胃癌中CDK1和CDK2的表達(dá)及預(yù)后意義

顏 偉 張永紅 何樂亞 魏 欣 陶德定 胡俊波 龔建平

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院胃腸外科,腫瘤研究所,武漢 430030)

胃癌是我國(guó)最常見的消化道腫瘤,占惡性腫瘤死亡率的第一位。全國(guó)平均年死亡率為16/10萬(wàn),高發(fā)區(qū)達(dá)60/10萬(wàn)。它是因癌癥而死亡的第二大原因。由此可見,胃癌已嚴(yán)重影響到我國(guó)人民的生命健康,對(duì)胃癌的預(yù)后研究已成為目前醫(yī)學(xué)工作之重點(diǎn)。

近年來(lái),越來(lái)越多的科學(xué)家認(rèn)為腫瘤是一類細(xì)胞周期異常的疾病,也就是說(shuō)細(xì)胞周期蛋白cyclins,細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶cyclin-dependent kinases(CDKs),以及細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑cyclin-dependent kinase inhibitors(CKIs)等異常改變導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[1]。越來(lái)越多人注意到Cyclins,CDKs和 CKIs是腫瘤潛在的預(yù)后因子[2,3,4]。研究旨在探討CDK1和CDK2與胃癌預(yù)后之間的關(guān)系。

材料和方法

1材 料

收集武漢同濟(jì)醫(yī)院2005年9月-2006年6月份胃癌病例48例。其中男性25例,女性23例。年齡在37-75歲之間,平均年齡為61歲。病理切片證實(shí)為胃癌,其中早期胃癌16例,進(jìn)展期胃癌32例。并對(duì)其進(jìn)行分期分級(jí),具體如下:高中分化者有38例,低分化者有10例;TNM分期:T1期13例,T2期16例,T3期10例,T4期9例。

2方 法

免疫組織化學(xué)法:將一部分胃癌,癌旁正常組織標(biāo)本 (盡量遠(yuǎn)離癌組織)制成石蠟切片。采用免疫組化S-P法。兔抗人CDK1和CDK2抗體購(gòu)自Cellsignaling公司。S-P通用型試劑盒購(gòu)自武漢博士德公司。全部實(shí)驗(yàn)用已知的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照,用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。結(jié)果判定:PTEN標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核呈棕黃色顆粒著色。在100×鏡下,每個(gè)視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的個(gè)數(shù),共3個(gè)視野,計(jì)算CDK1、CDK2陽(yáng)性細(xì)胞平均百分比。對(duì)每例切片,采用半定量積分法判斷結(jié)果。未見陽(yáng)性細(xì)胞的為0分,1%-25%為1分,26%-50%為2分,51%-75%為3分,76%-100%為4分;陽(yáng)性強(qiáng)度黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。兩者積分相乘,0分為陰性(-),1-4分為弱陽(yáng)性 (+),5-8分為中度陽(yáng)性 (++),9-12分為強(qiáng)陽(yáng)性 (+++);陰性和弱陽(yáng)性規(guī)定為低表達(dá),中度陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性規(guī)定為高表達(dá)。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行資料構(gòu)成比的比較,均以 P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.CDK1、CDK2在癌旁正常胃組織和胃癌組織中的表達(dá)

CDK1、CDK2在癌旁正常胃組織表達(dá)很低或不表達(dá),在胃癌組織中的表達(dá)較高。CDK1和CDK2表達(dá)部位大都在細(xì)胞質(zhì)中,在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中同時(shí)表達(dá)的占少數(shù) (圖1)。

2.CDK 1、CDK 2的表達(dá)與臨床病理特征之間的聯(lián)系

圖1 CDK1和CDK2在胃癌 (T)和癌旁正常組織(N)中的表達(dá),S-P法,×100倍。Fig.1 The expressions of CDK1 and CDK2 in tumor(T)and normal tissul(N).S-P method×100

本組病例中 (如表1所示),有如下特點(diǎn):①CDK1和CDK2蛋白表達(dá)與患者年齡、性別等無(wú)相關(guān)性;②CDK1蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度正相關(guān);但CDK2蛋白表達(dá)似乎無(wú)相關(guān)性;③CDK1和CDK2蛋白表達(dá)與組織的分化程度、組織的病理學(xué)分期呈正相關(guān)性;④CDK1和CDK2蛋白同時(shí)表達(dá)仍然與患者年齡、性別無(wú)相關(guān)性,但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分化程度、病理學(xué)分期呈正相關(guān)性。

表1 CDK1、CDK2的表達(dá)與臨床病理特征之間的聯(lián)系T able 1 The relationship between expressions of CDK1 and CDK2 and clinical parameter in gastric cancer

討 論

細(xì)胞周期機(jī)制的核心是細(xì)胞周期蛋白激酶CDKs結(jié)合了細(xì)胞周期蛋白cyclins后被激活,然后驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期運(yùn)行;CDK1、CDK2是細(xì)胞周期運(yùn)行并通過 G1/S期和 G2/M期限制點(diǎn) (restriction point)的關(guān)鍵蛋白[5,6,7]。不論正常細(xì)胞還是腫瘤細(xì)胞都是通過細(xì)胞周期而增生的,只是腫瘤細(xì)胞周期發(fā)生了改變。因此CDK1和CDK2過表達(dá)均可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

CDK1和CDK2過表達(dá)與腫瘤惡化以及預(yù)后差密切相關(guān)[8]。在乳腺癌,肺癌等許多腫瘤研究中均發(fā)現(xiàn)存在CDK1和CDK2表達(dá)的異常,本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)在胃癌中CDK1和CDK2蛋白過表達(dá),其表達(dá)率與對(duì)照組正常胃組織相比有顯著差異 (P<0.05),這表明CDK1、CDK2在胃癌發(fā)生中起了一定作用。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)CDK1和CDK2的表達(dá)與胃癌低、中高分化腺癌相關(guān) (P<0.05),這表明CDK1和CDK2表達(dá)越高,胃癌惡性程度就越高,預(yù)后就越差,特別是兩個(gè)指標(biāo)均過表達(dá),則胃癌患者的預(yù)后更差。國(guó)外有學(xué)者提出CDK-based Risk概念:CDK-based Risk低是指CDK1活性低以及CDK2活性亦低,并且CDK2活性與CDK1活性比值也低;反之,CDK-based Risk高是指CDK1活性高以及CDK2活性高,并且CDK2活性與CDK1活性比值也高[9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦支持該結(jié)論。

總之,CDK1和CDK2及其比值可以反映胃癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。如果根據(jù)此指標(biāo)做出相應(yīng)的主動(dòng)預(yù)防或后續(xù)治療措施,則可以使患者生存率提高。

〔1〕Hanahan D,Weinberg RA.The hallmark of cancer.Cell,2000,100:57-70

〔2〕Colozza M,Azambuja E,Cardoso F,et al.Proliferative markers as prognostic and predictive tools in early breast cancer:where are we now?Ann oncol,2005,16:1723-1739

〔3〕Keyomarsi K,Tucker SL,Buchholz TA,et al.Cyclin E and survival in patients with breast cancer.N Engl J Med,2002,347:1566-1575

〔4〕Kuhling H,Alm P,Olsson H,et al.Expression of cyclins E,A,and B,and prognosis in lymph node-negative breast cancer.J Pathol,2003,199:424-431

〔5〕Murray A,Hunt T.The cell cycle:an introduction.New York:Oxford University Press,1993

〔6〕Nurse P.Universal control mechanism regulating onset of M-phase.Nature,1990,344:503-508

〔7〕Nurse P.A long twentieth century of cell cycle and beyond.Cell,2000,100:71-78

〔8〕Colozza M,Azambuja E,Cardoso F,et al.Proliferative markers as prognostic and predictive tools in early breast cancer:where are we now?Ann oncol,2005,16:1723-1739

〔9〕Kim S,Nakayama S,Miyoshi Y,et al.Determination of the specific activity of CDK1 and CDK2 as a novel prognositic indicator for early breast cancer.Ann Oncology,2008,19:68-72