ABO血型鑒定檢測中常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)和錯(cuò)誤原因分析

[摘要] 臨床工作中血型鑒定工作非常重要，應(yīng)盡力把錯(cuò)誤的發(fā)生率降到最低。血型鑒定中各種實(shí)驗(yàn)檢測技術(shù)各有利弊和適用范圍，本文探討常用的血型鑒定試驗(yàn)技術(shù)，并探討在血型報(bào)告中常出現(xiàn)錯(cuò)誤的原因及其避免方式。

[關(guān)鍵詞] 血型鑒定;實(shí)驗(yàn)技術(shù);錯(cuò)誤原因

[中圖分類號(hào)] R457.1+1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1004-8650(2009)08-065-02

ABO血型抗原是由ABO血型抗原基因編碼的特異性糖基轉(zhuǎn)移酶催化合成的紅細(xì)胞膜表面的糖蛋白和糖脂。ABO抗原決定簇共有5種類型，由單糖經(jīng)轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移到特定核心多糖鏈的末端生成，分別決定血型抗原基礎(chǔ)物質(zhì)、H抗原、A抗原、A1抗原以及B抗原的抗原表型。根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型紅細(xì)胞膜上含有A抗原，B型紅細(xì)胞膜上含有B抗原，AB型紅細(xì)胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對(duì)A抗原和B抗原的特異性抗體?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知的抗A、抗B試劑與受檢者的紅細(xì)胞混合時(shí)，與抗A試劑發(fā)生凝集者即為A型，與抗B分型試劑發(fā)生凝集者即為B型，與抗A、抗B試劑均發(fā)生凝集者即為AB型，與抗A、抗B試劑均不凝集者即為O型。所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗A或/和抗B[1]。由于血型的鑒定中存在著不同程度的誤判，因此，探討ABO血型分型鑒定中的錯(cuò)誤原因也是非常重要的。將應(yīng)用較多的集中實(shí)驗(yàn)檢測技術(shù)和常見分型錯(cuò)誤原因匯報(bào)如下。

1常用試驗(yàn)檢測技術(shù)

1.1血凝試驗(yàn)

抗體和紅細(xì)胞在液體介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。根據(jù)操作方法的不同，主要可以分為玻片法、試管法和全自動(dòng)微板法。

1.1.1玻片法:目前臨床常用的血型鑒定的初篩試驗(yàn)方法是玻片法，該法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)抗體血清與待測紅細(xì)胞在干燥玻片上是否發(fā)生凝集反應(yīng)來確定待測紅細(xì)胞血型，該法操作簡單，省時(shí)省力。

1.1.2試管法:實(shí)驗(yàn)室常用的交叉配血試驗(yàn)是應(yīng)用試管法，在更大的空間以更敏感的方式來進(jìn)行血型的分型。

1.1.3全自動(dòng)微板法:是臨床常用的血型分類檢測方法，通過標(biāo)準(zhǔn)化加樣、孵育、離心、懸浮、靜止以及反應(yīng)前后吸光度值增加數(shù)值的計(jì)算，從而達(dá)到對(duì)血型進(jìn)行定型與反定型的目的，使獻(xiàn)血者常規(guī)ABO血型鑒定實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化、批量化、自動(dòng)化，節(jié)約大量昂貴抗血清、縮短檢測時(shí)間、操作程序簡單，消除了許多人為因素造成的血型誤定。據(jù)報(bào)道，應(yīng)用ABO血型自動(dòng)化檢測方法進(jìn)行正反定型試驗(yàn)，一次判讀正確率在99.8%以上，且能提高檢測靈敏度，使弱凝集標(biāo)本更易顯現(xiàn)。但該法對(duì)B3亞型伴抗B的判斷有待進(jìn)一步完善。

1.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的原理、相應(yīng)的酶標(biāo)單抗技術(shù)以及酶與底物反應(yīng)顯色的原理達(dá)到鑒定血型的目的。比經(jīng)典的紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)鑒定血型的方法敏感性要高。對(duì)樣本要求小，即使樣本在高溫下保存40℃溫度下保存8個(gè)月，樣本中仍有超過60%的P84血型物質(zhì)生物學(xué)活性存在，仍然可以用該法進(jìn)行血型鑒定。

1.3流式細(xì)胞技術(shù)

通過用熒光素標(biāo)記人源抗A、抗B以及相應(yīng)的亞型抗體，將待測血樣的紅細(xì)胞稀釋分裝，入加熒光素標(biāo)記抗體，抗原與相應(yīng)熒光標(biāo)記抗體結(jié)合后用流式細(xì)胞儀檢測與熒光標(biāo)記抗體結(jié)合的紅細(xì)胞，通過軟件分析，得出待測細(xì)胞中與抗A、抗B結(jié)合的細(xì)胞的百分率，從而得到待測樣本的紅細(xì)胞血型。流式細(xì)胞術(shù)能快速、準(zhǔn)確地檢測大量單個(gè)細(xì)胞或生物顆粒，且靈敏度高、重復(fù)性好等。適合應(yīng)用于ABO血型亞型的快速鑒定。解決了急診交叉配血不合時(shí)，難以做到及時(shí)、快速、準(zhǔn)確地鑒定供、受者的血型亞型的問題[2]。

1.4微柱凝膠試驗(yàn)

用凝膠技術(shù)進(jìn)行抗球蛋白試驗(yàn)可提高試驗(yàn)的靈敏度及特異性，目前微柱凝膠試驗(yàn)在國外輸血領(lǐng)域已逐漸作為常規(guī)應(yīng)用于ABO及Rh血型定型，未知血型抗體篩查以及直接抗球蛋白試驗(yàn)。該法與經(jīng)典鹽水法相比， 所需樣本量少，操作簡單，結(jié)果明確可靠、易判讀，靈敏度高，重復(fù)性好，對(duì)需大量或反復(fù)輸血的患者配血既安全又快速。

目前ABO血型的實(shí)驗(yàn)室檢測方法較多，既有操作較為簡便易行的血凝試驗(yàn)，也有結(jié)果較為可靠的微柱凝膠試驗(yàn)和基因型檢測。這也給我們提出了新的挑戰(zhàn)，如何優(yōu)化出更準(zhǔn)確更經(jīng)濟(jì)更省時(shí)省力的檢測方法是目前研究的新趨勢(shì)。更簡單更方便的試紙條也許是下一步要追求的新的優(yōu)化方法[3]。

2常見血型報(bào)告錯(cuò)誤的原因

2.1血型測定的錯(cuò)誤

血型檢測時(shí)因患者紅細(xì)胞懸液過濃或過淡，抗原和抗體比例不當(dāng)， 離心速度及時(shí)間不適合， 不做反定型檢測，都可以造成定型報(bào)告錯(cuò)誤。為防止血型鑒定的錯(cuò)誤，在進(jìn)行血型鑒定的過程中，一定要嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，正、反定型同時(shí)進(jìn)行，使用質(zhì)量合格的試劑及細(xì)心觀察結(jié)果，就可避免很多不必要的錯(cuò)誤。

2.2檢驗(yàn)者工作粗心的錯(cuò)誤

由于工作精力不集中造成一些人為錯(cuò)誤，如試管上未編號(hào)，離心后拿錯(cuò)試管， 不按規(guī)定操作，填寫血型結(jié)果時(shí)筆誤，都會(huì)造成血型報(bào)告結(jié)果的錯(cuò)誤。在工作中應(yīng)認(rèn)真細(xì)致，精力集中，嚴(yán)格把住血型定型這一關(guān)。

2.3醫(yī)護(hù)人員的錯(cuò)誤

臨床醫(yī)生在填寫輸血申請(qǐng)時(shí)，沒有做血型檢測，或者填錯(cuò)申請(qǐng)單或者輸血檢驗(yàn)報(bào)告單夾錯(cuò)。護(hù)士抽取血標(biāo)本時(shí)，弄錯(cuò)輸血患者的姓名和床號(hào)，都會(huì)造成血型報(bào)告的錯(cuò)誤。應(yīng)注意此現(xiàn)象并加以避免。

2.4血站發(fā)血的錯(cuò)誤

由于血站發(fā)送的血液袋上的血型與血袋內(nèi)的血液的血型不符而造成獻(xiàn)血者的血型錯(cuò)誤?？赡苁怯捎谘救藛T的工作粗心失誤錯(cuò)拿了血型。在工作中應(yīng)注意力集中，尤其對(duì)于人命關(guān)天的輸血事件更應(yīng)該嚴(yán)格把關(guān)，設(shè)立監(jiān)督，做到萬無一失。

2.5疾病導(dǎo)致血型結(jié)果的錯(cuò)誤

某些疾病(如白血病或惡性腫瘤)可使受檢者血液中紅細(xì)胞上的抗原減弱或含有較高的冷凝集素，而產(chǎn)生自凝現(xiàn)象。高球蛋白血癥的標(biāo)本常見紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，而干擾血型判斷，甚至造成血型鑒定的錯(cuò)誤。如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈緡錢狀排列，加等滲鹽水1滴混勻，往往可使緡錢現(xiàn)象消失[4]。

參考文獻(xiàn):

[1] 蘭炯采，孟慶寶，張印則，等.ABO血型基因分型及應(yīng)用[J].中國免疫學(xué)雜志，2002，18(6):430.

[2] 徐樹良，戴宇東，田愛民，等.流式細(xì)胞術(shù)快速鑒定ABO血型亞型[J].中國輸血雜志，2003，16(3):165.

[3] 胡繼征，陸典瑞，李啟輝.全自動(dòng)微板法檢測28379例獻(xiàn)血者ABO血型的統(tǒng)計(jì)分析[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2003，9(9):75.

[4] 張萍，陳荇.常見ABO血型鑒定錯(cuò)誤原因分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床雜志，2009，1(1):75-76.

(收稿日期2009-05-13)