支擴(kuò)寧合劑提取工藝研究

[摘要] 目的 優(yōu)選支擴(kuò)寧合劑提取工藝。方法 以黃芩苷為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷含量，采用正交試驗(yàn)L9(34)優(yōu)選支擴(kuò)寧合劑提取工藝。結(jié)果 黃芩苷的檢測(cè)濃度在15.81-252.96μg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(r =0.999 96);優(yōu)選的提取工藝為:每次加8倍量水，煎煮3次，每次1小時(shí)。結(jié)論 建立的含量測(cè)定方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好;優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、合理、可行。

[關(guān)鍵詞] 支擴(kuò)寧合劑;黃芩苷;高效液相色譜法;正交試驗(yàn);提取工藝

[中圖分類號(hào)] R914 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1004-8650(2009)08-115-03

“支擴(kuò)寧合劑”系江蘇省中醫(yī)院研制的中藥復(fù)方制劑，由黃芩、桑白皮、全瓜蔞、枳殼、南沙參、丹參、黛蛤散等13味藥物組成，具有清熱化痰、涼血行瘀、養(yǎng)陰潤(rùn)肺之功效，臨床用于治療支氣管擴(kuò)張癥，療效確切。方中黃芩清熱泄肺，桑白皮清肺化痰，共為君藥。黃芩為唇形科植物黃芩(Scutellaria baicalensis georgi)的干燥根[1]，主要有效成分為黃芩苷(baicalin)等黃酮類成分[2]，黃芩苷溶于熱水，其提取液中含量可反映水溶性成分煎出效果，故選擇黃芩苷為指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定黃芩苷含量，采用正交試驗(yàn)法優(yōu)選提取工藝。

1儀器與試藥

1.1儀器

HK6200型超聲儀(上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);BP211D型十萬(wàn)分之一分析天平(瑞士Sartorius公司);1100Series高效液相色譜儀(四元泵，G1314A VWD型檢測(cè)器，Ver.A.10.02色譜工作站，美國(guó)Agilent公司);Rheodyne 7725i 10μL進(jìn)樣器。

1.2試藥

黃芩苷對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào):0715-9909、715-9708)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;試劑甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

實(shí)驗(yàn)藥材均購(gòu)自江蘇省藥材公司，經(jīng)專家鑒定均符合藥典相關(guān)項(xiàng)下規(guī)定。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[3，4]

影響提取工藝的主要因素有加水量、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)，實(shí)驗(yàn)采用L9(34)正交表，每因素選取3個(gè)水平設(shè)計(jì)因素水平表(見(jiàn)表1)。

2.2黃芩苷含量測(cè)定方法

2.2.1 色譜條件[1，4]:色譜柱為Discovery C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸(40∶60∶0.2)，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，流速為1.0 ml/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μl。

2.2.2對(duì)照品溶液的制備:精密稱取在60℃減壓干燥4 h的黃芩苷對(duì)照品適量，加70%甲醇制成每1ml含60μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備:按日處方量稱取十三味藥材175g(含黃芩10g)，加水煎煮二次，每次加10倍量水，煎煮1 h，濾過(guò)，合并煎液，濃縮并定容至250ml。精密量取供試品1 ml，置于50 ml量瓶中，加70%乙醇45 ml，超聲提取15 min，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。同法制備缺黃芩陰性對(duì)照溶液。

2.2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn):精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和黃芩陰性對(duì)照溶液各10μl，按上述色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果，黃芩苷色譜峰的保留時(shí)間為19 min，供試品溶液色譜峰與雜質(zhì)峰的R=1.95>1.5，對(duì)稱因子0.90-1.10，陰性對(duì)照無(wú)干擾，理論塔板數(shù)按黃芩苷色譜峰計(jì)算不低于3000。色譜見(jiàn)圖1。

2.2.5線性關(guān)系考察:精密稱取黃芩苷對(duì)照品31.62 mg，置于100 ml量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含316.2μg的貯備液，搖勻。精密量取該貯備液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 ml于10 ml量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，得每1 ml含黃芩苷15.81、31.62、63.24、126.48、189.72、252.96μg的對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，黃芩苷檢測(cè)濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程為Y = 42.529 8X - 36.713 3(r= 0.999 9)。結(jié)果表明，黃芩苷檢測(cè)濃度在15.81-252.96μg/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液，照“2.2.1”色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，進(jìn)行日內(nèi)精密度試驗(yàn);取對(duì)照品溶液，在3日內(nèi)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，進(jìn)行日間精密度試驗(yàn)。結(jié)果，日內(nèi)精密度試驗(yàn)中，平均峰面積積分值為8 000.291 60，RSD = 0.31%(n=5);日間精密度試驗(yàn)中，平均峰面積積分值為2 662.638 88，RSD=0.35%(n=6)， 表明儀器精密度良好。

2.2.7重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一供試品6份，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“2.2.1”色譜條件，測(cè)定峰面積積分值并計(jì)算含量。結(jié)果，黃芩苷的平均含量為2.911 mg/ml，RSD=1.72%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h測(cè)定。結(jié)果，黃芩苷的平均峰面積積分值為2 448.340 23，RSD=1.40%(n=5)，表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3正交試驗(yàn)及結(jié)果

2.3.1黃芩藥材黃芩苷測(cè)定: 照水份測(cè)定法和高效液相色譜法[1]。結(jié)果黃芩藥材水份為9.8%<12.0%;按干燥品計(jì)算，藥材黃芩含黃芩苷(C21H18O11)10.8%>8.0%，符合藥典規(guī)定。

2.3.2 提取液中黃芩苷測(cè)定:按日處方量稱取十三味藥材175g(含黃芩10g)，共9份，按上述因素水平表試驗(yàn)，分別制備1-9號(hào)樣品溶液，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“2.2.1”色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算黃芩苷含量并按下式計(jì)算黃芩苷轉(zhuǎn)移率(%)。

轉(zhuǎn)移率(%)=提取液中黃芩苷總量/藥材中黃芩苷總量×100%

2.3.3正交試驗(yàn)結(jié)果分析:正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

根據(jù)表2極差R分析:影響因素顯著性依次為C>A>B;根據(jù)表3方差分析:因素C有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且C3>C2>C1，故因素C(煎煮次數(shù))選C3，因素A、B無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，從節(jié)省能耗和減少工時(shí)考慮，A(加水量)選A1，B(煎煮時(shí)間)選B1，優(yōu)選提取工藝為A1B1C3，即每次加8倍量水，煎煮3次，每次1 h。

2.3.4驗(yàn)證試驗(yàn):按優(yōu)選工藝A1B1C3進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，考察指標(biāo)同上(結(jié)果見(jiàn)表4)，經(jīng)方差分析，兩組數(shù)據(jù)F = 8.75<19.00(F0.05 (2，2)= 19.00)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果表明:優(yōu)選的工藝條件合理，穩(wěn)定。

4討論

黃芩苷的含量測(cè)定，參照藥典[1]黃芩的含量測(cè)定方法，對(duì)液體樣品制備供試品，多用50%甲醇或95%乙醇，本法用70%乙醇作為提取溶媒，經(jīng)對(duì)超聲提取時(shí)間進(jìn)行考察，結(jié)果超聲10、15、20 min后黃芩苷峰面積積分值基本相同，故確定超聲提取時(shí)間為15 min。

參考文獻(xiàn):

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].2005年版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:211-212，附錄IXH.

[2] 王浴生，鄧文龍，薛春生.中藥藥理與應(yīng)用[M].第二版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:972.

[3] 謝秀瓊.中藥新制劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用[M].第二版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:136.

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(收稿日期2009-05-03)