無法進(jìn)行控制,本文建立了用薄層色譜法鑒別陳皮、桔梗,并采用高效液相色譜法測定五海丸中橙皮苷的含量,實(shí)驗(yàn)證明,該方法可操作性強(qiáng),檢測靈敏度高,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,重現(xiàn)性好,能有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

3.2 五海丸采用了甲醇索氏提取、甲醇超聲提取、甲醇加熱回流提取,通過以上 3種方法,不同的提取時(shí)間比較,以甲醇加熱回流 1h為佳,有效成份提取完全,方法簡便,便于操作,結(jié)果準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,故選為本法的樣品處理方法。

3.3 本研究同時(shí)對君藥昆布、海藻也進(jìn)行了含量測定的摸索[2]。①由于本品為大蜜丸,直接進(jìn)行含量測定由于顏色干擾無法進(jìn)行。②供試品經(jīng)剪碎,400℃～500℃加熱熾灼灰化,煮沸,濃縮等前處理工序,其熾灼殘?jiān)静换一?均為堅(jiān)韌且極難粉碎的小塊狀物,且在水中煮沸也不溶散,致使前處理十分困難。方法學(xué)考察表明,精密度、重復(fù)性的 RSD分別為 1.21%和 1.15%,均遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足容量分析法的要求(RSD≤0.2%),且加樣回收率低,說明此方法準(zhǔn)確性差,可操作性也差。另外溫度大于 560℃進(jìn)行灰化,昆布、海藻中經(jīng)氧化生成碘酸根離子融熔、分解,無法進(jìn)行含量測定,故無法建立對昆布、海藻中碘含量測定方法。仍采用原標(biāo)準(zhǔn)對昆布、海藻中碘化物進(jìn)行理化鑒別。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn) [S].中藥成方制劑 (第八冊).北京.1993:37.

[2]國家藥典委員會.中國藥典一部 [S].北京.化學(xué)工業(yè)出版社,2005:132,146,196,208.

[3] 田 菲,賈英杰.五海丸抗 LA795小鼠肺癌腺細(xì)胞轉(zhuǎn)移的研究 [J].中醫(yī)藥學(xué)刊 ,2002,20.(7):37-40.