補(bǔ)充大豆多肽對(duì)遞增負(fù)荷運(yùn)動(dòng)大鼠血清ＬＤＨ、ＡＬＴ、ＡＳＴ活性的影響

彭　莉　王啟榮　畢秋蕓

摘要：觀察了5周遞增負(fù)荷訓(xùn)練并同時(shí)補(bǔ)充大豆多肽后的大鼠在運(yùn)動(dòng)后某些血清酶的變化，旨為在訓(xùn)練中補(bǔ)充大豆多肽對(duì)身體機(jī)能及運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)的作用提供一定的理論依據(jù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：補(bǔ)充大豆多肽降低了運(yùn)動(dòng)后血清LDH和AST活性。提示：補(bǔ)充大豆多肽可能起到預(yù)防骨骼肌和心肌運(yùn)動(dòng)性微損傷和促進(jìn)損傷恢復(fù)的作用。

關(guān)鍵詞：大豆多肽；LDH；ALT；AST

中圖分類號(hào)：G804.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1007-3612(2008)02-0199-03

大豆多肽是大豆蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)特殊處理而得到的蛋白質(zhì)水解物。它由多種肽分子混合物組成，含蛋白質(zhì)（85%左右）及少量游離氨基酸、糖類和無機(jī)鹽等成分。與傳統(tǒng)大豆蛋白相比，大豆多肽具有易消化吸收、能迅速供給機(jī)體能量、無蛋白變性、無豆腥味，無殘?jiān)?、液體粘性小和受熱不凝固等特性，尤其是具有降低血清膽固醇、降血壓和促進(jìn)脂肪代謝等獨(dú)特的生理功能。因此，開發(fā)多肽制品為運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)保健品也極有價(jià)值。而目前國(guó)內(nèi)對(duì)大豆多肽在運(yùn)動(dòng)領(lǐng)域的研究，動(dòng)物研究都是一次大強(qiáng)度離心運(yùn)動(dòng)模型，補(bǔ)充大豆多肽的時(shí)間也僅是短時(shí)間，而對(duì)長(zhǎng)期補(bǔ)充大豆多肽在系統(tǒng)訓(xùn)練中的作用的研究尚不深入。因此，為更貼合運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練的實(shí)際情況，本研究觀察了5周遞增負(fù)荷訓(xùn)練并同時(shí)補(bǔ)充大豆多肽后的大鼠在運(yùn)動(dòng)后某些血清酶的變化，旨為在訓(xùn)練中補(bǔ)充大豆多肽對(duì)身體機(jī)能及運(yùn)動(dòng)后恢復(fù)的作用提供一定的理論依據(jù)。

1研究對(duì)象與方法

1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象SPF/VAF級(jí)雄性SD健康大鼠，平均體重180～200 g（6周齡），購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，質(zhì)量合格證號(hào)：No：0043356（許可證編號(hào)：SCXK（京）2002.003），大鼠在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)3 d后隨機(jī)分13組（表1），每組10只，各組間動(dòng)物體重?zé)o顯著性差異。

動(dòng)物在國(guó)家體育總局運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物房（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ級(jí)）內(nèi)分籠飼養(yǎng)，每籠5只，室溫控制在20～26℃，相對(duì)濕度50％～70%，晝夜節(jié)律用日光燈控制，每天光照時(shí)間12 h（早8點(diǎn)到晚8點(diǎn)）。標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物維持期飼料（購(gòu)于北京科澳協(xié)力飼料有限公司，產(chǎn)品許可證號(hào)：京飼（配）字第238號(hào)）和高壓滅菌水飼養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水。飼養(yǎng)籠墊料使用高壓滅菌消毒墊料，每周更換2次。

1.2灌胃方式與劑量

各組動(dòng)物經(jīng)平衡膳食3 d后開始適應(yīng)性訓(xùn)練。大豆多肽和大豆蛋白均由北京康比特微創(chuàng)體育新技術(shù)發(fā)展有限公司惠贈(zèng)，大豆多肽主要含五肽、六肽和八肽，分子量在200～600之間。大鼠運(yùn)動(dòng)后30 min內(nèi)進(jìn)行灌胃，每日一次，灌胃劑量按0.15 g/100 g體重，大豆多肽和大豆蛋白溶液濃度均為15%［1］，訓(xùn)練對(duì)照組灌胃等量蒸餾水。

1.3動(dòng)物訓(xùn)練

運(yùn)動(dòng)組大鼠在實(shí)驗(yàn)前均在跑臺(tái)上進(jìn)行3 d適應(yīng)性運(yùn)動(dòng)，速度為5～10 m/min、時(shí)間為10 min、坡度為零，跑臺(tái)為PT98型大白鼠跑臺(tái)（中國(guó)杭州段氏制作）。大鼠在進(jìn)行適應(yīng)性運(yùn)動(dòng)后，按以下方案（表2）進(jìn)行跑臺(tái)水平跑運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練。每周訓(xùn)練5 d，星期六、日休息，每天訓(xùn)練20 min，最后兩天為25 min和30 min［2］。在大鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練期間，為保證訓(xùn)練效果進(jìn)行人工驅(qū)趕，但不使用電刺激。安靜組動(dòng)物不進(jìn)行運(yùn)動(dòng)。

1.4動(dòng)物宰殺和標(biāo)本取材

取運(yùn)動(dòng)后0 h、6 h、12 h和24 h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，動(dòng)物宰殺前用戊巴比妥溶液腹腔注射麻醉，麻醉劑量為0.25-0.5 g/kg體重。待大鼠進(jìn)入深度麻醉后，固定四肢及頭部，75%酒精消毒腹部后剖開腹腔，用注射器腹主動(dòng)脈取血8 mL左右，靜置30 min，離心，取血清于-80℃保存待測(cè)。

1.5測(cè)試指標(biāo)和方法血清乳酸脫氫酶（LDH）、血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）活性，全自動(dòng)生化分析儀（日本HITACHI7020型），LDH、ALT、AST測(cè)試試劑盒均購(gòu)自上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司

1.6統(tǒng)計(jì)分析所有數(shù)值除有特別說明外均以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（mean±SD）表示，統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS for Windows 10.0版統(tǒng)計(jì)分析軟件完成。組間比較使用單因素方差分析（F檢驗(yàn)），顯著性水平為P<0.05。

2結(jié)果

2.1大鼠最后一次運(yùn)動(dòng)后血清LDH的變化

注：*：與安靜組比較p<0.05；#：與訓(xùn)練對(duì)照組比較p<0.05；&：與補(bǔ)充蛋白組比較p<0.05。

由表3顯示，各訓(xùn)練組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清LDH活性均顯著高于安靜值（p<0.05），各組LDH活性變化趨勢(shì)一致：運(yùn)動(dòng)后6 h下降，24 h再次升高，48 h下降至最低值，補(bǔ)充大豆多肽組LDH活性最高值出現(xiàn)在運(yùn)動(dòng)后即刻，補(bǔ)充大豆蛋白和訓(xùn)練對(duì)照組LDH最高值出現(xiàn)在24 h。

運(yùn)動(dòng)后即刻補(bǔ)充大豆多肽組LDH活性最高，但較其它訓(xùn)練組無顯著差異。6 h各組LDH活性差異不大，到48 h訓(xùn)練對(duì)照和補(bǔ)充大豆蛋白組LDH活性顯著升高（p<0．05，p<0．05），分別升高了60.6%和41.9%，而補(bǔ)充大豆多肽組僅升高了16%。48 h各訓(xùn)練組LDH活性降至最低值，但仍高于安靜值。

2.2大鼠最后一次運(yùn)動(dòng)后血清ALT和AST活性變化

注：*：與安靜組比較p<0.05；#：與訓(xùn)練對(duì)照組比較p<0.05；&：與補(bǔ)充蛋白組比較p<0.05。

表4顯示，各訓(xùn)練組大鼠運(yùn)動(dòng)后即刻血清ALT活性最高，然后呈下降趨勢(shì)。訓(xùn)練對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)后即刻血清ALT活性為安靜值的118.6%，然后下降，6 h稍高于安靜值，24 h稍低于安靜值，48 h恢復(fù)至安靜值；補(bǔ)充大豆蛋白組大鼠運(yùn)動(dòng)后即刻血清ALT活性一直高于安靜值，0h時(shí)為安靜值的154．1%(P<0.05)，然后下降，6 h時(shí)為安靜值的136.0%，24 h和48 h內(nèi)活性沒有變化，為安靜值的107.7%；補(bǔ)充大豆多肽組大鼠運(yùn)動(dòng)后即刻血清ALT活性為安靜值的120.4%，然后下降，24 h下降至低于安靜值，但無顯著性差異，48 h恢復(fù)至安靜值。

補(bǔ)充大豆蛋白組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清ALT活性一直高于其它組，且運(yùn)動(dòng)后即刻顯著高于安靜值（p<0.05）；補(bǔ)充大豆多肽和訓(xùn)練對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清ALT活性變化趨勢(shì)一致：運(yùn)動(dòng)后即刻和運(yùn)動(dòng)后6 h均高于安靜值，運(yùn)動(dòng)后24 h均低于安靜值，運(yùn)動(dòng)后48 h均與安靜值接近。

表4顯示，大鼠運(yùn)動(dòng)后血清AST活性均高于安靜值。補(bǔ)充大豆蛋白和訓(xùn)練對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清AST活性變化一致，即先升高后降低再升高；補(bǔ)充大豆多肽組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清AST活性呈下降趨勢(shì)，運(yùn)動(dòng)后即刻最高，24 h下降至接近安靜值，48 h又略有下降，但仍高于安靜值。

運(yùn)動(dòng)后即刻各訓(xùn)練組血清AST活性之間沒有顯著性差異；6 h時(shí)補(bǔ)充大豆蛋白組和訓(xùn)練對(duì)照組大鼠AST活性顯著高于安靜值(p<0.05)，補(bǔ)充大豆多肽組AST活性高于安靜值但無顯著性差異；24 h～48 hAST活性繼續(xù)下降，至48 h均恢復(fù)至接近安靜值。

3分析討論

3.1補(bǔ)充大豆多肽和大豆蛋白對(duì)訓(xùn)練后大鼠血清LDH活性的影響乳酸脫氫酶（LDH）是催化乳酸和丙酮酸之間相互轉(zhuǎn)換的酶，廣泛存在于各種組織中，以心肌、骨骼肌、腎臟和肝臟中含量最豐富。而血清LDH主要源于骨骼肌，為肌型LDH（M-LDH），當(dāng)組織細(xì)胞更新或破壞時(shí)，LDH從細(xì)胞內(nèi)溢出進(jìn)入組織間液再進(jìn)入血液，引起血清酶活性升高。

邵慧秋等［3］研究發(fā)現(xiàn)：短時(shí)間高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練能引起CK、LDH活性的顯著增加（P<0.01）。Rose等［4］報(bào)道運(yùn)動(dòng)員在馬拉松運(yùn)動(dòng)后，血清中的LDH活性升高，同時(shí)LDH同工酶的比例也發(fā)生改變，表現(xiàn)為肌型LDH比例含量升高，而心型LDH下降。Wolf等［5］對(duì)11名國(guó)際級(jí)馬拉松運(yùn)動(dòng)員研究發(fā)現(xiàn)，馬拉松比賽后血清LDH也明顯增高。Armstrong［6］對(duì)大鼠離心運(yùn)動(dòng)的研究表明，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后血漿LDH活性顯著升高，并與骨骼肌超微結(jié)構(gòu)變化一致。周強(qiáng)［7］的研究表明，力竭運(yùn)動(dòng)后男女運(yùn)動(dòng)員LDH總活力升高顯著（P<0.01，P<0.05），第二天基本恢復(fù)。Mashiko等［8］研究25名大學(xué)橄欖球運(yùn)動(dòng)員夏訓(xùn)后身體成分和生化指標(biāo)的變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，20天夏訓(xùn)后血清鉀、BUN、ALT、AST、LDH和CK都顯著升高，他們認(rèn)為是訓(xùn)練導(dǎo)致肌肉損傷，并且肌肉蛋白有降解。Smith［9］研究運(yùn)動(dòng)員馬拉松跑后，發(fā)現(xiàn)血清CK、CK-MB、AST、LDH和肌紅蛋白都明顯升高。Vander Meulen［10］研究大鼠進(jìn)行1.5和2.5 h的下坡跑，運(yùn)動(dòng)后即刻CK、AST、LD均明顯升高。田振軍［11］研究大鼠游泳訓(xùn)練后，發(fā)現(xiàn)一般訓(xùn)練和過度訓(xùn)練大鼠CK、LDH、SOD、SDH(琥珀酸脫氫酶)活性均高于安靜值，認(rèn)為一般運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練影響機(jī)體細(xì)胞供能代謝及細(xì)胞膜系統(tǒng)功能狀態(tài)，過度訓(xùn)練導(dǎo)致骨骼肌等器官發(fā)生運(yùn)動(dòng)性損傷。

本研究發(fā)現(xiàn)：訓(xùn)練對(duì)照組大鼠在運(yùn)動(dòng)后血清LDH活性升高，運(yùn)動(dòng)后24 hLDH達(dá)到最高值，運(yùn)動(dòng)后48 h仍高于安靜值，說明運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練導(dǎo)致了骨骼肌微損傷的發(fā)生，而且損傷還有一定的延遲性，骨骼肌微結(jié)構(gòu)產(chǎn)生變化，肌肉蛋白和肌細(xì)胞膜受損，導(dǎo)致血清中來源于骨骼肌的酶活性顯著升高。

運(yùn)動(dòng)后即刻各訓(xùn)練組大鼠血清LDH活性均顯著高于安靜值，但各組間沒有顯著性差異。運(yùn)動(dòng)后6 h各組LDH活性均下降，24 h又升高，補(bǔ)充大豆蛋白和訓(xùn)練對(duì)照組各升高了41.9%和60.6%，而補(bǔ)充大豆多肽組僅升高了16.0%。48 h各組LDH都下降，補(bǔ)充大豆蛋白和補(bǔ)充大豆多肽組下降至安靜值，而訓(xùn)練對(duì)照組仍高于安靜值。說明大豆蛋白和大豆多肽可促進(jìn)運(yùn)動(dòng)后血清LDH的恢復(fù)，促進(jìn)運(yùn)動(dòng)后骨骼肌微損傷的修復(fù)。

3.2補(bǔ)充大豆多肽和大豆蛋白對(duì)訓(xùn)練后大鼠血清ALT和AST活性的影響ALT可逆催化丙酮酸和α-酮戊二酸之間的反應(yīng)，AST可逆催化天冬氨酸和α-酮戊二酸之間的反應(yīng)。ALT主要存在于肝臟中，運(yùn)動(dòng)后血清中ALT的升高常認(rèn)為是肝臟釋放造成的。

本研究中訓(xùn)練對(duì)照組在運(yùn)動(dòng)后血清ALT活性與安靜組相比，沒有顯著性差異，提示我們采用的運(yùn)動(dòng)方式與運(yùn)動(dòng)負(fù)荷可能未對(duì)肝臟功能造成大的影響。同樣道理，補(bǔ)充大豆多肽組在運(yùn)動(dòng)后各個(gè)時(shí)刻的ALT活性與安靜組對(duì)比，均無明顯差異，并且未出現(xiàn)ALT活性延遲性升高的現(xiàn)象。提示：補(bǔ)充大豆多肽對(duì)運(yùn)動(dòng)后血清ALT活性影響很小，也就是說補(bǔ)充大豆多肽對(duì)肝臟的保護(hù)作用不明顯。

而補(bǔ)充大豆蛋白組在運(yùn)動(dòng)后即刻血清ALT活性卻明顯高于安靜對(duì)照組。各訓(xùn)練組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清ALT的變化一致：運(yùn)動(dòng)后即刻活性最高，然后下降，運(yùn)動(dòng)后48 h恢復(fù)至安靜值。補(bǔ)充大豆多肽和訓(xùn)練對(duì)照組大鼠運(yùn)動(dòng)后48 h內(nèi)血清ALT活性差異很小，但補(bǔ)充大豆蛋白組ALT活性卻一直高于其它兩組，但24 h～48 h內(nèi)僅下降了4.5%，可能是訓(xùn)練并補(bǔ)充大豆蛋白對(duì)肝臟有影響，或者意味著較長(zhǎng)期地補(bǔ)充大豆蛋白降低了大鼠肝臟功能？具體是否是肝臟細(xì)胞受損，單靠ALT這一個(gè)指標(biāo)還不能下結(jié)論。其中原因尚有待進(jìn)一步的研究。

AST分布在體內(nèi)多種臟器中，其中心臟中活性最高，運(yùn)動(dòng)后血清中AST的升高主要是心臟釋放增多；大多數(shù)研究認(rèn)為，運(yùn)動(dòng)負(fù)荷增加到一定程度后，可以引起運(yùn)動(dòng)時(shí)和運(yùn)動(dòng)后血清ALT和AST活性增加，用ALT和AST活性可以用來評(píng)定組織損傷程度時(shí)，一般與血清CK、LDH等一起使用。

各訓(xùn)練組大鼠運(yùn)動(dòng)后血清AST活性均高于安靜值，而且補(bǔ)充大豆蛋白和訓(xùn)練對(duì)照組大鼠在運(yùn)動(dòng)后6 h達(dá)到最高值，顯著高于安靜值，說明運(yùn)動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞有一定的損害作用，而且這種損害還有一定的延遲效應(yīng)。而補(bǔ)充大豆多肽組大鼠運(yùn)動(dòng)后各個(gè)時(shí)刻AST與安靜組比較，均沒有明顯差異，并且一直呈下降趨勢(shì)，運(yùn)動(dòng)后即刻活性最高，6 h～48 h均低于訓(xùn)練對(duì)照組，說明大豆多肽有降低運(yùn)動(dòng)后血清AST活性的作用。結(jié)合血清AST和CK-MB的變化，說明大豆多肽可降低運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練導(dǎo)致的心肌細(xì)胞損傷，對(duì)保護(hù)心肌細(xì)胞膜有一定作用。

4結(jié)論

1) 補(bǔ)充大豆多肽降低了大鼠運(yùn)動(dòng)后LDH活性，提示補(bǔ)充大豆多肽可能起到保護(hù)骨骼肌細(xì)胞、預(yù)防與降低運(yùn)動(dòng)后骨骼肌微損傷的發(fā)生以及促進(jìn)損傷恢復(fù)的作用。

2) 補(bǔ)充大豆多肽降低了大鼠運(yùn)動(dòng)后血清AST活性，提示補(bǔ)充大豆多肽可以保護(hù)心肌細(xì)胞、降低運(yùn)動(dòng)后心肌微損傷的發(fā)生。

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