膜突蛋白Moesin在AGEs刺激小鼠各器官磷酸化及其機制研究

黃巧冰 李巧琴 王陵軍 郭曉華 陳 波 李 強

南方醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病理生理教研室,廣州,510515

目的:探討糖基化蛋白終產物(AGEs)刺激對小鼠各器官膜突蛋白(Moesin)磷酸化水平變化及其機制。方法:D-葡萄糖與小鼠白蛋白(MSA)共同孵育8周,經過濾透析制備成含有AGEs 72.50 U/mg蛋白的AGE-MSA,而對照組天然MSA中只含有AGEs 0.85 U/mg蛋白。將C57 BL/6雌性小鼠隨機分成(1)對照組:每天定時腹腔注射天然MSA10 mg/kg體重,連續(xù)注射7天;(2)AGE組:每天定時腹腔注射AGEMSA 10 mg/kg,連續(xù)注射7天;(3)SB203580+AGE組和Y27632+AGE組:在給予AGE-MSA前30min,分別預先腹腔注射p38 MAPK抑制劑SB203580(1 mg/kg),或ROCK抑制劑Y27632(5 mg/kg),連續(xù)7天。制備模型后,取小鼠的眼球、大腦、心臟、肝臟、腎臟進行石蠟包埋、切片,通過免疫組織化學對各臟器Moesin及其磷酸化表達水平的變化進行觀察比較;用Western blot檢測Moesin及其磷酸化水平的變化,并觀察p38 MAPK和ROCK磷酸化的改變;用伊文思藍漏出法分別檢測活體小鼠視網(wǎng)膜血管通透性和血腦屏障的功能變化。分別分離視網(wǎng)膜血管和腦微血管。結果:免疫組化結果表明,對照組Moesin主要表達在各臟器的微血管內皮細胞;AGEs刺激、p38MAPK抑制劑SB203580或ROCK抑制劑Y27632預處理后再給予AGE-MSA刺激均不影響Moesin蛋白的表達;AGE組各臟器血管內皮細胞的磷酸化Moesin的著色明顯加深;SB203580或Y27632預處理后再給予AGEs可明顯減輕磷酸化Moesin的著色。Western blot結果顯示AGE組視網(wǎng)膜血管和腦微血管Moesin蛋白表達沒有明顯變化,但是磷酸化Moesin的含量明顯增加,用p38 MAPK和ROCK抑制劑抑制了二者的磷酸化后,AGE組的磷酸化 Moesin變化被阻斷。AGE-MSA刺激導致伊文思藍視網(wǎng)膜血管和血腦屏障中的漏出明顯增多,分別是對照組的2.8倍和2.7倍;用p38 MAPK和ROCK抑制劑預處理小鼠,可以明顯減輕視網(wǎng)膜通透性的增高和血腦屏障功能的障礙。結論:Moesin磷酸化對血管內皮細胞功能有明顯的影響;AGEs刺激導致小鼠各臟器內皮細胞Moesin蛋白的磷酸化,p38 MAPK和ROCK兩條信號途徑參與了Moesin磷酸化過程。