大鼠脂肪源性干細(xì)胞分離培養(yǎng)及在尿道周圍移植后的分布

【摘要】目的：探索大鼠脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)方法，并采用陰部神經(jīng)切斷術(shù)的方法制作壓力性尿失禁的大鼠模型，為其將來應(yīng)用于大鼠壓力性尿失禁治療的動物試驗研究提供實驗依據(jù)。方法：無菌技術(shù)下獲取SD大鼠雙側(cè)腹股溝區(qū)脂肪墊，消化離心，長期培養(yǎng)的方法獲取脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，鑒定其表面分子標(biāo)志。結(jié)果：原代培養(yǎng)顯示培養(yǎng)的脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞2d左右開始壁，10d-14d左右可達(dá)90%融合，基本上為梭形成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，免疫細(xì)胞化學(xué)示 CD29陽性，CD34陰性。陰部神經(jīng)切斷術(shù)后10天，除模型組和對照組一各有1只大鼠死亡外，均進(jìn)行尿流動力學(xué)檢測，三組手術(shù)前后ALLP分別為：對照組一為27.1±5.1和29.1±3.2cmH₂O，對照二為29.5±4.9和27.4±72.3，模型組為24.8±3.8和14.7±3.0。模型組手術(shù)后ALLP明顯降低，且組織學(xué)檢查亦證明模型組大鼠尿道周圍括約肌明顯萎縮。結(jié)論：大鼠脂肪組織中含有大量間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞來源充足、取材容易、體外易于培養(yǎng)、細(xì)胞增殖數(shù)量大，是細(xì)胞移植理想的種子細(xì)胞。雙側(cè)PNT后大鼠控尿能力明顯下降，可以作為SUI模型。本研究建立了獲取大鼠脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)及制作SUI大鼠模型的方法，為進(jìn)一步實驗研究提供了依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】間充質(zhì)干細(xì)胞；脂肪組織；細(xì)胞培養(yǎng)；SUI模型

【中圖分類號】R691【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)10-0125-01

壓力性尿失禁(SUI)為女性的常見病和多發(fā)病，其發(fā)病率約為1 S%-6O%，多發(fā)生于老年人，因受經(jīng)濟(jì)、宗教、教育程度等因素的影響，其實際發(fā)生率比統(tǒng)計發(fā)病率更高。SVl的癥狀嚴(yán)重與否都不自接危及生命，但它給患者的日常上作、生活及社交活動造成一定程度的影響，甚至?xí)?yán)重影響患者的生活質(zhì)量乃至家庭和睦。

1臨床資料

注射療法是將藥物、化學(xué)制劑或自體組織等注入后尿道或膀肌頸內(nèi)口粘膜下，使尿道腔變窄、拉長，延長功能性尿道的長度，提高尿道阻力，起到關(guān)閉尿道內(nèi)口和后尿道的作用，從而達(dá)到有效控制排尿的口的。這一治療方法對尿道內(nèi)括約肌功能障礙、尿道內(nèi)壓降低同時尿道、膀肌無其他病變等壓力性尿失禁患者有較好的效果。注射療法主要優(yōu)點在于.以在局部浸潤麻醉下進(jìn)行操作，大多數(shù)患者的手術(shù)均.IJ.以在門診進(jìn)行，適用于老年及不能耐一受大手術(shù)的患者?？谇白⑸浏煼ǖ难芯恐饕性谶x擇不同的注射材料上，理想的注射材料應(yīng)該在結(jié)構(gòu)上完整，無毒、無免疫原性、無變應(yīng)原性，近期內(nèi)不會被分解，能長時間保持其支撐作用?？谇笆褂玫牟牧仙须y達(dá)到上述要求，因此尋找一種取材方便、生物相容性好、安全無毒、療效滿意的注射材料十分必要。

方法：無菌技術(shù)下獲取SD大鼠雙側(cè)腹股溝區(qū)脂肪墊，消化離心，長期培養(yǎng)的方法獲取脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，鑒定其表面分子標(biāo)志。SD大鼠24只分為3組，實驗組（6只），對照組一（3只），對照組二（3只）。分別獲取自體ADSCs，實驗組進(jìn)行熒光標(biāo)記。然后實驗組將熒光標(biāo)記的ADSCs自體移植至尿道周圍，對照組移植未并取尿道組織進(jìn)行HE染色組織學(xué)分析。

2結(jié)果

原代培養(yǎng)顯示培養(yǎng)的脂肪源性間充質(zhì)干細(xì)胞2d左右開始壁，10d-14d左右可達(dá)90%融合，基本上為梭形成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，免疫細(xì)胞化學(xué)示 CD29陽性，CD34陰性。陰部神經(jīng)切斷術(shù)后10天，除模型組和對照組一各有1只大鼠死亡外，均進(jìn)行尿流動力學(xué)檢測，三組手術(shù)前后ALLP分別為：對照組一為27.1±5.1和29.1±3.2cmH₂O，對照二為29.5±4.9和27.4±72.3，模型組為24.8±3.8和14.7±3.0。模型組手術(shù)后ALLP明顯降低，且組織學(xué)檢查亦證明模型組大鼠尿道周圍括約肌明顯萎縮。

3討論

本實驗將熒光金標(biāo)記的脂肪源性干細(xì)胞自體移植至大鼠的近端尿道周圍，行冰凍切片，組織化學(xué)染色，熒光顯微鏡下觀察.見熒光標(biāo)記的細(xì)胞呈金黃色:后取組抗體免疫移植部位有較多的Desmin陽性的細(xì)胞，棕黃色，部分出現(xiàn)一定的方向性，未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤，說明己有細(xì)胞在局部存活并生長，提示能成為壓力性尿失禁注射治療的一種理想的注射材料，為將來進(jìn)行細(xì)胞移植治療壓力性尿失禁提供了實驗依據(jù)。

結(jié)論：①大鼠脂肪組織中含有豐富的多能干細(xì)胞。利用消化離心，長期培養(yǎng)的方法可獲取大量的干細(xì)胞。②移植后大鼠的ADSCs，可以在尿道周圍成活并生長分化。

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(收稿日期：2009.03.10)