耐甲氧西林表皮葡萄球菌及耐藥性檢測和同源性分析

【摘要】目的：了解我院MRSE的檢出率及耐藥的特點(diǎn)，并對MRSE菌株的同源性進(jìn)行研究。為臨床合理用藥和耐藥菌的防治提供參考依據(jù)。方法:采用頭孢西丁紙片擴(kuò)散法及mecA基因PCR法檢測出MRSE菌株，并對兩種檢測方法加以比較。結(jié)果:128株臨床分離表皮葡萄球菌中，用頭孢西丁紙片法及PCR法對MRSE檢出率分別為79．69％(102／128)和85．16％(109／128)，兩種方法對MRSE檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以PCR法檢出mecA基因作為判斷MRSE的金標(biāo)準(zhǔn)，頭孢西丁紙片法靈敏度為88．07％、特異度為68．42％、符合率為88．16％。MRSE對多種抗菌藥物耐藥顯著；除對B-內(nèi)酰胺類明顯耐藥外，對紅霉素和克林霉素的耐藥率均高達(dá)98．17％，結(jié)果顯示部分MRSE菌株間譜型相同。結(jié)論:頭孢西丁紙片法是篩選和確認(rèn)MRSE菌株的一種可靠、簡便的方法。MRSE為多重耐藥菌株，耐藥形勢嚴(yán)峻，部分菌株間存在克隆傳播現(xiàn)象，臨床必須加強(qiáng)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測。

【關(guān)鍵詞】耐甲氧西林表皮葡萄球菌；耐藥性；抗菌藥物

【中圖分類號】R446.61【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)10-0104-02

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源128株表皮葡萄球菌均來自我院2005年1月～2007年12月間住院患者的各類送檢標(biāo)本，主要來源于痰(44．53％)、分泌物(15．62％)、血液(10．93%)、創(chuàng)傷口(7．81％)等。

1.2方法

1.2.1頭孢西丁紙片法檢測MRSE參照2005年CLSI的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。秤量19g M-H瓊脂溶解于500ml雙蒸水中，高壓滅菌后，M-H瓊脂冷卻至50-60℃左右，傾注25ml制備藥敏平皿。將培養(yǎng)好的細(xì)菌液體，稀釋到0.5個(gè)麥?zhǔn)蠞岫龋妹薨粽喝≡壕鶆蛲坎荚谒幟羝矫笊?，然后貼上30ug頭孢西丁紙片，在35℃下培養(yǎng)24小時(shí)觀察結(jié)果。頭孢西丁紙片法的判定標(biāo)準(zhǔn)為：抑菌環(huán)直徑=24 mm判定為MRSE。

1.2.2mecA基因的檢測根據(jù)美國臨床及實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)，通過PCR方法檢測出耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)。

1.3藥敏試驗(yàn)采用K-B法，萬古霉素等抗生素藥敏紙片購自英國OXOID，結(jié)果按NCCLS藥敏試驗(yàn)法規(guī)判定，質(zhì)控菌株為金黃色葡萄球菌ATCC25923(敏感株)、ATCC43300(含有mecA基因的菌株)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSSl 1．0軟件對比頭孢西丁紙片擴(kuò)散法和mecA，PCR法對MRSE的檢出率以進(jìn)行X²檢驗(yàn)。

2結(jié)果

128株臨床分離的表皮葡萄球菌，經(jīng)mecA基因PCR法檢測，MRSE檢出率為85.16％(109／128)，頭孢西丁紙片法對MRSE的檢出率為79.69％(102／128)。兩種方法的檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，χ =4.366，P=0.113。以PCR方法檢測mecA基因(mecA基因經(jīng)測序證實(shí))作為金標(biāo)準(zhǔn)，頭孢西丁紙片擴(kuò)散法的靈敏度為88.07％、特異度為68.42％、符合率為88.16％。17種抗菌藥物對表皮葡萄球菌的體外抗菌活性顯示MRSE對多種抗菌藥物耐藥顯著，大多數(shù)抗菌藥物的耐藥率均在50％以上，其中對青霉素耐藥率為96．33％，對紅霉素和克林霉素的耐藥也很顯著，耐藥率均高達(dá)98．17％。MRSE對阿米卡星、利福平較為敏感，耐藥率分別為21．1％、42．2％；對萬古霉素、替考拉寧非常敏感，耐藥率為0，見表1。

3討論

表皮葡萄球菌現(xiàn)已成為醫(yī)院感染的重要病原菌，隨著抗菌藥物的廣泛使用，耐藥菌株不斷出現(xiàn)，且呈多重耐藥和交叉耐藥，必須加強(qiáng)監(jiān)測^[1]。我們對128株表皮葡萄球菌進(jìn)行MRSE的檢測，頭孢西丁紙片法的檢出率為79．6％，以PCR法為金標(biāo)準(zhǔn)，評價(jià)頭孢西丁紙片擴(kuò)散法的檢測效率結(jié)果顯示，孢西丁紙片法靈敏度為88．07％、特異度為68．42％，符合率88．16％。頭孢西丁紙片擴(kuò)散法操作簡單、敏感性、特異性高，具有很好的穩(wěn)定性，是臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢測MRSE的一種可靠、簡便的方法。MRSE菌株由于存在mecA基因，可以產(chǎn)生新的低親和力的青霉素結(jié)合蛋白，導(dǎo)致對B-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥，但是由于新的青霉素結(jié)合蛋白的表達(dá)水平不同，耐藥程度也可不同^[2]。本組資料顯示MRSE對青霉素、氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢嚷肟、頭孢吡肟的耐藥率分別為96．33％、78．90％、55．96％、55．05％、48．62％和66．06％。除青霉素類、大環(huán)內(nèi)酯類、阿米卡星和糖肽類以外，MRSE對其他抗菌藥物的耐藥率均高于MSSE。MRSE同時(shí)存在多種耐藥基因和耐藥機(jī)制，引起多重耐藥。MRSE菌株不僅對β-內(nèi)酰胺類(包括三、四代頭孢菌素、碳青霉烯)抗生素而且對大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等顯著耐藥，表現(xiàn)多重耐藥。在治療方面，根據(jù)CLSI規(guī)定，無論體外藥敏情況如何，只要系MRSE菌株，應(yīng)該視為對所有β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥，臨床治療不宜選用^[3]。MRSE和MSSE菌株對萬古霉素和替考拉寧非常敏感，未發(fā)現(xiàn)耐藥株，MRSE較為敏感的抗菌藥物尚有阿米卡星、利福平；萬古霉素等糖肽類抗生素仍然為臨床治療MRSE感染的首選藥物，嚴(yán)重感染可考慮聯(lián)合應(yīng)用利福平或阿米卡星。但是國內(nèi)已有對萬古霉素和替考拉寧中介，及對替考拉寧耐藥的表皮葡萄球菌的報(bào)道，提示萬古霉素的絕對優(yōu)勢已受到威脅，必須加強(qiáng)監(jiān)測。親脂性的利福平可以有效的穿透表皮葡萄球菌的生物膜，組織滲透性好，對SE有高度殺菌活性，但單獨(dú)應(yīng)用時(shí)致病菌易產(chǎn)生耐藥性，且僅可口服給藥，故而一般與萬古霉素聯(lián)合應(yīng)用。阿米卡星與糖肽類聯(lián)合應(yīng)用時(shí)要注意腎臟毒性問題。對于植入物相關(guān)的感染，如果抗菌藥物治療無效或效果不佳時(shí)，應(yīng)及時(shí)去除發(fā)生感染的植入物。

接觸傳播是表皮葡萄球菌最重要的傳播方式，侵入人體的主要途徑為損傷的皮膚及黏膜。預(yù)防表皮葡萄球菌感染應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度：進(jìn)行血管置管時(shí)，必須對穿刺部位有效消毒，徹底清除局部皮膚的病原菌；外科器械植入要嚴(yán)格無菌操作，并保證醫(yī)療用具、手術(shù)器械絕對無菌^[4]。應(yīng)該合理使用腎上腺皮質(zhì)激素和免疫抑制劑，積極治療和控制慢性基礎(chǔ)病，如糖尿病、肝硬化等，并糾正各種免疫缺陷；加強(qiáng)細(xì)菌耐藥性檢測，合理、規(guī)范使用抗生素。為防止MRSE的傳播和流行，應(yīng)注重我院MRSE的檢測和耐藥性監(jiān)測，以指導(dǎo)臨床合理用藥。

參考文獻(xiàn)

[1]邵亞娟，喬惠平，吳玉蓮．醫(yī)院感染常見細(xì)菌分布與耐藥性分析[J]．中國感染控制雜志[J]，2006，5(2)：153-156．

[2]陳小會(huì)，金月英．杭州市醫(yī)院感染病原菌分布及耐藥性分析[J]．浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，17(8)：31-32．

[3]孫保良，李之光，張敏．葡萄球菌對大環(huán)內(nèi)酯類的耐藥研究[J]．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，29(5)：459-461．

[4]趙旭，張嬰元．表皮葡萄球菌感染防治[J]．中國抗感染化療雜志，2003，3(5)：318-320．

(收稿日期：2009.04.19)