ＨＰＬＣ法測定黃藤素栓中鹽酸巴馬汀的含量

龍朝津

摘要：目的：建立黃藤素栓中鹽酸巴馬汀的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法（HPLC），以C18柱為色譜柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（32:68）為流動相；柱溫40℃；檢測波長為345nm測定。結(jié)果：鹽酸巴馬汀在24.74μg/ml～98.96μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9999），平均回收率為99.50%，RSD%為0.64%（n=9）。結(jié)論：HPLC法快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，能用于黃藤素栓中鹽酸巴馬汀的含量測定。

關(guān)鍵詞：鹽酸巴馬汀 黃藤素栓 HPLC法 含量測定

1 儀器與試藥

儀器：高效液相色譜儀（SPD-10AVP型可見—紫外檢測器；SPD-10ATVP溶劑輸送泵），日本島津制造所。紫外可見分光光度計（UV-2550），日本島津制造所。試藥：鹽酸巴馬汀對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）；黃藤素栓、黃藤素陰性栓（公司制備）；乙腈為色譜純；水為去離子水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以C18柱（迪馬；250mm×4.6mm；5μm）為色譜柱；以乙腈-0.4%磷酸溶液（32:68）為流動相；柱溫40℃；檢測波長為345nm；流速1.0ml/min。理論塔板數(shù)按鹽酸巴馬汀峰計算不低于5000。

2.2 測定法 取樣品切碎，取1.5g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水適量，置溫水浴中使溶解，放置至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10μl注入色譜儀，記錄色譜圖；取鹽酸巴馬汀對照品12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加水溶解，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算，即得。

2.3 檢測波長的選擇 取鹽酸巴馬汀對照品適量，用水溶解并稀釋制成1ml中約含10μg的溶液，在190～600nm范圍內(nèi)進行紫外掃描。結(jié)果在225nm、273nm、342nm與421nm的波長處有最大吸收。從溶劑背景吸收、方法靈敏度和系統(tǒng)穩(wěn)定性綜合考慮，確定吸收值較大且無溶劑背景干擾的345nm作為檢測波長。

2.4 專屬性試驗 照2.2項下方法制備供試品溶液和對照品溶液。取黃藤素陰性栓切碎，稱取1.5g，照供試品溶液制備方法制備，作為陰性溶液。在2.1項下色譜條件測定，結(jié)果鹽酸巴馬汀對照品主峰保留時間和供試品主峰保留時間基本一致，陰性溶液在主峰處沒有吸收峰，不干擾鹽酸巴馬汀含量測定，專屬性良好。

2.5 線性試驗 稱取鹽酸巴馬汀對照品12.37mg，置25ml量瓶中，加水溶解，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取該溶液0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.5ml和2.0ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取該系列溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以濃度C（μg/ml）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，作回歸方程：A=19810.863C+20234.757，r=0.9999（n=5）。表明鹽酸巴馬汀對照品溶液在24.74μg/ml～98.96μg/ml的濃度范圍

內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 回收率試驗 取黃藤素（鹽酸巴馬汀含量按98.35%計）40mg、50mg、60mg，精密稱定，按100%處方比例稱取輔料，置100ml量瓶中，加水適量，置溫水浴中使溶解，放置至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過。每一濃度平行制備三份，編號，作為供試品溶液。取2.5項下對照品儲備液，精密量取該溶液1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為對照品溶液。精密量取各溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。測定結(jié)果見表1。結(jié)果表明黃藤素回收率的平均值為99.50%，RSD%為0.64%，本法測定含量的回收率良好。

2.7 重復(fù)性試驗 取同批號黃藤素栓，照2.2項下方法平行制備六份供試品溶液，測定含量。結(jié)果含量測定平均值為99.67%，RSD%為0.68%，表明本法測定含量的重復(fù)性良好。

2.8 中間精密度試驗 由不同的實驗員、在不同時間、不同的液相色譜儀上測定同一批號黃藤素栓含量。結(jié)果樣品含量測定平均值為99.00%，RSD%為1.14%，表明本法測定含量的中間精密度良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗 照2.2項下方法制備供試品溶液，分別于0小時、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時測定。結(jié)果供試品溶液在8小時內(nèi)峰面積的RSD%為0.58%，供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.10 樣品含量測定 取3個批號樣品照2.2項下方法測定含量。結(jié)果見表2。

3 討論

黃藤素栓為衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-346(X-289)-94所收載的品種，對真菌有抑制作用，尤其是對白色念珠菌、石膏樣毛菌、裴氏著色菌作用較強。用于念珠菌性外陰陰道炎。原標(biāo)準(zhǔn)中，黃藤素栓的含量測定采用重量法，此法繁瑣、費時（需靜置過夜），不便于生產(chǎn)中半成品及成品質(zhì)量控制。為提高工作效率，方便工藝研究與生產(chǎn)，我們建立了高效液相色譜法測定黃藤素栓中鹽酸巴馬汀的含量。

參考文獻：

[1]中華人民共和國藥典2005年版（一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社.2005：215.