菜籽餅（粕）中抗?fàn)I養(yǎng)因子檢測方法的研究進展

浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所 黃輝龍 鄒曉庭＊

油菜籽是我國主要油料作物之一，年產(chǎn)量在1100萬噸以上。油菜籽經(jīng)榨油之后產(chǎn)生的菜籽餅（粕）是優(yōu)質(zhì)的蛋白資源。但由于菜籽餅（粕）中存在一些抗?fàn)I養(yǎng)因子從而使其利用受到限制。菜籽中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子包括硫代葡萄糖甙 （硫甙）、芥酸、植酸和單寧。菜籽中的硫甙本身毒性不大，但在芥子酶的作用下可水解生成異硫氰酸酯（ITC）、 唑烷硫酮（OZT）和腈等多種有毒物質(zhì)。這幾類物質(zhì)的毒性非常大，一旦進入動物體內(nèi)，會引起動物甲狀腺腫大，抑制動物生長，損壞動物肝腎等器官，甚至造成動物死亡。芥酸、植酸和單寧等則影響動物消化和吸收。因此，了解菜籽餅（粕）中抗?fàn)I養(yǎng)因子檢測方法，對充分合理地利用菜籽餅（粕）蛋白資源有著重要意義。本文就菜籽餅（粕）中主要的抗?fàn)I養(yǎng)因子的檢測方法進行了綜述。

1 硫代葡萄糖甙的測定

根據(jù)測定原理、測定條件和測定方式，可把硫甙的測定方法分為直接法和間接法兩大類。

1.1 直接法

1.1.1 葡萄糖試紙法 葡萄糖試紙法采用美國進口的葡萄糖試紙，利用菜籽自身的酶解反應(yīng)釋放出葡萄糖的原理進行測定。分析時每份樣品隨機取3～5粒菜籽置于葡萄糖試紙上，錘子擊碎，然后每份樣品上加幾滴蒸餾水，幾分鐘后試紙即顯色，顯色按規(guī)定記載相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。最后，根據(jù)顏色的深淺，判斷硫甙含量的多少。該方法簡單快捷，不需試管和水電，分析結(jié)果較為可靠，適于育種初世代材料的快速篩選（安風(fēng)云等，2006）。

1.1.2 氯化鈀法 氯化鈀法是目前測定硫甙總量的常用方法之一。此法由原來的硫化鈀半定量比色法發(fā)展而來，其原理是鈀離子與硫甙生成一種有色絡(luò)合物，然后通過比色定量硫甙。該法的優(yōu)點是操作簡單、快速、可大量分析；缺點是不同烴基的硫甙和鈀的絡(luò)合物最大吸收和吸收系數(shù)稍有差異，難以準(zhǔn)確定量，需用同品種含量經(jīng)準(zhǔn)確定量的硫甙作校正曲線進行校正。

魏曉飛等（2009）研究表明，在波長540 nm處氯化鈀顯色液出現(xiàn)最佳吸收波長。硫甙樣液在33～35℃放置4～12 h均不影響硫甙含量的測定，在加入氯化鈀試劑后，宜在20～27℃的溫度下顯色，過高的溫度會導(dǎo)致測定結(jié)果偏高 （甘莉等，1999）。故利用氯化鈀法時必須控制好測定條件，該法適合于硫甙的精確定量測定。

1.1.3 高效液相色譜法 （HPLC）HPLC測定硫甙是利用反相高效液相色譜（RP-HPLC）技術(shù)，通過測定脫硫硫甙而測出硫甙的含量。該法的主要步驟是：經(jīng)去雜和粉碎的菜籽餅（粕）樣品用沸騰的甲醇溶液提取硫甙，提取液加入到預(yù)先制備好的凝膠柱中凈化，然后加入經(jīng)純化制備的硫酸酯酶溶液脫硫，以淋洗液將已脫硫的硫代葡萄糖苷洗脫后，選擇合適的淋洗梯度，用配備紫外檢測器的RP-HPLC儀測定。

該法已被國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）采納為國際標(biāo)準(zhǔn)方法，因它能準(zhǔn)確定量各種脫硫硫甙成分，采用內(nèi)標(biāo)法，最大限度地減少實驗誤差，是目前最為精確的分析方法。不過該法對測定硫代葡萄糖苷總量的要求難以滿足，且使用儀器昂貴，樣品前處理過程繁瑣，分析時間長，不易推廣。

1.1.4 反相離子對色譜法（RILC）RILC分離硫甙的基本原理是通過加入合適的反離子同提取液中的硫甙形成離子對，硫甙離子和反離子均易溶于水相，而組成的離子對復(fù)合物則易溶于有機相，離子對在兩相之間經(jīng)過多次分配而得到分離。

有研究表明，RILC與目前常用的HPLC測定的結(jié)果基本一致。該法具有較好的準(zhǔn)確度和精密度。相比于HPLC，運用RILC直接測定原始硫甙，在樣品預(yù)處理過程中不需加入昂貴的硫酸酯酶脫去硫酸根，從而加快了分析速度 （彭愛娟等，2000）。

1.2 間接法

1.2.1 葡萄糖比色法 本法是采用酶解方式將硫甙中的葡萄糖解離，酶解反應(yīng)具有專一性，保證測得的葡萄糖不含非硫甙葡萄糖。由于一分子硫甙解離得到一分子葡萄糖，只要準(zhǔn)確測定葡萄糖含量，即可獲得硫甙總量。根據(jù)此原理而制定的方法有3，5-二硝基水楊酸分光光度法 （印天壽和鄭慧英，1984）、蒽酮比色法（王建清和陳曼玲，1994）。 這兩種方法均有操作簡便、分析結(jié)果準(zhǔn)確，不需要昂貴酶制劑的優(yōu)點，因此適合一般分析實驗室應(yīng)用。

1.2.2 硫酸根法 此法的原理是利用鹽酸處理硫甙或用強氧化劑氧化硫甙，將硫轉(zhuǎn)化為硫酸根，然后測出硫酸根含量，繼而轉(zhuǎn)化為硫甙含量。據(jù)此原理的方法有酸解法、重量法、碘量法、EDTA容量法和電位滴定法（Mcgregor等，1983）等。

酸解法主要是根據(jù)測定樣品加熱前后硫酸根的含量，然后計算兩者的差值得出硫甙的含量。由于無法知道是否有其他物質(zhì)在同樣加熱條件下解離出硫酸根，故有可能使結(jié)果偏高，此法誤差較大。重量法是通過測定硫酸根以確定硫甙總量的一類典型方法。該法分析速度比較慢，沉淀分離步驟比較多，易使結(jié)果產(chǎn)生偏差。碘量法、EDTA容量法和電位滴定法操作繁雜，實驗時間較長，試樣用量大，難以進行大批量的樣品測定，且重復(fù)性不太好。故目前硫酸根法已不再是硫甙的常用檢測方法。

1.2.3 硫脲紫外分光光度法 硫甙在菜籽中芥子酶的作用下，水解后得到等當(dāng)量的硫酸根、葡萄糖、ITC、硫氰酸酯及腈等產(chǎn)物，逐一分析這些產(chǎn)物就可得到硫甙的總量（張菊珍等，1992）。大多數(shù)硫甙在pH值為7的中性條件下能定量地轉(zhuǎn)化為ITC，而ITC與氨反應(yīng)后得到硫脲易于定量；另外，帶有羥基的在極性條件下會自動環(huán)化生成OZT，利用硫脲及OZT在紫外區(qū)245 nm波長處均有最大吸收峰進行比色定量，從而測出硫甙的大約含量（余英等，1994）。

目前硫脲紫外法被認為是最簡單快捷的方法，已被廣泛地應(yīng)用于常規(guī)檢測中 （佘珠花，2003）。該法中最關(guān)鍵的一個環(huán)節(jié)是需要制備芥子酶來分解硫甙。所以，在實驗中應(yīng)徹底了解硫甙反應(yīng)的復(fù)雜性，嚴格控制操作條件，提高操作質(zhì)量，否則會直接影響到實驗的準(zhǔn)確性。

此外，對硫甙的測定還有色譜法、毛細管電泳法（CE）和毛細管電色譜法（CEC），然而這些方法往往都需要硫甙的標(biāo)準(zhǔn)品，而這些標(biāo)準(zhǔn)品在國內(nèi)外市場上很難得到（黑芥子甙除外），因此這些方法難以普及。

2 硫甙分解產(chǎn)物的測定

2.1 異硫氰酸酯（ITC）的測定 硫甙在中性pH條件下，經(jīng)硫苷酸酶作用后轉(zhuǎn)化為1分子葡萄糖和1個不穩(wěn)定的糖苷配基，該糖苷配基經(jīng)Lossen反應(yīng)生成ITC。ITC含量的檢測方法可歸為五大類，即重量法、氧化還原法、紫外分光光度法、比色法、氣（液）相色譜法。

重量法是最早建立起來測定ITC的方法，該法的原理是利用水蒸汽將硫甙酶解的ITC蒸餾出來并與氨反應(yīng)生成硫脲，再把硫脲中的硫轉(zhuǎn)化為硫酸鋇沉淀而定量，用該法可測定極為微量的ITC。但由于碳酸鹽不溶物或蛋白質(zhì)類物質(zhì)的沉淀干擾，可能導(dǎo)致ITC的測定結(jié)果偏高。所以之后該法逐漸被銀量法所代替。Raghavan等（1971）又將銀量法改進成容量法。容量法可檢測微量ITC，最小檢出限為50 mg/kg以內(nèi)，具有很好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。我國在1989年將容量法列為測定ITC的國家標(biāo)準(zhǔn)之一，但該法操作步驟比較繁瑣，所測批樣數(shù)量小，不適合大批量的檢測，而且由于在實驗中加入的硝酸銀會與檢測液中的某些化合物發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致測定結(jié)果可能比實際量略高。

氧化還原法種類較多，姜子濤等（1995）直接采用非水滴定（在油相中）進行測定，提出嗎啉滴定法、哌啶滴定法、氯胺-T間接氧化法、哌嗪非水滴定法和二硫代碳氨酸形成法。嗎啉滴定法是將ITC和已知濃度的過量嗎啉丙酮溶液發(fā)生反應(yīng)，生成相應(yīng)的硫脲，過量的嗎啉用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，通過消耗鹽酸的體積數(shù)，最后計算ITC的量。哌淀滴定法的原理與嗎啉滴定法基本相同，氯胺-T間接氧化法、哌嗪非水滴定法和二硫代碳氨酸形成法也都是根據(jù)返滴定原理制定的。在這些方法中，由于哌啶法簡便、省時而較為常用。不過這些方法只適用于常量分析，不適用于低硫甙菜籽餅（粕）中ITC的分析。

紫外分光光度法與硫脲紫外分光光度法測定硫甙的原理基本相同。菜籽粕中硫甙在pH為7的條件下，可被芥子酶水解生成ITC、β-OH ITC在極性溶劑中可環(huán)化成OZT，ITC與氨作用生成的硫脲和OZT在紫外區(qū)245 nm處有最大吸收，通過測定此波長下的吸光度，計算出它們的含量。后來Wetter等（1976）對此方法進行了改進，免去了制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟，使該方法更加實用。潘雷等（2009）在硫脲紫外法的基礎(chǔ)上，利用粗芥子酶，根據(jù)硫甙降解原理，推導(dǎo)出ITC含量的計算公式，可同時測定菜籽餅（粕）中硫甙、ITC和OZT含量。該法是一個較為簡便、快速和經(jīng)濟有效的毒素檢測方法。

比色法是根據(jù)菜籽餅（粕）中的硫甙在芥子酶的作用下生成相應(yīng)的ITC，用二氯甲烷或氯仿提取后再用紫外分光光度計測定。比色法測定菜籽餅（粕）中的ITC，具有操作簡便，測定時間較短，檢測成本低，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，且重復(fù)性和穩(wěn)定性好等優(yōu)點（鮑英慧，1999）。

氣（液）相色譜法測定快速，靈敏度較高，可定量到所有的單體ITC。氣（液）相色譜法是目前我國測定菜籽粕中ITC的國標(biāo)之一。氣相色譜法適用于揮發(fā)性的ITC，對于一些難揮發(fā)的ITC如ω-甲基亞硫酰烴基異硫氰酸酯就需要用液相色譜法來分析。另外，高壓液相色譜能用于快速定量微量的烯丙基異硫氰酸酯，檢出限達0.2 μg/mL（Ye等，2002）。但色譜法的缺點是儀器設(shè)備昂貴，分析成本高。

2.2 OZT的測定 側(cè)鏈上帶有一羥基的硫甙經(jīng)酶解產(chǎn)生的β-OH ITC是OZT的前體物質(zhì)，在極性條件下轉(zhuǎn)化成OZT。OZT分子中具有一定的共軛體系，物質(zhì)結(jié)構(gòu)中處于共軛的不飽和碳氫化合物和具有孤對電子的化合物在紫外區(qū)245 nm都有特征吸收峰，由此建立了OZT的檢測方法。目前測定OZT的一般方法是將硫甙酶解產(chǎn)物過濾得濾液，用乙醚提取濾液，加入95%乙醇水浴生成OZT，然后在紫外235、245 nm和255 nm處分別測其吸光值，校正光密度，以5-乙烯基 唑烷硫酮分別表示OZT的含量（Leming等，2004）。

此外，如果有OZT標(biāo)準(zhǔn)化合物作參比，利用HPLC可以同時分離和定量菜籽餅粕中的OZT的含量。

2.3 腈化物的測定 硫甙在酸性（pH＜5）或Fe2+存在條件下水解或非酶降解都會產(chǎn)生腈。目前，測定腈化物的方法有滴定法、比色法、離子色譜法、原子吸收法、氣相色譜法等。其中以比色法和滴定法最為適用，方法簡易、直觀而且準(zhǔn)確度高。

目前測定腈化物最常用的滴定法是硝酸銀滴定法。菜籽餅（粕）中經(jīng)硫甙分解產(chǎn)生的腈化物經(jīng)水浸泡后，進行水蒸汽蒸餾，蒸出的氫氰酸被堿液吸收。然后在堿性條件下，以碘化鉀為指示劑，用硝酸銀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定定量。

最常用的比色法有吡啶-巴比妥酸比色法、異煙酸-吡唑啉酮比色法和異煙酸-巴比妥酸比色法。這三種方法均是在一定條件下，通過腈化物轉(zhuǎn)化成氯化腈，然后加入顯色劑生成顯色的化合物，而該種顯色化合物在一定濃度范圍內(nèi)，其色度與氰化物含量成正比，最后進行光度測定定量。此三種比色法從精密度、重復(fù)性及準(zhǔn)確度三方面比較，異煙酸-巴比妥酸比色法優(yōu)于其他兩種。周小潔等（2008）報道，這三種比色法的測定結(jié)果與硝酸銀滴定法沒有顯著差異，但相比而言，比色法操作過程簡單，試劑使用較少。

氣相色譜法是一種測定痕量腈含量的最好方法，準(zhǔn)確度高，靈敏度好，檢出限為1～5 mg/kg，可分離定量每一種腈。不過此法要求特殊的色譜柱和檢測器，使用儀器昂貴，成本高。國內(nèi)外還有報道，紅外光譜定量法測定腈的含量，該法受其他雜質(zhì)成分的干擾小，但檢出限為1000 mg/kg，僅適用于常量分析。

3 芥酸的測定

芥酸是菜籽餅（粕）中含量較高一種抗?fàn)I養(yǎng)因子。目前測定芥酸的主要方法有化學(xué)滴定法、高效氣（液）相色譜法和近紅外光譜分析法等。

化學(xué)滴定法測定芥酸是利用芥酸的金屬鹽與一般飽和脂肪酸的金屬鹽性質(zhì)相近而與油脂中的不飽和脂肪酸分離，從而通過碘量法測定芥酸的含量。不過此法滴定過程影響因素大，且操作繁瑣，靈敏度低，重復(fù)性差，尤其不適用于低芥酸樣品的檢測。

HPLC是一種測定芥酸非常精確的方法，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，回收率高，重復(fù)性好。氣相色譜法使用儀器昂貴，且色譜周期長、操作過程復(fù)雜，一般適合于實驗室的檢測。氣相色譜-質(zhì)譜法測定芥酸，色譜峰分離好，無干擾，質(zhì)譜定性，內(nèi)標(biāo)法定量，快速準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好。然而質(zhì)譜儀價格昂貴，難以推廣。

近紅外光譜分析法不需要對樣品做任何預(yù)處理，測定結(jié)果準(zhǔn)確，是一種值得推廣的快速測定芥酸含量的方法（陳蛋等，2007）。但近紅外分析模型的建立需要有大批量已知標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)值的樣品，對菜籽餅（粕）中芥酸測定模型的代表性和準(zhǔn)確性等方面需作進一步研究。

4 植酸的測定

植酸，又名肌醇六磷酸（IP6，C6H18O24P6）。 一般菜籽餅（粕）中植酸含量為2%～5%。目前，對植酸的測定分析方法有很多，例如滴定法、比色法、沉淀法、毛細管等速電泳法（CITP）、高效離子色譜法（HPIC）、離子交換-分光光度法、HPLC和核磁共振法（NMR）等。

4.1 滴定法 滴定法測定植酸的原理是植酸與硫酸銅反應(yīng)生成植酸銅沉淀，多余的硫酸銅與碘化鉀反應(yīng)析出游離碘，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)耗用硫代硫酸鈉的量，最后計算出樣品中的植酸含量。該法操作簡便、重復(fù)性好、準(zhǔn)確性較高，是一種很好的定量植酸的方法。

4.2 比色法

4.2.1 磷鉬黃比色法 磷鉬黃比色法是結(jié)合喹鉬檸銅重量法和離子交換-分光光度法兩種方法的原理而制定的（李麗等，2008）。待測樣品首先經(jīng)硫酸鈉-鹽酸溶液浸提，再經(jīng)陰離子交換樹脂分離，將得到的植酸溶液經(jīng)消解處理。然后在酸性條件下，用釩鉬酸銨處理。最后，在波長420 nm下進行比色。

該法測定植酸含量精密度高，操作方便，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且使用的是常用的儀器和試劑，測定成本不高，是一種進行科研應(yīng)用的可靠方法。

4.2.2 三氯化鐵比色法 三氯化鐵比色法也叫測鐵分光光度法。此法測定菜籽餅（粕）中植酸含量的原理是紫紅色試劑 （0.3%磺基水楊酸+0.03%FeCl3·6H2O）在波長500 nm處有最大吸收峰，當(dāng)待測液在pH值6.0～6.5時，植酸與三氯化鐵和磺基水楊酸混合液作用，產(chǎn)生褪色反應(yīng)，植酸含量與褪色程度成正比，用分光光度計在波長500 nm處測定吸光度，計算樣品植酸含量。

當(dāng)植酸含量在0～0.5 mg時，植酸量與OD500值有很好的線性關(guān)系，超過此范圍相關(guān)性明顯下降（傅啟高和李慧荃，1997）。該法測定植酸含量操作簡單快速，準(zhǔn)確度較高，分析結(jié)果與HPIC基本一致，故此法是目前測定植酸含量的常用分析方法。

4.3 沉淀法 沉淀法的原理是植酸在弱酸性條件下與鐵離子生成穩(wěn)定的不溶物質(zhì)，經(jīng)過消化或水解后，測定沉淀物中磷的含量，可得到IP6的含量。IP6與鐵離子的比值為3∶1時即可形成沉淀，IP6與未沉淀的鐵離子之間有一定的化學(xué)計量關(guān)系并由此來計算IP6的含量。該法的缺點：一是鐵離子是對IP6及其部分脫磷酸類似物的鑒別缺乏特異性，很可能鐵離子會與部分IP5、IP4、IP3結(jié)合生成微溶物，從而使得測定結(jié)果偏高；二是該法操作繁瑣，耗時長，靈敏度低，誤差較大。所以目前該法已有被淘汰的趨勢。

4.4 毛細管等速電泳法 毛細管等速電泳（CITP）通過在毛細管內(nèi)將不同離子依其運動性不同的順序，聚集成離散化的條帶而達到分離離子成分的目的，是一種高效的分離離子成分的方法。在具有高運動活性的首離子和低運動活性的尾離子之間注入樣品。當(dāng)毛細管置于電場中時，離子運動的速度取決于它們的運動活性。Blatny等（1995）運用CITP及傳導(dǎo)性檢測的方法觀察植酸水解產(chǎn)物與時間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)采用兩種不同的緩沖系時，等速電泳（ITP）是一種簡便、快速的定量檢測IP-IP6及正磷酸鹽的方法。但CITP的缺點是靈敏度比較低，需改進濃縮技術(shù)及更靈敏的檢測技術(shù)以使其成為更實用的檢測植酸的方法。

4.5 高效離子色譜法 高效離子色譜法（HPIC）利用了電性相反的顆粒相互吸引的原理。使用該法測定菜籽餅（粕）中的植酸時可先采用微波消解技術(shù)將植酸轉(zhuǎn)化為磷酸鹽，然后用HPIC測定磷酸鹽，從而獲得樣品中植酸含量。該方法靈敏度高，能夠同時測定多種離子，還可同時結(jié)合梯度洗脫分離肌醇磷酸酯及其不同的異構(gòu)體（Phillippy等，2004）。該法操作快速、簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確。

此外植酸的檢測方法還有HPLC、核磁共振法（NMR）。采用HPLC法可以將樣品中IP6及其部分降解產(chǎn)物（IP3-IP5）分離并定量測量。此法使用儀器昂貴，一般是科研上用來對植酸產(chǎn)品進行準(zhǔn)確測定時所用的方法。NMR有一定的準(zhǔn)確性及特異性，但設(shè)備昂貴，靈敏度較低，不太適合植酸的測定。

5 單寧的測定

一般菜籽餅 （粕）中單寧的含量為0.6%～3.0%。目前的單寧的檢測方法主要有氧化還原滴定法、比色法、原子吸收法、HPLC等。

常用測定單寧的氧化還原滴定法有高錳酸鉀法和鐵氰化鉀法。此兩種方法是根據(jù)單寧的還原性質(zhì)而制定的。高錳酸鉀法終點誤差較大，靈敏度不高。鐵氰化鉀法測定所需溫度較高，終點易受操作人員等因素的影響，且干擾物質(zhì)較多，重復(fù)性不太好。所以滴定法不適宜單寧的精確定量測定。

根據(jù)比色法定量測定單寧的方法比較多，如檸檬酸鐵氨法 、釩顯色法 、鎢酸鈉比色法等。其中檸檬酸鐵氨法是國標(biāo)法，其原理是在氨存在的條件下單寧能夠與檸檬酸鐵銨形成一種棕色絡(luò)合物，用分光光度計在525 nm波長處測定其吸光度值，然后與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。有研究表明，此三種方法測定結(jié)果都比較穩(wěn)定，精密度高。但相比之下，國標(biāo)法更為快速簡便，回收率高，適合大批量樣品的分析（郜睿和張崇玉，2008）。

原子吸收法和HPLC靈敏度高，且不受顏色及共存物質(zhì)的干擾，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。不過這兩種方法所需儀器設(shè)備復(fù)雜，普及性不強，只適合實驗室精確分析。

6 結(jié)語

目前，菜籽餅（粕）中抗?fàn)I養(yǎng)因子的檢測方法眾多，每種抗?fàn)I養(yǎng)因子都據(jù)其固有的性質(zhì)而形成一些特殊的檢測方法，早期建立的比較傳統(tǒng)的檢測方法可能存在著局限性，比如操作繁瑣、重復(fù)性差、靈敏度低、誤差較大等。而目前通過一些新的方法如高效氣（液）相色譜法、離子色譜法、原子吸收法、紫外分光光度法以及將這些方法與紅外光譜、質(zhì)譜法聯(lián)用能夠準(zhǔn)確定量大部分的抗?fàn)I養(yǎng)因子，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，精確度高。不過這些方法的最大缺點就是使用儀器昂貴，成本高。

綜上所述，每種方法都有它的優(yōu)點和不足之處，根據(jù)不同的目的和要求，選擇合適的分析手段來測定菜籽餅（粕）中抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量對充分合理地利用菜籽餅（粕）蛋白資源有著重要意義。隨著科技的進步，在上述傳統(tǒng)的理化檢測方法、氣質(zhì)聯(lián)用以及原子紅外吸收等檢測方法的基礎(chǔ)上，菜籽餅（粕）中各種抗?fàn)I養(yǎng)因子的檢測技術(shù)將不斷改進，必將出現(xiàn)更簡便快速、更準(zhǔn)確的分析方法。

[1]安風(fēng)云，李 鈞，唐國永，等.葡萄糖試紙法初測油菜籽硫甙的研究[J].青海農(nóng)林科技，2006，2：8 ～ 9.

[2]鮑英慧.比色法測定菜籽餅粕中異硫氰酸酯[J].中國飼料，1999，24：13～14.

[3]陳蛋，陳斌，陸道禮，等.近紅外光譜分析法測定菜籽油中芥酸的含量[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報，2007，23（1）：234 ～ 237.

[4]傅啟高，李慧荃.三氯化鐵比色法測定植酸含量的研究[J].營養(yǎng)學(xué)報，1997，19（2）：216 ～ 220.

[5]甘莉，金良，鄒國嶺.氯化把法測定硫甙含量的最佳測定條件探討[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1999，18（6）：592 ～ 595.

[6]郜睿，張崇玉.高梁單寧檢測方法比較分析[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（6）：38 ～ 39.

[7]姜子濤，吳月英，羅輝，等.哌嗪非水滴定法快速測定芥末油中的異硫氰酸酯[J].食品科學(xué)，1995，16（6）：59 ～ 62.

[8]李麗，吳波，李慶龍.磷鉬黃比色法測定小麥麩中的植酸[J].糧食與飼料工業(yè)，2008，4：11 ～ 12.

[9]潘雷，李愛科，程茂基，等.異硫氰酸酯（ITC）的硫脲紫外法和銀量法測定對比研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，17：7823 ～ 7825.

[10]彭愛娟，唐桂芬，蘭尊海.反相離子對色譜法測定油菜籽（餅）中的硫苷[J].色譜，2000，18（1）：85 ～ 87.

[11]佘珠花.紫外法測菜籽餅粕中硫甙操作探討 [J].武漢工業(yè)學(xué)院學(xué)報，2003，22（3）：7 ～ 8.

[12]王建清，陳曼玲.蒽酮比色法快速測定油菜籽中硫甙 [J].中國油料，1994，16（4）：50 ～ 52.

[13]魏曉飛，王在貴，楊世高.影響氯化鈀法測定油菜籽中硫甙含量的因素研究[J].飼料工業(yè)，2009，30（17）：42 ～ 44.

[14]印天壽，鄭慧英.油菜籽硫葡糖甙速測技術(shù)的研究—3，5-二硝基水楊酸分光光度法[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1984，2：49 ～ 52.

[15]余英，安廷士，羅朝忠.菜籽粕中硫甙檢測方法的改進[J].中國油料，1994，16（2）：52 ～ 53.

[16]張菊珍，徐世前，史美仁.硫脲法測定菜籽餅粕中的硫甙[J].南京化工學(xué)院學(xué)報，1992，14（2）：63 ～ 69.

[17]周小潔，郭亮，車向榮，等.亞麻籽及其餅粕中氰化物檢測方法的比較[J].中國畜牧雜志，2008，44（7）：49 ～ 51.

[18]Blatny P，Kvasnicka F，Kenndler E.Determination of phytic acid in cereal grains，legumes，and feeds by capillary isotachophoresis[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，1995，43（1）：129 ～ 133.

[19]Leming R，Lember A，Kukk T.The content of individual glucosinolates in rapeseed and rapeseed cake produced in Estonia[J].Agraarteadus，2004，15：21～27.

[20]Mcgregor D I，Mullin W J，F(xiàn)enwick G R，et al.Analytical Methodology for Determining Glucosinolate Composition and Content[J].Journal of The Association of Official Analytical Chemists，1983，66（4）：825 ～ 849.

[21]Phillippy B Q，Lin M，Rasco B，et al.Analysis of phytate in raw and cooked potatoes[J].Journal of Food Composition and Analysis，2004，17（2）：217～226.

[22]Raghavan B，Shankara M L，Nagalaks S，et al.Volumetric determination of P-hydroxybenzyl sothiocyanate in Sinalbin and in White Mustard Seed[J].Journal of the Science of Food and Agriculture，1971，22（10）：591 ～ 593.

[23]Wetter L R，Youngs C G.A thiourea-UV assay for total glucosinolate content in rapeseed meals[J].Journal of the American Oil Chemists’ Society，1976，53（4）：162 ～ 164.

[24]YeL X，Dinkova-KostavaA T，WadeK L，etal.Quantitative determination of dithiocarbamates in human plasma，seFum，erythrocytes and urine；pharmacokinetics of broccoli sprout isothiocyanates in humans[J].Clinica Chimica Acta，2002，316（2）：43 ～ 53.