Ｖｐ５３２ｎｍ激光治療兔耳增生性瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究

王星武　孫曉燕　郭黨學(xué)　言超英　張美芳

[摘要]目的:探討可調(diào)脈寬（Vp）532nm激光對(duì)兔耳增生性瘢痕微血管、成纖維細(xì)胞、膠原纖維的影響。方法:利用兔耳腹側(cè)面建立增生性瘢痕模型,按不同時(shí)間取材,對(duì)比研究Vp532nm激光對(duì)兔耳增生性瘢痕微血管、成纖維細(xì)胞、膠原纖維的影響。結(jié)果:激光治療后微血管、成纖維細(xì)胞、膠原纖維較對(duì)照組明顯減少。結(jié)論:Vp532nm激光可明顯抑制兔耳增生性瘢痕。

[關(guān)鍵詞]Vp532nm激光；增生性瘢痕；微血管；成纖維細(xì)胞； 膠原纖維

[中圖分類號(hào)]Q813.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1008-6455（2009）02-0207-03

Effects of VP532nm laser on the hypertrophic scar in rabbit ears

WANG Xing-wu,SUN Xiao-yan,GUO Dang-xue,YAN CHao-ying,ZHANG Mei-fang

(1.Department of Dermatology; 2.Department of Pathology. Shaanxi Provincial

People's Hospital,Xi'an 710068, Shaanxi,China)

Abstract:ObjectiveTo investigatethe effect of VP532nm laser onhypertrophic scar in rabbit ears.Methodshypertrophic scarsin rabbit ears were established, specimens were harvested on different time, microvascular, fibroblast and collagenous fiber were observed.ResultsCompared with the control group, The expressions of microvascular、fibroblast and collagenous fiber in the experimental group were obviously weaker. ConclusionVP532nm laser mayplay a role ininhibiting hypertrophic scarring in rabbit ears.

Key words: VP532nmlaser; hypertrophic scar; microvascular；fibroblast；collagenous fiber

增生性瘢痕是醫(yī)學(xué)美容界的一個(gè)難題，目前沒有一種方法可以阻止瘢痕的發(fā)生。近年來，對(duì)瘢痕血管形成的研究頗多，并已證實(shí)瘢痕的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后與瘢痕組織的微血管活性密切相關(guān)。

Vp532nm激光治療皮膚血管性疾病已取得良好的效果，增生性瘢痕內(nèi)存在大量新生血管，Vp532nm激光是否可以用來治療增生性瘢痕？本實(shí)驗(yàn)通過建立兔耳增生性瘢痕模型，觀察在瘢痕形成過程中微血管、成纖維細(xì)胞、膠原的變化，以及可調(diào)脈寬532nm激光對(duì)其的影響，探索激光防治增生性瘢痕的可能機(jī)制。

1材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及設(shè)備：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大耳白兔10 只,雌雄各5只,體重1.5～2.0kg，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；設(shè)備：Vp532激光，美國科醫(yī)人公司生產(chǎn)。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 建立動(dòng)物模型：參照 牛扶幼[1]等建立動(dòng)物模型的方法略作改進(jìn)。常規(guī)術(shù)前準(zhǔn)備，2%利多卡因局部麻醉，將兔子固定在操作臺(tái)上。在兔耳腹側(cè)手術(shù)切除全層皮膚并刮去軟骨膜，形成4～6個(gè)直徑1cm或1.5cm的創(chuàng)面。術(shù)后1周去除創(chuàng)面痂皮，3周創(chuàng)面上皮化，形成早期增生性瘢痕動(dòng)物模型。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組與處理：增生性瘢痕形成后切取一組標(biāo)本，然后將其余的隨機(jī)分為激光治療組和對(duì)照組。治療組采用Vp532nm激光治療，治療參數(shù)是光斑直徑2～5mm，頻率2.5Hz，脈寬10～30ms，能量密度12～20J/cm2，以表面發(fā)白或發(fā)灰而未破損為宜。開始時(shí)，每周治療1次，一個(gè)月后改為每2周1次，2個(gè)月后改為每月1次。對(duì)照組不進(jìn)行治療。

1.2.3 觀察指標(biāo)：分別在治療后1、4、12周后，切取標(biāo)本，10%的福爾馬林固定。HE染色切片，測微尺測出瘢痕最高點(diǎn)至耳軟骨表面的垂直厚度（a）、瘢痕周邊正常皮膚至耳軟骨表面的垂直厚度（b），測算出瘢痕增生指數(shù)（HI=a/b）；每張HE染色組織切片分別隨機(jī)選5個(gè)不重疊視野（×200），計(jì)數(shù)成纖維細(xì)胞數(shù)。Masson 染色切片，觀察膠原分布情況。免疫組化CD34染色檢測瘢痕中微血管的變化，在瘢痕的增殖活躍區(qū)隨機(jī)選擇8個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野中微血管數(shù)量，然后求其平均數(shù)，按Weidner的方法計(jì)算每平方毫米的微血管數(shù)量。1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差即（x±s）表示，采用t 檢驗(yàn)，以P＜0.05為有顯著性差異。

2結(jié)果

2.1 瘢痕形成情況：兔耳腹側(cè)創(chuàng)面的愈合,具有增生性瘢痕的特點(diǎn)，上皮化后20天為增生最高峰，增生塊的厚度為耳腹側(cè)面正常皮膚的2～3倍，呈鮮紅色, 增生范圍不超過原創(chuàng)緣。部分兔耳增生塊孿縮,使兔耳耳廓畸形,類似人瘢痕孿縮所致的畸形，光鏡下見圖1a、1b。

2.2組織切片觀察

2.2.1 HE染色切片

2.2.1.1 對(duì)照組：真皮層明顯增厚,為正常真皮厚度的2～3倍, 主要是大量聚集的成纖維細(xì)胞及膠原纖維, 成纖維細(xì)胞呈梭形或橢圓形, 胞漿豐富,核大深染，排列無序,有旋渦狀結(jié)構(gòu)。真皮淺層膠原纖維呈結(jié)節(jié)或旋渦狀排列，膠原纖維含量豐富、粗大,排列紊亂。增生的真皮中可見擴(kuò)張的毛細(xì)血管及炎癥細(xì)胞浸潤，見圖2a。瘢痕增生指數(shù)及成纖維細(xì)胞數(shù)詳見表1、表2。

2.2.1.2 治療組：真皮層較對(duì)照組變薄，增生性瘢痕的膠原纖維結(jié)構(gòu)整齊、排列疏散、細(xì)胞成分明顯減少，見圖2b。治療后1周組瘢痕增生指數(shù)及成纖維細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比，無顯著性差異（P﹥0.05）。治療后4、12周組瘢痕增生指數(shù)及成纖維細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組相比，有顯著性差異（P﹤0.05）。詳見表1、表2。

2.2.2 免疫組化檢查微血管計(jì)數(shù)：光鏡下瘢痕組織中可見棕黃色染色的微血管，呈圓形、橢圓形或者條索形，見圖3a、3b。治療組兔耳瘢痕組織微血管計(jì)數(shù)明顯低于對(duì)照組。治療組與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.05）詳見表3。

2.2.3 Masson染色切片膠原分布情況：Masson染色顯示瘢痕膠原纖維呈藍(lán)色，對(duì)照組增生性瘢痕可見藍(lán)染較深的膠原纖維，外形粗大，排列雜亂無章。治療組的瘢痕雖然也可見藍(lán)染的膠原纖維，但與對(duì)照組比較藍(lán)染變淺且纖細(xì)，膠原排列疏散并趨于一致。見圖4a、4b。

3討論

增生性瘢痕是創(chuàng)傷愈合的異常結(jié)局?？稍斐蓹C(jī)體的外形改變和功能障礙。預(yù)防和治療增生性瘢痕的方法很多，但療效均不十分理想。近年來人們發(fā)現(xiàn)血管形成與增生性瘢痕形成關(guān)系密切,大量的微血管及豐富的微循環(huán)血流量可能在病理性瘢痕形成中發(fā)揮了重要的作用。如能針對(duì)血管因素施加影響，對(duì)瘢痕組織的過度增生應(yīng)有一定的防治作用。

沈銳[2]、岳毅剛[3]等用VEGF 抗體對(duì)增生性瘢痕動(dòng)物模型進(jìn)行靶向血管治療,使瘢痕體積明顯減小,血管密度明顯降低,膠原纖維減少排列整齊，結(jié)果表明,VEGF 抗體靶向血管治療能抑制增生性瘢痕的生長,具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。宋保強(qiáng)[4]采用血管內(nèi)皮抑制素作用于增生性瘢痕動(dòng)物模型，發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮抑制素注射后瘢痕組織真皮層變薄，血管數(shù)量及成纖維細(xì)胞數(shù)量明顯減少，膠原纖維較細(xì)致，排列有序。提示血管內(nèi)皮抑制素對(duì)增生性瘢痕的形成產(chǎn)生了明顯的抑制作用。宋保強(qiáng)[5]等構(gòu)建基因重組血管生成抑制因子1并將其作用于兔耳增生性瘢痕模型，發(fā)現(xiàn)兔耳瘢痕中血管生成受到明顯抑制，瘢痕為成熟期表現(xiàn)，提示基因重組血管生成抑制因子1在抑制瘢痕組織血管生成的同時(shí)對(duì)增生性瘢痕的形成起到了明確抑制作用。因此，通過影響血管因素來防治瘢痕組織的過度增生是可行的。

近年來脈沖染料激光應(yīng)用于臨床治療各種血管性病變的同時(shí),發(fā)現(xiàn)其對(duì)瘢痕有一定作用[6]。Vp532nm激光是根據(jù)選擇性激光光熱作用原理設(shè)計(jì)，波長532nm，為綠色激光，位于血紅蛋白的最佳吸收區(qū)內(nèi)，能最大限度地被血紅蛋白吸收并轉(zhuǎn)變成熱量，使血管萎縮或閉塞。在皮膚組織中的穿透深度適中，脈沖的寬度可調(diào)，使得激光能夠在組織熱弛豫時(shí)間上與各種直徑的血管和病變區(qū)域相匹配，可以有效地治療各種類型的皮膚血管性疾病[7]。與脈沖染料激光相比，具有熱損傷小，沒有術(shù)后紫癜反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。

本研究發(fā)現(xiàn)，Vp532nm激光治療增生性瘢痕模型后，瘢痕顏色變淡，質(zhì)地變?nèi)彳?，微血管、成纖維細(xì)胞、膠原纖維數(shù)量減少，排列整齊，提示Vp532nm激光可抑制兔耳瘢痕增生程度,但其對(duì)于人類增生性瘢痕的作用還有待于進(jìn)一步的研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]牛扶幼,牛永敢,陳言湯.兔耳增生性瘢痕模型的建立[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2004，（12）：12-17.

[2]沈銳,利天增,祁少海.靶向血管治療增生性瘢痕的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華整形外科雜志2003，7，19（ 4）：254-257.

[3]岳毅剛,蔣常文,李佩英. VEGF 抗體靶向血管治療增生性瘢痕的研究[J].中國實(shí)用美容整形外科雜志，2006，17（1）： 68-71.

[4]宋保強(qiáng),魯開化,張陽,等.兔耳增生性瘢痕血管生成及腺病毒轉(zhuǎn)染基因重組血管生成抑制因子1[J].中國修復(fù)重建外科雜志，2008， 22（1）：70-74.

[5]宋保強(qiáng),魯開化,郭樹忠.兔耳增生性瘢痕與血管內(nèi)皮抑制素的抑制[J]. 中國臨床康復(fù)2005，9（18）：111-113.

[6]Kono T,Ercocen AR, Nakazawa H,et al .The flashlamp-pumped pulsed dye laser (585 nm) treatment of hypertrophic scars in Asians[J]. Ann Plast surg,2003,51(4):366-371.

[7]John Louis R atz 著,劉輔仁主譯.皮膚外科學(xué)[M ].西安:世界圖書出版公司,1999:319-324.

[收稿日期]2008-09-15[修回日期]2009-01-08

編輯/張惠娟