ＨＰＬＣ法測(cè)定生脈注射液中人參皂苷Ｒｇ_１和人參皂苷Ｒｅ含量的不確定度分析

【摘要】本文通過(guò)建立數(shù)學(xué)模型和對(duì)不確定度的來(lái)源進(jìn)行分析，對(duì)HPLC法測(cè)定生脈注射液中人參皂苷Rg₁和人參皂苷Re含量測(cè)定結(jié)果的不確定度分步評(píng)定，再合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度，最后用擴(kuò)展不確定度（置信概率為95％）來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不確定度進(jìn)行表述。

【關(guān)鍵詞】不確定度的合成;標(biāo)準(zhǔn)不確定度;擴(kuò)展不確定度

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-1074(2009)03-0005-02

1測(cè)量方法概述

1.1測(cè)量對(duì)象HPLC法測(cè)定生脈注射液中人參皂苷Rg₁和人參皂苷Re含量的不確定度分析。

1.2應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBZ11212004。

1.3實(shí)驗(yàn)方法精密量取供試品10ml，濃縮至近干，用流動(dòng)相稀釋至2ml。取五氧化二磷干燥至恒重的人參皂苷Rg₁和人參皂苷Re，人參皂苷Rg₁約10mg，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并定容至15ml；人參皂苷Re約10mg，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相溶解并定容至20ml；分別量取上述兩種溶液各10ml，定容至20ml。分別進(jìn)樣20μ1，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算。

1.4主要儀器和試劑Waters高效液相色譜儀（HPLC060302D）；電子天平（Sortorius BS21S，DZTP 17）：精度0.01mg；10ml量瓶（A級(jí)）、15ml量瓶（A級(jí)）、20ml量瓶（A級(jí)）；10ml移液管（A級(jí)）。2ml量瓶（A級(jí)）。對(duì)照品由中檢所提供:人參皂苷Rg₁（批號(hào)110703－200424，含量測(cè)定用），人參皂苷Re（批號(hào)110754－200320，含量測(cè)定用）水為去離子水，其他試劑均為分析純。

1.5環(huán)境條件室內(nèi)溫度：20℃±3℃，每小時(shí)波動(dòng)≤2℃；室內(nèi)相對(duì)濕度：42％±5％；供電電源：220±20V，50Hz；因此，由環(huán)境變化引起的不確定度可以忽略不計(jì)。

1.6引用文件及參考文獻(xiàn)①中國(guó)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南.北京：中國(guó)計(jì)量出版社；②國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局.中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程、常用玻璃量器.中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社；③國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.測(cè)量不確定度評(píng)定與表示.北京:中國(guó)計(jì)量出版社。

2不確定度評(píng)估

2.1數(shù)學(xué)模型

式中X:注射液中的人參皂苷Rg₁或人參皂苷Re含量

As:樣品中人參皂苷Rg₁或人參皂苷Re色譜峰的峰面積

Vs:供試品取樣量(ml)

Vs1:樣品定容體積(ml)f-:高效液相色譜法校正因子，f-＝1n∑ni=1CAi

其中C＝mVR1×VR2VR3

m:對(duì)照品的稱(chēng)樣量 （mg）

VR1: 對(duì)照品初次定容體積（ml）

VR2:稀釋時(shí)移液管取樣體積（ml）

VR3:對(duì)照品最后定容體積（ml）

Ai:對(duì)照品液中人參皂苷Rg₁或人參皂苷Re色譜峰的峰面積

2.2不確定度的來(lái)源分析①測(cè)量的重復(fù)性（對(duì)照品包含在校正因子里，可用變異系數(shù)表示，供試品部分包含在平行樣品的計(jì)算結(jié)果中，同樣可用變異系數(shù)表示）；②取樣；體積（稀釋轉(zhuǎn)移和定容引入）。

2.3各分量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度

2.3.1校正因子f-的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(f-)的評(píng)定輸入量f-的標(biāo)準(zhǔn)不確定度來(lái)源于稱(chēng)樣誤差，稀釋定容體積的誤差，色譜峰測(cè)量的不確定性等，這些誤差引起的不確定度分述如下：

①對(duì)照品（人參皂苷Rg₁或人參皂苷Re）濃度的不確定度：見(jiàn)表1和表2。質(zhì)量部分的不確定度由稱(chēng)樣引入，U(m)由天平引入，天平的精度U=0.01mg，取包含因子k＝3（置信度99％），對(duì)照品稱(chēng)量約為10mg，稱(chēng)樣的相對(duì)不確定度分別是：U(m)＝0.01/(10k)= 3.33×10-4；

對(duì)照品液由對(duì)照品稀釋而成，移液管和量瓶引入的不確定度應(yīng)計(jì)算在內(nèi)，根據(jù)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程規(guī)定，A級(jí)15ml的量瓶允許誤差±0.02ml，A級(jí)20ml的量瓶允許誤差±0.02ml，A級(jí)10 ml移液管允許誤差±0.02ml，按矩形分布，取包含因子k＝3，對(duì)照品稀釋定容的相對(duì)不確定度：人參皂苷Rg₁：U(VR1)

=(0.0215×3)2+(0.0210×3)2+(0.0220×3)2＝1.50×10－3

人參皂苷Re：U(VR2)

＝ (0.0220×3)2+(0.0210×3)2+(0.0220×3)2＝1.41×10－3。

對(duì)照品（人參皂苷Rg₁或人參皂苷Re）濃度的相對(duì)不確定度:

u(C)=U2(m)+U2(VR1)(或U2(VR2))

人參皂苷Rg₁：u1(C)

＝(3.33×10-4)2+(1.50×10-3)2＝1.54×10－3

人參皂苷Re：u1(C)

＝(3.33×10-4)2+(1.41×10-3)2＝1.45×10－3

②對(duì)照品色譜峰不確定度確定u(Ai):u(Ai)的不確定度主要由重復(fù)進(jìn)樣引起的，由儀器給出進(jìn)樣峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差是隨機(jī)測(cè)量，屬A類(lèi)不確定度（在這里可以用校正因子的變異系數(shù)表示）。

2.3.2供試品含量測(cè)定的不確定度評(píng)定①供試品濃度的不確定度u(C1):u(C1)由供試品取樣和稀釋定容引起。其中取樣是用10ml移液管（A級(jí)）（允許誤差±0.02ml），定容在2ml量瓶（A級(jí)）（允許誤差±0.015ml），按矩形分布，取包含因子k＝ 3， u(C1)＝(0.0210×3)2+(0.0152×3)2＝0.00448

②供試品測(cè)定的結(jié)果的不確定度u(A):含量測(cè)定一般采取平行測(cè)試兩份樣品，每份樣品進(jìn)樣2次，所得峰面積分別為：人參皂苷Rg₁3432752、3482578、3491122、3425108；人參皂苷Re2609003、2613329、2492405、2455262?？刹捎盟膫€(gè)峰面積的變異系數(shù)來(lái)表示u(A)，人參皂苷Rg₁u1(A)＝0.00976；人參皂苷Reu2(A)＝0.0318

含量測(cè)定計(jì)算的結(jié)果:每ml含人參皂苷Rg₁：0.12mg；人參皂苷Re：0.10mg

2.3.3合成不確定度①測(cè)定的合成相對(duì)不確定度UCR(X)=u2(f-)+u2(C1)+U人參皂苷Rg₁ UCR(X) 1=(0.00929)2+(0.00448)2+(0.00976)2=0.0142人參皂苷Re UCR(X) 2=(0.0154)2+(0.00448)2+(0.0318)2=0.0356

②合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度:人參皂苷Rg₁ ：UC(X)1=0.12×0.0142＝0.0017mg;人參皂苷Re：UC(X)1=0.10×0.0356＝0.00356mg

2.3.4擴(kuò)展不確定度實(shí)驗(yàn)結(jié)果一般用擴(kuò)展不確定度表示。取包含因子k＝2（置信概率約95％），含量測(cè)定擴(kuò)展不確定度為：人參皂苷Rg₁ Ur(X)1＝2×0.0017＝0.0034mg，測(cè)定的結(jié)果可表示為每ml含人參皂苷Rg₁ 0.12mg±0.0034mg；人參皂苷Re含量測(cè)定擴(kuò)展不確定度為：Ur(X)2＝2×0.00356＝0.0071mg，測(cè)定的結(jié)果可表示為每ml含人參皂苷Re0.10mg±0.0071mg。

(收稿日期：2009.03.16)