高效液相色譜法同時(shí)測定復(fù)方草珊瑚含片中3種酚酸的含量

李詒光 ，呂毅斌 ，羅躍華 ，盧建中 ，羅文華

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生，北京 100029；2.江中藥業(yè)股份有限公司技術(shù)中心，南昌 330096；3.江西省食品藥品檢驗(yàn)所，南昌 330029）

高效液相色譜法同時(shí)測定復(fù)方草珊瑚含片中3種酚酸的含量

李詒光1，2，呂毅斌2，羅躍華3，盧建中2，羅文華2

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)研究生，北京 100029；2.江中藥業(yè)股份有限公司技術(shù)中心，南昌 330096；3.江西省食品藥品檢驗(yàn)所，南昌 330029）

[目的]建立有效的控制復(fù)方草珊瑚含片質(zhì)量的方法。[方法]通過高效液相色譜法，SunFire ODS色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫；流速為每分鐘0.8mL；柱溫為38℃；檢測波長294 nm。[結(jié)果]原兒茶酸、迷迭香酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸線性范圍分別為2.508～50.16 ng、41.04～820.8ng、18.40～368.0 ng。[結(jié)論]該法快速、簡便、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性好。

腫節(jié)風(fēng)；原兒茶酸；3-羥基-4-甲氧基苯甲酸；迷迭香酸

復(fù)方草珊瑚含片由腫節(jié)風(fēng)浸膏、薄荷腦、薄荷油組成，具有疏風(fēng)清熱，消腫止痛，清利咽喉作用。研究發(fā)現(xiàn)腫節(jié)風(fēng)的主要成分有原兒茶酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、迷迭香酸等酚酸成分。從文獻(xiàn)可知迷迭香酸具有抗菌、抗炎、抗病毒等生物活性[1-3]，與腫節(jié)風(fēng)的藥理作用和臨床適用癥完全吻合。目前針對腫節(jié)風(fēng)藥材的含量測定指標(biāo)有異嗪皮啶、反丁烯二酸和總黃酮。為更有效地控制復(fù)方草珊瑚含片的質(zhì)量，首次建立了在同一種色譜條件下，同時(shí)測定原兒茶酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸和迷迭香酸含量的方法。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器設(shè)備 Waters600型高效液相色譜儀，Waters 2996型二極管陣列紫外檢測器；Sartorius MB6148電子天平；BRANSON B3200S-T型超聲波震蕩器。

1.2 試劑與試藥 原兒茶酸對照品，中國藥品生物制品檢定所提供，批號200503；迷迭香酸對照品，中藥固體制劑國家工程研究中心提供，批號050419；3-羥基-4-甲氧基苯甲酸對照品，江中藥業(yè)股份有限公司自制，含量99.5%。乙腈、甲醇為色譜純；磷酸等均為分析純。復(fù)方草珊瑚含片，江中藥業(yè)股份有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters-SunFireODS（4.6mm×150mm，5μm），流動(dòng)相：A相為乙腈，B相為0.1%磷酸水溶液（含2.5%乙腈），線性梯度洗脫：0～12min，0～95%A；12～50 min，5%～20%A；50～60 min，20%～70%A；流速：0.8mL/min，柱溫：38℃，檢測波長：294nm。

2.2 對照品溶液的制備 分別取原兒茶酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸、迷迭香酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1mL約含原兒茶酸1.5μg、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸18μg、迷迭香酸41μg的混合溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品10片，除去薄膜衣，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率 300W，頻率 25 kHz）30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密稱取原兒茶酸、迷迭香酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸對照品適量，用甲醇制成1mL含原兒茶酸2.508μg、迷迭香酸41.04μg、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸18.40μg的混合溶液。精密吸取上述對照品溶液 1.0、2.0、5.0、10.0 和 20.0 μL，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，原兒茶酸、迷迭香酸、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸線性范圍分別為 2.508～50.16 ng（Y=2 383.7X-1 376.5，r=0.999 7）、41.04～820.8 ng（Y=2 669.1X+6 623.6，r=0.999 9）18.40～368.0 ng（Y=2 469.6X+1 403.3，r=0.999 9）。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取原兒茶酸、迷迭香酸和3-羥基-4-甲氧基苯甲酸混合對照品溶液10μL，依法進(jìn)樣測定5次，峰面積的相對平均標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）值分別為原兒茶酸0.52%、迷迭香酸0.48%、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸0.36%。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)儀器的精密度好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取本品（批號0705010）供試品溶液分別于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 進(jìn)樣依法測定樣品含量，RSD分別為原兒茶酸0.68%、迷迭香酸1.11%、3-羥基-4-甲氧基苯甲酸0.99%。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取本品（批號0705010）5份，按供試品制備方法制備，依法測定，計(jì)算平均含量，原兒茶酸為10.54μg/片，RSD=0.96%；迷迭香酸為580.72 μg/片，RSD=0.83%；3-羥基-4-甲氧基苯甲酸為175.66μg/片，RSD=1.26%。結(jié)果表明，本方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的本品 (批號0705010)，取約相當(dāng)于80%、100%、120%的細(xì)粉適量共9份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入對照品溶液適量，按供試品制備方法處理，依法測定。按外標(biāo)法計(jì)算得加樣回收率分別為：原兒茶酸101.64%，RSD為3.0%；迷迭香酸98.21%，RSD為4.2%；3-羥基-4-甲氧基苯甲酸99.06%,RSD為0.88%。結(jié)果表明，本方法回收率良好。

2.9 樣品含量測定 分別測定5批樣品各組分的含量，結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 檢測波長的確定 分別取3種對照品溶液和供試品溶液，按色譜條件測定，通過二極管陣列檢測器采集紫外吸收光譜圖。結(jié)果表明，當(dāng)檢測波長為294 nm時(shí),供試品溶液的色譜圖干擾色譜峰較少，且3種組分的色譜峰峰形及響應(yīng)值均較為理想。

3.2 超聲處理時(shí)間的確定 取同批號樣品5份，各精密加入甲醇 25mL，分別超聲處理 10、20、30、40、60min，同法測定。結(jié)果超聲30、40和60min測得的含量基本一致。

[1]S.Huang,R.Zheng.Rosmarinic acid inhibits angiogenesis and its mechanism ofaction in vitro[J].Cancer Letters,2006,239(2):271-280.

[2]李偉光,梁敬鈺.迷迭香酸的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2004,16(1):1-4.

[3]乃海燕.迷迭香酸的研究進(jìn)展[J].美國中華醫(yī)學(xué)臨床雜志,2005,7(1):83-86.

Simultaneousdeterm ination of three phenolic acids in Fufang Caoshanhu buccalby HPLCmethod

LIYi-guang1,2,LV Yi-bin2,LUOYue-hua3,etal
（1.Beijing University ofChineseMedicine， Beijing 100029， China； 2.Jiangzhong PharmaceuticalCo.LTD.，Nanchang 330096， China；3.JianXiProvicial Institate for Drog and Food Contral,Nanchang330029,China ）

[Objective]To establish themethod for simultaneous determination of three phenolic acids in Fufang Caoshanhu buccal tabletsby high performance liquid chromatograph.[Methods]The HPLCanalysiswas performed on SunFire ODScolumn by using gradientelution.Themobile phasewas consisted ofacetonitrile-0.1%phosphoric acid solution；the detection wavelength was 294 nm；the column temperature wasmaintained at 38 ℃；the flow rate was 0.8m l/min.[Results]Procatechuic acid,Rosmarinic acid,3-Hydroxy-4-methoxy benzoic acid showed good linearity in the correspondentconcentration 2.508～50.16 ng,41.04～820.8 ng,18.40～368.0 ng respectively.[Conclusion]Themethod wasaccurate，repeatable and simple foranalysisof Fufang Caoshanhu buccal tablets.

Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai;Procatechuic acid;3-Hydroxy-4-methoxy benzoic acid;Rosmarinic acid

R284.1

A

1672-1519(2010)02-0158-02

李詒光（1974-），男，碩士，副主任醫(yī)師，2007級在讀博士研究生，主要從事中藥質(zhì)量與開發(fā)工作。

呂毅斌。

2009-09-30）