阿托伐他汀對缺血再灌注損傷大鼠血腦屏障的保護作用

穆志杰

[摘要]目的：探索阿托伐他汀對缺血再灌注損傷大鼠血腦屏障的作用。方法：制備腦缺血再灌注模型，用阿托伐他汀規(guī)律治療，觀察腦組織的通透性改變以及腦組織中基質金屬蛋白酶9（MMP-9）的表達情況。濕重-干重法測量腦含水量的變化。結果：腦缺血再灌注提高了大鼠血腦屏障的通透性，用阿托伐他汀治療后大鼠腦含水量明顯降低，同時MMP-9表達減少。阿托伐他汀對血腦屏障具有保護作用。

[關鍵詞]腦缺血再灌注 血腦屏障 基質金屬蛋白酶9

中圖分類號：R3文獻標識碼：A文章編號：1671－7597（2009）0310003－01

在臨床中，常見的腦組織的病變例如腦腫瘤，腦缺血等病變都會影響到血腦屏障的通透性，致使血腦屏障對腦組織的保護作用受損，因此維護血腦屏障的結構和功能完整是當今神經保護研究中的熱點，他汀類藥物具有改善血管內皮功能，抗炎作用和免疫調節(jié)等作用，本試驗主要是用阿托伐他汀干擾缺血再灌注模型的大鼠，來觀察這種藥物在病理情況下對基質金屬蛋白酶9（MMP-9）的表達情況及對血腦屏障通透性的影響。

一、材料與方法

（一）實驗動物

動物雄性SD大鼠，體重（200±20）g，由山西醫(yī)科大學動物中心提供。實驗前適應性飼養(yǎng)1周。隨機分為缺血再灌注模型組和阿托伐他汀治療組，各組內又按不同時間點分2h，4h，6h，12h，24h，48h小組，每小組10只。每小組中5只用于免疫組化試驗，其余5只用于測定腦組織含水量。

（二）動物模型的制作

參照文獻方法［1,2］，用10%水合氯醛（350mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定，常規(guī)消毒皮膚，頸部正中切開，鈍性分離右側頸總動脈、頸外動脈和頸內動脈。沿頸內動脈向下分離出翼腭動脈，并電凝。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內動脈上近頸總動脈向下分離出翼動脈，并電凝。用動脈夾夾閉頸總動脈，于頸內動脈上近頸總動脈分叉處剪一切口，將一魚線（直徑約0.30mm）沿頸內動脈緩慢插入至大腦中動脈口，略感阻力時停止，插入長度約（18.0±0.5）mm，結扎固定魚線。結扎頸內動脈近心端，取下動脈夾，恢復頸外動脈血流。定時抽掉魚線恢復灌注。

（三）觀察指標

神經癥狀評分參照文獻方法［3,4］，按受損程度擬定神經癥狀評分等級。無神經損傷癥狀為Ⅰ級；不能完全伸展左側前爪為Ⅱ級；不能完全伸展左側前爪，向左側轉圈為Ⅲ級；不能完全伸展左側前爪，向左側傾倒為Ⅳ級；不能自發(fā)行走，意識喪失為Ⅴ級。按上述標準，于造模后24h，采用單盲法對各組大鼠進行神經癥狀評分。

（四）阿托伐他汀規(guī)律治療

在制作模型前一周，腹腔注射阿托伐他汀5毫克每千克每天。

（五）免疫組化法測定MMP-9的表達

石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，3mL?L-1過氧化氫滅活內源性過氧化物酶，熱修復抗原后，100mL?L-1正常山羊血清封閉非特異性抗原滴加一抗（1∶100稀釋）（購自武漢博士德生物公司），4℃過夜滴加生物素標記的二抗；37℃孵育30min；滴加辣根酶標記的鏈霉卵白素工作液；DAB顯色，封片。

（六）腦組織稱重

按照適當的時間點斷頭取腦，稱重，（精確到0.1mg），然后置入100℃恒溫箱，24h后稱干重。腦含水量（%）=（濕重-干重）/濕重×100。

（七）數據處理

各測定值用.x ±s表示，用SPSS 10.0統(tǒng)計學軟件作單因素方差分析。

二、結果

（一）免疫組化結果

大鼠在腦缺血再灌注4小時后，在腦組織中出現(xiàn)了MMP－9的表達，治療組與模型組相比，每個時間點所得到的切片顯示其陽性率明顯下降（P <0.05）。

（二）腦組織含水量

本實驗腦組織含水量在腦缺血后4小時增加（P <0.05），但治療組增加的幅度比模型組的小。

三、結論

他汀類藥物因與羥甲基戊二酰輔酶A結構相似，且與HMG2CoA還原酶的親和力高出HMG2CoA數千倍，故可對該酶產生競爭性抑制作用。通過阻止從HMG2CoA合成甲羥戊酸，不但能有效調節(jié)血脂，而且還可通過抑制GTP結合蛋白Rho和Rac而上調內皮型一氧化氮合酶（endothelial nitricoxide synthase，eNOS）的表達，并作用于NADH/NADPH氧化酶系統(tǒng)，降低NADPH的氧化活性[5]。抑制低密度脂蛋白的氧化和降低細胞內的氧化強度，直接抑制超氧化物的產生并有效清除氧自由基，減輕內皮損傷。從而維持血腦屏障的完整性。但他汀類藥物對MMP-9的影響至今尚未得到公認。

本試驗顯示腦缺血再灌注時。血腦屏障的完整性受損，腦組織水含量增加，但用阿托伐他汀治療后，腦水腫得以緩解，同時MMP-9的表達明顯下降，說明MMP-9的表達與腦水腫的發(fā)生密切相關，提示阿托伐他汀可通過降低血清MMP-9水平，減少血腦屏障的開放，減輕水腫，促進神經功能恢復，為ICH的治療提供了一個新思路。

參考文獻：

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