不同提取工藝腸安顆粒的比較研究

【摘要】目的：對(duì)不同提取工藝腸安顆粒的比較研究。方法：采用小鼠乙酸刺激法復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型，將處方藥材按3種提取方法制成不同的提取液，觀察小鼠的整體狀況、出現(xiàn)潰瘍的動(dòng)物數(shù)、潰瘍點(diǎn)數(shù)和病理變化。結(jié)果：三種藥液給藥后，小鼠的整體狀況、小鼠結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍的動(dòng)物數(shù)、結(jié)腸潰瘍點(diǎn)數(shù)、病理切片均與模型組有顯著差異；工藝B組小鼠整體狀況比其他2個(gè)中藥工藝組好，結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍的動(dòng)物數(shù)最少，結(jié)腸潰瘍點(diǎn)數(shù)最少，病理切片顯示：炎癥細(xì)胞輕度浸潤(rùn)，基本形態(tài)與正常組相似。結(jié)論：各個(gè)中藥工藝組的提取物都對(duì)實(shí)驗(yàn)潰瘍性結(jié)腸炎模型有不同程度的療效，工藝B組療效顯著。

【關(guān)鍵詞】腸安顆粒；潰瘍性結(jié)腸炎；提取工藝

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)10-0007-02

Study on the extract technology of Chang -An granulation

LINH Xiaofang WANG Hongshan HUANG Shihang

(1.First People's Hospital of GUNG Dong，GUNG Dong，GUNG Zhou，510000;

2.Guangdong College of Pharmacy，GUNG Dong，GUNG Zhou，510000）

【Abstract】 objective:to study on the extract technology of Chang -An granulation. Methods:A model of ulcerative colitis (UC) was sieved using mouse models caused by acetic acid. The herbs in the prescription were extracted according to three methods. And integrated with mouse model， the integrated state， the number of ulceration animals and the point of ulceration colon were observed after treated with four extracts by this model. Results:Compared with the group of model， a marked variance was obtained in the integrated state， the number of ulceration animals， the point of ulceration colon and the change of pathology after treated with three extracts， but none of these conditions was less variance. Technology no.B was better than other groups with a better integrated state， less ulceration animals， and the point of ulceration colon was less. Its basic morphology was similar with normal animals. Conclusion: The extract of every technology has a various extent effect on experimental ulcerative colitis. The extract of technology no.B had a better effect on ulcerative colitis.

【Keywords】granulation; extract technology; ulcerative colitis; animal model

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis， UC）病變主要位于結(jié)腸的粘膜層，以潰瘍?yōu)橹鳎嗬奂爸蹦c和遠(yuǎn)端結(jié)腸，亦可遍及整個(gè)結(jié)腸。主要癥狀有腹瀉、粘膜膿血便、腹痛、里急后重，常反復(fù)發(fā)作，治愈難度大，且與結(jié)腸癌的發(fā)病存在一定的關(guān)系，因此被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治病之一^[1]。腸安顆粒由火炭母、魚(yú)腥草、黃柏等五個(gè)中藥組成，針對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的病因病機(jī)，按照中醫(yī)理論組方，臨床上治療UC取得良好療效。中藥顆粒劑具有質(zhì)量穩(wěn)定、易保存、攜帶方便的特點(diǎn)。為了開(kāi)發(fā)腸安顆粒，本實(shí)驗(yàn)對(duì)此處方的提取工藝進(jìn)行了初步研究，為下一步的提取工藝條件的優(yōu)化打下了基礎(chǔ)。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠（體重18～22g，雌雄各半，廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，SCXK粵2008A021）。

1.2實(shí)驗(yàn)用藥柳氮磺吡啶SASP（上海三維制藥有限公司，批號(hào)200709C15）；乙酸（分析醇）；中藥（廣州市致信藥業(yè)）。

1.3方法

1.3.1模型的建立^[2、3]小鼠禁食不禁水12h，經(jīng)肛門(mén)向結(jié)腸內(nèi)注入5％的乙酸溶液0.1ml（距小鼠肛門(mén)內(nèi)約3cm），后按住肛門(mén)1min，造模天數(shù)為1天，復(fù)制出醋酸誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎。

1.3.2供試提取液的制備三種藥液的制備方法如下：工藝A：按處方比例稱(chēng)取火炭母、魚(yú)腥草等三種藥材，加入10倍量75％乙醇回流提取1h，200目篩過(guò)濾，濾液回收乙醇至無(wú)乙醇味，備用，得①；藥渣與其余藥材（黃柏等兩種藥材）加水共煎，分別加入10倍量水煎煮1.5h，8倍量水煎煮1.0h，藥液200目篩過(guò)濾，合并濾液，濃縮至150ml，冷卻至60℃，加入乙醇，調(diào)整含醇量至50％，靜置24h，減壓過(guò)濾，回收乙醇，濃縮藥液，與醇提液①混合，繼續(xù)濃縮到所需濃度。工藝B：按處方比例取藥材一定量，分別加入10倍量水回流提取1.5h， 8倍量水回流提取1.0h。200目篩過(guò)濾，合并藥液，將濾液濃縮至300ml，稍冷，加入乙醇調(diào)整含醇量達(dá)50％，靜置24h，減壓濾過(guò)，濾液回收乙醇，繼續(xù)濃縮到所需濃度。工藝C：按處方比例稱(chēng)取藥材，分別加入10倍量水回流提取1.5h， 8倍水回流提取1.0h。合并藥液，200目篩過(guò)濾，濾液經(jīng)離心（3000～5000rpm，離心10分鐘），取上清液。濃縮到每1ml相當(dāng)于藥材6.1g。

1.3.3實(shí)驗(yàn)分組和給藥方法將造模小鼠隨機(jī)分為6組，包括工藝三個(gè)組、柳氮磺吡啶組、空白對(duì)照組、模型組。各組動(dòng)物灌藥前禁食不禁水12h，按照人與動(dòng)物等效劑量換算方法確定小鼠的給藥量。四個(gè)工藝組分別給予不同工藝制備的提取液，每次給藥為0.2ml/10g，相當(dāng)于生藥5.2g/㎏，柳氮磺吡啶組給予SASP，相當(dāng)于0.27g/kg，空白對(duì)照組給予等體積的蒸餾水，模型組于造模后第一日處死。每組小鼠每天給藥一次，連續(xù)給藥4天。同時(shí)設(shè)立正常組。

1.3.4觀察指標(biāo)^[2]

1.3.4.1一般情況觀察觀察小鼠的體重、活動(dòng)、毛色、大便、飲食等變化情況，是否腹瀉及膿血便等。正常大便指形成顆粒樣便；半稀便指糊狀或半成型不粘肛便；稀便指水樣粘肛便。

1.3.4.2病理學(xué)指標(biāo)給藥結(jié)束后，拉頸處死小鼠，打開(kāi)腹腔，分離大腸，沿腸系膜附著部縱行剪開(kāi)腸壁，冰生理鹽水沖洗干凈，平展在放大鏡下，觀察結(jié)腸形態(tài)改變。①肉眼觀察結(jié)腸粘膜出現(xiàn)的潰瘍、糜爛點(diǎn)、紅腫、出血點(diǎn)；②光學(xué)顯微鏡下觀察自病變嚴(yán)重部位取結(jié)腸組織標(biāo)本約0.5～0.7cm，置10％甲醛液中固定，常規(guī)石蠟包埋，切片（5μm），HE染色，鏡下觀察結(jié)腸的病理學(xué)改變。觀察其潰瘍、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

1.3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，±s表示。

2結(jié)果

2.1給藥期間小鼠的情況正常對(duì)照組：小鼠反應(yīng)靈活，毛色光澤，喜活動(dòng)，主動(dòng)覓食、大便正常。模型組：造模4小時(shí)后，即出現(xiàn)稀便，隨后逐漸加重，相繼出現(xiàn)黏液膿血便，飲食減少、體重減輕、消瘦、倦怠懶動(dòng)、拱背、豎毛、毛色無(wú)光澤、已無(wú)毛發(fā)自?xún)袅?xí)慣、精神萎靡。各個(gè)給藥組：上述癥狀隨時(shí)間而有不同程度的改善，用藥一天后大便開(kāi)始好轉(zhuǎn)。飲食量逐漸增加，體重增加明顯，活動(dòng)情況良好，給藥三天后毛色轉(zhuǎn)榮，黏液便停止。

2.2肉眼觀察潰瘍點(diǎn)數(shù)給藥三天后，處死小鼠取結(jié)腸標(biāo)本，記錄小鼠結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍的動(dòng)物數(shù)，肉眼觀察潰瘍點(diǎn)數(shù)。結(jié)果如表1。

2.3病理切片觀察顯微鏡下觀察結(jié)腸組織的變化，炎癥變化見(jiàn)表2。由肉眼觀察和病理切片結(jié)果可知，各中藥工藝組的小鼠的炎癥損傷隨著時(shí)間的推移而有不同程度的改善，而病理切片顯示，3個(gè)中藥工藝組都對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎有不同程度的療效。結(jié)合肉眼觀察的潰瘍點(diǎn)數(shù)可知，工藝B的效果較其他兩個(gè)中藥工藝組明顯。

3討論

潰瘍性結(jié)腸炎屬于的中醫(yī)“泄瀉”、“久痢”、“腸痹”范疇。本病初起多由脾胃虛弱所致，?？梢驖駸嶙铚薪苟T發(fā)或加重，日久不愈或反復(fù)發(fā)作出現(xiàn)一系列寒熱錯(cuò)雜、虛實(shí)夾雜之證^[4]。腸安顆粒由火炭母、魚(yú)腥草、黃柏等五個(gè)中藥組成，具有清熱解毒，燥濕化瘀的功效，可針對(duì)UC的病因病機(jī)，因此臨床取得了滿(mǎn)意的療效。為了進(jìn)一步開(kāi)發(fā)該處方，本次實(shí)驗(yàn)比較了三種腸安顆粒的制備工藝，以動(dòng)物整體狀況、潰瘍損傷程度和結(jié)腸病理等為藥理學(xué)指標(biāo)，篩選優(yōu)化該方的最佳工藝，對(duì)于研制療效確切、使用方便、質(zhì)量可控的中成藥，具有重要意義。本次實(shí)驗(yàn)采用乙酸刺激法誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎，結(jié)腸粘膜和肌層出現(xiàn)了廣泛的病理?yè)p害，肉眼觀察局部的病理改變對(duì)判斷藥物的作用具有重要的意義。提取物連續(xù)給藥4天后，粘膜水腫、充血、潰瘍、糜爛的發(fā)生明顯減輕，表明腸安顆粒提取物具有明顯的對(duì)抗乙酸誘導(dǎo)的炎性病理?yè)p害的作用。給藥組動(dòng)物腹瀉、黏液便等發(fā)生遠(yuǎn)較模型組、陰性對(duì)照組輕，且體重增加，表明提取物具有緩解局部炎癥和改善機(jī)體狀態(tài)的治療作用。本實(shí)驗(yàn)的各個(gè)中藥工藝組對(duì)乙酸刺激法誘導(dǎo)的潰瘍性結(jié)腸炎模型均有效，工藝B作用顯著，所以選擇工藝B為粗提工藝，為下一步的提取工藝條件的優(yōu)化打下了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]鄭紅斌．潰瘍性結(jié)腸炎全球發(fā)病情況比較[J]．中華消化雜志，2001；21(4)：10-12

[2]李麗，王平.潰結(jié)靈對(duì)實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎的治療作用．中藥藥理與臨床，2002；18（5）：25-26

[3]譚丹．潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型研究述要．中醫(yī)藥學(xué)刊，2001，19（4）：68-69

[4]張曉麗．中醫(yī)藥治療潰瘍性結(jié)腸炎的概況．山西中醫(yī)雜志，2005，10（2）：45-46

(收稿日期：2009.03.15)