雜交桉組織培養(yǎng)快速繁殖試驗(yàn)研究

劉榮忠

摘要以雜交桉子代優(yōu)良單株的萌芽條頂芽或帶腋芽莖段為外植體，采用4種基本培養(yǎng)基和不同濃度生長調(diào)節(jié)劑的組合對比試驗(yàn)，篩選出最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為B1+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，增殖培養(yǎng)基為B1+0.5mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA，生根培養(yǎng)基為B2+0.5mg/L ABT1+0.2mg/L IBA。增殖倍數(shù)達(dá)3倍以上，生根率達(dá)50%~86%，其中ZL11無性系可達(dá)工廠化育苗水平。

關(guān)鍵詞雜交桉；培養(yǎng)基；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號S792.39文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739（2009）04-0007-02

桉樹速生豐產(chǎn)、用途廣，為我國短周期工業(yè)原料林的主要造林樹種。近20年來，廣西、廣東、福建、海南、四川等省區(qū)桉樹發(fā)展迅速，經(jīng)過多年的栽培選育，目前已有一些優(yōu)良無性系（如DH32-29）廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)，形成以優(yōu)良無性系組培苗為主的造林局面。但長期以來，福建省缺乏自主選育的優(yōu)良品種，生產(chǎn)上栽培的無性系大多是從廣西、廣東引進(jìn)或是在已有無性系林分中進(jìn)行選育，有些無性系雖然速生，但抗逆性較差，如在一些生態(tài)環(huán)境相對較差的地區(qū)易遇受風(fēng)害。為培育具有福建省特色、適宜閩南地區(qū)種植的桉樹優(yōu)良新品種，推動桉樹良種化進(jìn)程，2002年開始，漳州市林業(yè)局依托當(dāng)?shù)匾延匈Y源，同時(shí)從其他地區(qū)引入新的優(yōu)良基因資源，以選育速生、抗逆性強(qiáng)，特別是抗病蟲害和抗風(fēng)性強(qiáng)的桉樹優(yōu)良新品種為目標(biāo)，開展雜交、子代測定，并從中選出優(yōu)良單株若干個(gè)進(jìn)行組培繁殖試驗(yàn)，獲得了ZL9、ZL11、ZL15等雜交桉新無性系。本試驗(yàn)研究了雜種桉無性系組培技術(shù)，以期完善無性系擴(kuò)繁技術(shù)體系，并為無性系擴(kuò)繁應(yīng)用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

無性系組培的外植體來自漳州天馬國有林場雜交桉子代測定林優(yōu)良單株（ZL9、ZL11、ZL15）的樹干基部萌芽條（雜交桉新無性系來源及母株性狀見表1），外植體經(jīng)保鮮攜帶回漳州市林業(yè)組培中心實(shí)驗(yàn)室。枝條經(jīng)流水沖洗后，再用洗衣粉水浸泡30min，然后在超凈工作臺上用0.1% HgCl2溶液消毒8min，無菌水沖洗4~5次。然后切除兩頭及葉柄，切取0.5~1.0cm長帶腋芽的莖段作為外植體，斜插或直插于各種培養(yǎng)基上。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1基本培養(yǎng)基。用MS、B1（B1為巨尾桉優(yōu)良無性系繼代基本培養(yǎng)基）、H和White作為基本培養(yǎng)基，附加0.5mg/L 6-BA和0.2mg/L NAA。在相同的培養(yǎng)環(huán)境條件下，每組重復(fù)3次，每次50個(gè)。

1.2.2增殖和生根培養(yǎng)基。增殖培養(yǎng)基分別附加0.3mg/L、0.5mg/L、0.7mg/L、1.0mg/L 6-BA，0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L NAA。采用完全隨機(jī)組合設(shè)計(jì)，每個(gè)處理20瓶，每瓶5個(gè)芽，重復(fù)3次；生根培養(yǎng)附加0.1mg/L、0.5mg/L、1.0 mg/L ABT1號生根粉，0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L IBA，采用完全隨機(jī)組合設(shè)計(jì)，每個(gè)處理10瓶，每瓶10個(gè)芽，重復(fù)3次。

1.2.3培養(yǎng)條件。用食糖代替蔗糖，30g/L食糖+6~8g/L瓊脂，pH值5.8。培養(yǎng)溫度26±2℃，采用自然光源，光強(qiáng)2 000~3 000Lx，光照時(shí)數(shù)10~12h/d。

2結(jié)果與分析

2.1基本培養(yǎng)基的篩選

外植體接種后經(jīng)20~35d培養(yǎng)，觀察生長狀況。由表2 可以看出，采用MS和B1培養(yǎng)基，芽點(diǎn)綠，萌發(fā)率相差不大，但B1叢芽發(fā)生率高，MS的芽點(diǎn)有玻璃化現(xiàn)象。H和White培養(yǎng)基的萌芽率和生長表現(xiàn)明顯不如MS和B1。同時(shí)可看出，采用B1基本培養(yǎng)基，ZL9、ZL11、ZL15無性系的萌芽率均明顯高于其他3種基本培養(yǎng)基，分別達(dá)到68%、64%、62%，培養(yǎng)5~6個(gè)月后，叢生芽進(jìn)入了旺盛增殖期。通過比較分析，B1基本培養(yǎng)基的萌芽效果最佳，其對促進(jìn)叢生芽增殖效果顯著。

2.2試管苗增殖生長

選取粗壯無菌芽條（芽苗高度2.5cm以上作繁殖材料）接種到增殖培養(yǎng)基上（采用B1作為基本培養(yǎng)基），10d后基部不定芽萌發(fā)，30d后觀察，各種生長調(diào)節(jié)劑溶度組合的芽條生長情況見表3。由表3可以看出，ZL9、ZL11、ZL15無性系均以0.5mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA組合的增殖效果最好，莖芽平均高分別達(dá)2.63cm、2.71 cm 和2.87 cm，增殖倍數(shù)分別達(dá)3.17倍、3.23倍和3.29倍，且芽苗比較粗壯。

2.3試管苗的生根培養(yǎng)

經(jīng)增殖培養(yǎng)30d，通過無菌操作將有效芽（長2.0cm）單株切下，接種于附加各種激素濃度水平的B2（巨尾桉優(yōu)良無性系生根基本培養(yǎng)基）培養(yǎng)基上培養(yǎng)。芽條轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基后，先在室內(nèi)弱光照條件下培養(yǎng)10d左右，生根率達(dá)50%以上時(shí)，逐步加強(qiáng)光照。培養(yǎng)30d，試驗(yàn)結(jié)果見表4?？梢钥闯?，以B2+0.5mg/L ABT1+0.2mg/L IBA的培養(yǎng)基配方的生根率最高，ZL9、ZL11、ZL15無性系的生根率分別達(dá)到51%、86%、62%。

2.4試管苗移栽

生根培養(yǎng)20d后，將生根瓶苗及時(shí)移到高溫高光強(qiáng)的煉苗區(qū)（煉苗區(qū)溫度一般在30~35℃，光照在2 000~5 000Lx），煉苗7~10d，當(dāng)小苗莖部木質(zhì)化，葉色濃綠，莖軸伸長，應(yīng)及時(shí)洗去根部的培養(yǎng)基，移栽至無菌的紅心土中，移栽后澆透水，放入玻璃溫室或塑料大棚內(nèi)，覆蓋薄膜保濕并遮萌70%~80%，1周后，每6d噴1次多菌靈或代森錳鋅藥液，每天打開薄膜兩頭通風(fēng)5min，以防病害，保持相對濕度90%以上，15d后，揭開薄膜。移栽30d后檢查，小苗平均成活率達(dá)90％以上。

3小結(jié)與討論

（1）以雜交桉優(yōu)良單株的頂芽和莖段為外植體，B1+0.5 mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，B1+0.5mg/L 6-BA +0.3mg/L NAA為增殖培養(yǎng)基，B2+0.5mg/L ABT1+0.2mg/L IBA為生根培養(yǎng)基。按理論推算，年繁殖系數(shù)為3.2312，即1個(gè)芽經(jīng)增殖培養(yǎng)1年后可達(dá)1.29×107個(gè)莖芽，其中ZL11的生根率可達(dá)86%，達(dá)到工廠化育苗水平。

（2）當(dāng)小苗莖部木質(zhì)化，葉色濃綠，莖軸伸長時(shí)，應(yīng)及時(shí)洗去根部的培養(yǎng)基，移栽至無菌的紅心土中，移栽后澆透水，放入玻璃溫室或塑料大棚內(nèi)（11月至翌年的3月也可直接在露天進(jìn)行），覆蓋薄膜保濕并遮萌70%~80%，每 6d噴1次多菌靈或代森錳鋅藥液，1周后，每天打開薄膜兩頭通風(fēng)5min，以防病害，保持相對濕度90%以上，15d后，可揭開薄膜。移栽30d后檢查，小苗平均成活率可達(dá)90%以上。

（3）ZL9和ZL15的生根率較低，還不能完全達(dá)到工廠化生產(chǎn)的要求，有待進(jìn)一步試驗(yàn)，優(yōu)化配方。

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