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    肝癌組織IGFBP2、GRP94表達(dá)的病理意義

    2010-04-23 02:33:42姚衛(wèi)紅
    關(guān)鍵詞:生長因子肝硬化染色

    姚衛(wèi)紅

    (長治市人民醫(yī)院,山西 長治046000)

    研究顯示胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2(insulin-like growth factor binding protein-2,IGFBP2)在腫瘤細(xì)胞形成、生長等過程中發(fā)揮著重要的作用,在許多腫瘤患者的血清、腫瘤組織和細(xì)胞株中都有IGFBP2的表達(dá)或表達(dá)水平升高[1]。糖調(diào)節(jié)蛋白-94(glucose-regulated protein,GRP94)在腫瘤免疫中的作用也已成為研究的熱點,已經(jīng)證實它具有良好的“分子伴侶”和免疫佐劑的效應(yīng),可在體內(nèi)誘導(dǎo)特異性主動免疫[2]。IGFBP2和GRP94在腫瘤組織中如何表達(dá)且是否具有相關(guān)性,目前還沒有文獻(xiàn)報道。因此為探討IGFBP2、GRP94與肝硬化和肝癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)的關(guān)系,本研究檢測了35例HCC患者的癌組織和相應(yīng)的癌旁組織以及20例肝硬化患者肝組織中IGFBP2、GRP94蛋白的表達(dá),探討IGFBP2、GRP94蛋白與肝癌的關(guān)系及其他們之間的相關(guān)性,以探索IGFBP2、GRP94在肝硬化向肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料

    35例HCC及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本 (肝癌組)、20例肝硬化組織標(biāo)本 (肝硬化組)均來自2003年11月-2008年11月我院病理科。肝癌組中,男24例,女 11 例,年齡 38 歲~51 歲,平均(43.22±8.93)歲;肝硬化組中,男12例,女8例,年齡13歲~67歲,平均(43.83±14.44)歲;6例正常肝組織標(biāo)本 (健康對照組)中,男 3例,女 3例,年齡 25歲~57歲,平均(45.33±5.35)歲。健康對照組為手術(shù)切除的肝血管瘤外正常肝組織。病理組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定,石蠟包埋,4 μm厚連續(xù)切片。肝癌組腫瘤病理分級按WHO標(biāo)準(zhǔn)分為,高分化(G1級)18 例、中分化(G2級)10 例、低分化(G3級)7 例[3]。 肝硬化組中,輕度腹水9例,中度腹水6例,重度腹水5例。

    1.2方 法

    HCC及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本、肝硬化標(biāo)本、正常肝組織標(biāo)本均行IGFBP2、GRP94(均為單抗,美國Santa Cruz公司產(chǎn)品)免疫組織化學(xué)染色,染色方法按SABC說明書步驟進(jìn)行 (SABC試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司)。組織微波預(yù)處理,微波抗原修復(fù)液為pH6.0檸檬酸緩沖液,經(jīng)DAB顯色后,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片。同時設(shè)陰性對照,陰性對照采用磷酸鹽緩沖液代替第一抗體。

    1.3 結(jié)果判定

    用Image-Pro Plus型全自動醫(yī)學(xué)圖象彩色分析系統(tǒng)進(jìn)行圖象半定量分析,每張切片隨機(jī)選取5個視野(×400),測定肝組織中棕黃色陽性表達(dá)顆粒的積分吸光度值,該值越高表達(dá)越強(qiáng)。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

    2 結(jié) 果

    2.1 HE染色結(jié)果

    HCC組中,28例呈梁索型,癌細(xì)胞排列成梁狀或竇隙狀結(jié)構(gòu);7例呈腺樣型,癌細(xì)胞排列成假腺樣及腺泡狀結(jié)構(gòu)。肝硬化組中,厚實、寬度不等的纖維間隔分割肝小葉形成大小不等、形態(tài)不整齊的假小葉。健康對照組中肝細(xì)胞排列整齊,肝小葉結(jié)構(gòu)完整,僅見少許纖細(xì)纖維分布于血管壁。

    2.2 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果

    2.2.1 IGFBP2在肝組織中的表達(dá) 健康對照組僅見少數(shù)肝細(xì)胞有陽性染色;在肝硬化組可見肝竇內(nèi)和纖維間隔內(nèi)的HSC、成纖維細(xì)胞、枯否細(xì)胞及纖維間隔周圍的肝細(xì)胞有較強(qiáng)的陽性染色;在肝癌組,陽性定位于癌細(xì)胞胞質(zhì),呈灶性分布。圖象分析結(jié)果表明:IGFBP2在肝癌組和肝硬化組肝組織的表達(dá)顯著高于健康對照組,并且在肝癌組肝組織的表達(dá)顯著高于肝硬化組肝組織。結(jié)果見表1。

    2.2.2 GRP94蛋白在肝組織中的表達(dá) 35例肝癌組織中30例(85.0%)存在GRP94的表達(dá),不同癌組織存在胞質(zhì)、胞膜和胞核表達(dá)強(qiáng)度及部位的差異,癌旁組織亦存在較弱的表達(dá)。人肝癌組織存在GRP94的表達(dá)異質(zhì)性,呈現(xiàn)了胞質(zhì)、胞膜和胞核的表達(dá)差異。結(jié)果見表1。

    表1 IGFBP2與GRP94在肝組織中表達(dá)的定量分析結(jié)果 (±s)

    表1 IGFBP2與GRP94在肝組織中表達(dá)的定量分析結(jié)果 (±s)

    注:與健康對照組比較,1)P<0.05;與肝硬化組比較,2)P<0.05

    組別 例數(shù) IGFBP2 GRP94蛋白健康對照組 6 580.2±83.5 152.6±41.3肝硬化組 20 8475.6±1556.41) 802.6±389.91)肝癌組 35 17731.2±1932.51)2) 3015.4±1851.11)2)

    2.2.3 相關(guān)性分析 肝組織IGFBP2的表達(dá)與肝組織GRP94的表達(dá)呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r值為0.625。

    3 討 論

    IGFBP是能與胰島素樣生長因子 (insulin-like growth factor,IGF)結(jié)合的調(diào)節(jié)蛋白,調(diào)節(jié) IGF與其受體的結(jié)合能力,從而影響胰島素樣生長因子受體(insulin-like growth factor receptor,IGFR) 下游的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。體外研究顯示,IGFBP可通過IGF依賴性和非IGF依賴性兩種作用方式,對細(xì)胞的生長、分化和存活發(fā)揮作用[3-4]。有研究顯示,肝癌組血清IGFBP-2水平明顯高于肝硬化組和健康對照組[5]。本實驗結(jié)果顯示,在肝硬化、肝癌和正常肝組織的免疫組化中,IGFBP2在健康對照組正常肝組織微弱表達(dá),在肝硬化組和肝癌組肝組織的表達(dá)明顯增強(qiáng);在肝癌組織及同一肝癌組織的不同癌細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)度和分布部位存在一定的差異,癌組織比鄰近的正常組織表達(dá)水平顯著升高;肝硬化的病例相差較懸殊,有的病例染色程度及范圍與肝癌病例相似;有的病例染色程度與正常肝組織相似,呈低水平表達(dá)。如果以上結(jié)論成立,那么我們可以推測肝硬化病例相差懸殊的染色程度其實可能顯示癌變可能性的大小或者說標(biāo)志著癌變的進(jìn)程。

    正常細(xì)胞生長發(fā)育分化過程中,GRP94的少量表達(dá)和分布受到細(xì)胞周期的嚴(yán)格調(diào)控,而腫瘤細(xì)胞中由于突變或癌蛋白的存在刺激GRP94的合成,使其呈現(xiàn)持續(xù)的高誘導(dǎo)表達(dá)[6]。本實驗免疫組化染色結(jié)果顯示,GRP94蛋白在肝癌組肝組織的表達(dá)顯著高于肝硬化組和健康對照組肝組織的表達(dá)。說明GRP94蛋白在肝硬化向肝癌的發(fā)展中可能起重要作用,與以往報道相似。本研究結(jié)果也顯示了肝組織IGFBP2的表達(dá)與肝組織GRP94的表達(dá)呈正相關(guān),推測IGFBP2和GRP94可能協(xié)同發(fā)揮作用。IGFBP2、GRP94在肝癌組肝組織表達(dá)水平顯著高于肝硬化組,在肝硬化組中表現(xiàn)形式的多樣性,說明它可能是參與肝硬化向肝癌發(fā)展的因素。目前有關(guān)它們相互作用的機(jī)制還不清楚,有待于今后進(jìn)一步研究。

    [1]鄧星輝,楊竹林.胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2與腫瘤發(fā)生[J].國外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌分冊,2003,24(1):5.

    [2]王小平,劉國貞,宋愛利,等.人肝癌組織糖調(diào)節(jié)蛋白94的表達(dá)及其意義[J].腫瘤防治雜志,2004,11(11):1166-1167.

    [3]Wolf E,Schneider M R,Zhou R,et al.Functional consequences of IGFBP excess-lessons from transgenic mice [J].Pediatr Nephrol,2005,20(3):269-278.

    [4]Ranke M B,Maier K P,Schweizer R,et al.Pilot study of elevated levels of insulin-like growth factor-binding protein-2 as indicators of hepatocellular carcinoma[J].Horm Res,2003,60(4):174-180.

    [5]楊帆.胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-2水平與肝癌關(guān)系的研究[J].臨床外科雜志,2007,15(7):7.

    [6]Lim S O,Park S G,Yoo J H,et al.Expression of heat shock proteins (HSP27,HSP60,HSP70,HSP90,GRP78,GRP94)in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinomas and dysplastic nodules[J].World J Gastroenterol,2005,11(14):2072-2079.

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