5種礦物源藥劑對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌室內(nèi)防效評(píng)價(jià)

李麗 張樹(shù)武 陳大為 徐秉良

蘋(píng)果樹(shù)腐爛病是目前危害我國(guó)蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)最主要的病害之一，截至2008年，全國(guó)范圍內(nèi)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病的總體病株率為52.7%，部分地區(qū)發(fā)病率高達(dá)85%以上。薛應(yīng)鈺等對(duì)甘肅省12個(gè)縣、區(qū)74個(gè)不同樹(shù)齡蘋(píng)果園調(diào)查發(fā)現(xiàn)，蘋(píng)果樹(shù)腐爛病在甘肅省發(fā)生十分普遍，其發(fā)病率平均達(dá)到41.09%，嚴(yán)重影響了甘肅省蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，其中平?jīng)觥⑻焖?、白銀、隴南和慶陽(yáng)等老果園發(fā)病率高，尤其樹(shù)勢(shì)較差果園發(fā)病率高達(dá)60%。引起該病害的病原為黑腐皮殼菌Valsa mali，該菌可侵染蘋(píng)果樹(shù)主枝、主干和果實(shí)等多個(gè)部位，導(dǎo)致樹(shù)皮腐爛、樹(shù)勢(shì)衰弱、蘋(píng)果產(chǎn)量和品質(zhì)下降，嚴(yán)重時(shí)引起主干、大枝及整樹(shù)枯死，甚至全園被毀。

目前，生產(chǎn)中蘋(píng)果樹(shù)腐爛病的防治主要采取傳統(tǒng)的化學(xué)防治，但是隨著人們生活水平的不斷提高，人們對(duì)環(huán)境污染和食品安全等問(wèn)題越來(lái)越重視。長(zhǎng)期使用化學(xué)農(nóng)藥不僅會(huì)破壞果園的生態(tài)環(huán)境，而且影響果實(shí)品質(zhì)，甚至可能引起食品安全問(wèn)題。礦物源農(nóng)藥是一類由天然礦物油或無(wú)機(jī)化合物通過(guò)加工制成的殺菌劑、殺蟲(chóng)劑、除草劑和殺鼠劑。早期的礦物源農(nóng)藥主要包括銅制劑、硫化物、砷化物、氟化物、磷化物和礦物油等，但隨著廣譜和高效的有機(jī)化學(xué)農(nóng)藥的出現(xiàn)與發(fā)展，某些具有毒性、藥害或者具有殘留毒性的礦物源農(nóng)藥逐漸被淘汰停止使用，如砷酸鉛、磷化鋅和砷酸鈣等。目前使用的礦物源農(nóng)藥主要是一些對(duì)人畜毒性較低，對(duì)有益生物比較安全的藥劑，如銅制劑、硫制劑和礦物油乳劑等，其在病害防治中具有獨(dú)特的作用。同時(shí)，與傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥相比較，礦物源農(nóng)藥具有殺菌范圍廣，對(duì)常見(jiàn)的真菌和細(xì)菌性病害有較好的防治作用，不易誘導(dǎo)病菌產(chǎn)生抗藥性、安全性強(qiáng)、且耐雨水沖刷、持效期長(zhǎng)的特點(diǎn)，多年來(lái)被廣泛用于植物病害防治。例如，99%礦物油乳油（綠穎）可防治黃瓜白粉病和草莓白粉病，對(duì)蚜蟲(chóng)等昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育具有抑制作用，對(duì)黃瓜和草莓安全。黃腐酸能夠抑制蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌絲的生長(zhǎng)，且濃度越大抑制效果越顯著。77%氫氧化銅干懸浮劑、37.5%氫氧化銅懸浮劑和波爾多液對(duì)加工番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病具有較好的防治效果。有關(guān)利用礦物源農(nóng)藥防治蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌方面的研究較少。因此，尋找能夠代替?zhèn)鹘y(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥且對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病具有高效、低毒的礦物源農(nóng)藥已成為目前的形勢(shì)所需。

本研究對(duì)5種礦物源農(nóng)藥對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病原菌室內(nèi)抑菌活性以及離體枝條防治效果進(jìn)行測(cè)定，以期篩選獲得對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病防效較佳的礦物源農(nóng)藥和施用濃度，研究結(jié)果可為蘋(píng)果樹(shù)腐爛病生物防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試病原菌

供試蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌Valsa mali由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院植物病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2供試藥劑

供試藥劑信息見(jiàn)表1。

1.1.3供試枝條

采集于甘肅省蘭州市西固區(qū)崔家崖村蘋(píng)果園，品種為‘新紅星，5年樹(shù)齡。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌活化及其培養(yǎng)

挑取保存于4℃冰箱中的蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌，接種于PDA培養(yǎng)基中央進(jìn)行菌種活化，并置于25℃、L∥D=16h∥8h的恒溫箱培養(yǎng)5d，然后重復(fù)上述步驟進(jìn)行二次純化，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2不同礦物源藥劑對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

藥劑配制：將77%氫氧化銅WP、80%波爾多液WP、77%硫酸銅鈣WP、86.2%氧化亞銅WG和70%腐植酸鈉GR，按照推薦濃度經(jīng)無(wú)菌水稀釋溶解后分別加入未凝固的70mL PDA培養(yǎng)基中充分搖勻，并經(jīng)稀釋后配制為不同質(zhì)量濃度的供試藥劑（表2）。

毒力測(cè)定：采用菌絲生長(zhǎng)速率法。將不同質(zhì)量濃度藥劑分別配制成含藥平板，并接種蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌餅（d=0.5cm）于含藥培養(yǎng)基中央，以加入無(wú)菌水的培養(yǎng)基為空白對(duì)照，每個(gè)處理和對(duì)照3次重復(fù)。然后置于25℃恒溫培養(yǎng)箱里L(fēng)∥D=16h∥8h下培養(yǎng)，5d后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率和有效中質(zhì)量濃度EC50。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=[（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-0.5）]×100%，

將抑制率轉(zhuǎn)換成幾率值，質(zhì)量濃度轉(zhuǎn)換成質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)，以各藥劑質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)值為x，并以抑菌率的幾率值為y，計(jì)算供試藥劑有效中質(zhì)量濃度EC50，比較各藥劑的毒力效果。

1.2.3不同礦物源藥劑對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用

采用玻片孢子萌發(fā)法。將5種供試藥劑經(jīng)無(wú)菌水按半倍稀釋法配制成不同濃度的藥液，吸取1mL藥液加入滅菌后稍冷卻的9mL PDA培養(yǎng)基中充分搖勻，制成含藥平板。待冷卻后在含藥平板上滴入20uL分生孢子懸浮液，涂抹均勻后利用打孑L器（d=10mm）打取菌餅移于載玻片上，以加無(wú)菌水的PDA作空白對(duì)照，每個(gè)處理和對(duì)照3次重復(fù)。在25℃黑暗條件下保濕培養(yǎng)36h后統(tǒng)計(jì)分生孢子萌發(fā)情況，每個(gè)處理觀察100個(gè)分生孢子（萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)為芽管超過(guò)分生孢子直徑一半），計(jì)算分生孢子萌發(fā)率和抑制率。

萌發(fā)率=萌發(fā)的孢子總數(shù)/孢子總數(shù)×100%;

抑制率=（對(duì)照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對(duì)照孢子萌發(fā)率×100%。

1.2.4不同礦物源藥劑對(duì)離體枝條防效測(cè)定

參照翟慧者等和臧睿等的離體枝條接種方法。截取20cm長(zhǎng)的離體枝條，經(jīng)自來(lái)水沖洗干凈后用75%乙醇消毒15s，再經(jīng)無(wú)菌水沖洗3次，置于超凈工作臺(tái)晾干后用帶帽釘子的頂帽進(jìn)行燙傷。根據(jù)毒力測(cè)定結(jié)果，選擇抑制效果最好的濃度配制藥液，將藥液涂抹于傷口，并待晾干后將培養(yǎng)3d的蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌餅接種于傷口，每個(gè)處理接種3個(gè)枝條，每個(gè)枝條2個(gè)接種點(diǎn)，共計(jì)6個(gè)接種點(diǎn)，并以先涂抹無(wú)菌水后接種病原菌作為對(duì)照。25℃保濕培養(yǎng)10d后，采用十字交叉法測(cè)量病疤長(zhǎng)度，計(jì)算病疤面積。

病疤面積（cm²）=1/4×π×長(zhǎng)徑×短徑;

抑菌率=（對(duì)照病疤面積-處理病疤面積）/對(duì)照病疤面積×100%。

1.2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用Microsoft Excel 2007整理，采用DPS 7.5統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析及其差異顯著性檢驗(yàn)（Duncan氏新復(fù)極差法，P<0.05）。

2結(jié)果與分析

2.1不同礦物源農(nóng)藥對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌毒力效果

結(jié)果表明，供試礦物源農(nóng)藥對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌落生長(zhǎng)均具有顯著的抑制作用，其中70%腐植酸鈉GR對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌落生長(zhǎng)的抑制率最高。當(dāng)77%氫氧化銅WP、80%波爾多液WP、77%硫酸銅鈣WP、86.2%氧化亞銅WG和70%腐植酸鈉GR為最高質(zhì)量濃度257、400、385、172、5ug/mL時(shí)，接種培養(yǎng)第5天時(shí)其抑菌率分別為97.67%、98.94%、98.43%、100.00%和97.55%;當(dāng)分別為最低質(zhì)量濃度64、133、77、66、1mg/mL時(shí)，其抑菌率分另0為48.45%、41.44%、45.82%、46.93%和32.76%。同時(shí)，隨著不同藥劑濃度的升高，其抑菌活性均呈逐漸增加趨勢(shì)，接種培養(yǎng)第5天時(shí)其EC50分別為71.15、159.60、95.73、77.40和2.60ug/mL（表3）。

2.2不同礦物源藥劑對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用

結(jié)果表明，5種藥劑中70%腐植酸鈉GR對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)，處理36h后，其抑菌率為92.62%，EC50為1.38ug/mL;86.2%氧化亞銅WG和77%氫氧化銅WP次之，EC50分別為65.48、69.30ug/mE;77%硫酸銅鈣WP的抑制作用較差，EC50為102.98ug/mL;80%波爾多液WP對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用最差，EG50為145.41ug/mL（表4）。

2.3不同礦物源藥劑對(duì)接種病原菌的離體枝條防治效果

與對(duì)照相比，5種礦物源藥劑對(duì)接種蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的離體枝條具有不同程度的防治效果，其中70%腐植酸鈉GR的防治效果顯著高于其他藥劑，其病疤擴(kuò)展面積最小，為2.08cm²，且與對(duì)照差異顯著;86.2%氧化亞銅WG對(duì)接種病原菌的離體枝條保護(hù)作用次之，病疤面積為2.95cm²;80%波爾多液WP和77%硫酸銅鈣WP相比較低，病疤面積分別為7.16和6.74cm²;77%氫氧化銅WP在接菌后對(duì)離體枝條的保護(hù)作用最弱，病疤擴(kuò)展面積最大，病疤面積為8.80cm²（圖1和表5）。

3結(jié)論與討論

蘋(píng)果樹(shù)腐爛病長(zhǎng)期以來(lái)使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行防治，但由于抗藥性等問(wèn)題的產(chǎn)生，該病的防治出現(xiàn)了較大的困難，因此高效低毒的礦物源制劑產(chǎn)品成為蘋(píng)果生產(chǎn)發(fā)展的迫切需要。本試驗(yàn)對(duì)5種低毒的礦物源農(nóng)藥殺菌劑（77%氫氧化銅WP、80%波爾多液WP、77%硫酸銅鈣WP、86.2%氧化亞銅WG、70%腐植酸鈉GR）對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌菌落生長(zhǎng)、分生孢子萌發(fā)及其離體枝條防治效果等方面進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，供試的5種礦物源藥劑對(duì)該病菌菌落生長(zhǎng)均具有較強(qiáng)的抑制作用，其中，70%腐植酸鈉GR的抑菌效果最好，接種培養(yǎng)第5天時(shí)其最高抑菌率為97.55%，其EC50為2.60ug/mL。同時(shí)，隨著不同藥劑濃度的升高，其抑菌活性均呈逐漸增加的趨勢(shì)。韓盛等在對(duì)番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病的試驗(yàn)中也對(duì)氫氧化銅和波爾多液等礦物源農(nóng)藥進(jìn)行了相關(guān)研究，表明其對(duì)番茄細(xì)菌性斑點(diǎn)病具有很好的防治效果。

供試5種礦物源藥劑對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用測(cè)定結(jié)果表明，5種藥劑中70%腐植酸鈉GR對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用最強(qiáng)，處理36h后，其最高抑菌率為96.33%，ECso為1.38ug/mL。郭曉峰等通過(guò)測(cè)定5種化學(xué)藥劑對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用得出20g/L海藻酸AS對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)抑制效果最差，EG50為15.3820ug/mL。而本試驗(yàn)篩選出的具有高效低毒、低殘留、活性高，作用機(jī)理獨(dú)特，對(duì)環(huán)境友好，還具有加工劑型多和不污染農(nóng)產(chǎn)品等優(yōu)點(diǎn)的70%腐植酸鈉GR對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用僅次于化學(xué)農(nóng)藥海藻酸鈉的效果。

離體枝條防效測(cè)定表明，5種礦物源藥劑對(duì)接種蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的離體枝條具有不同程度的防治效果，其中70%腐植酸鈉GR對(duì)接種病原菌的離體枝條的防治效果顯著高于其他藥劑，其病疤擴(kuò)展面積最小，為2.08cm²，且與對(duì)照相比差異顯著，77%氫氧化銅WP在接菌后對(duì)離體枝條的保護(hù)作用最弱，病疤擴(kuò)展面積最大，病疤面積為8.80cm²。翟慧者等曾測(cè)定10種化學(xué)殺菌劑對(duì)離體枝條蘋(píng)果樹(shù)腐爛病的治療作用，其中3.315%甲硫·萘乙酸涂抹劑和6.5%菌毒清AS的防效均為87.5%，而本試驗(yàn)所篩選出的70%腐植酸鈉GR對(duì)該病的防效也達(dá)到了86.83%，與化學(xué)農(nóng)藥3.315%甲硫·萘乙酸涂抹劑和6.5%菌毒清AS的防治效果相差不大。本試驗(yàn)結(jié)果表明，70%腐植酸鈉GR對(duì)蘋(píng)果樹(shù)腐爛病菌的抑制作用最佳，對(duì)離體枝條的保護(hù)作用也最好，可作為主要推廣的防治藥劑。同時(shí)，采用平板培養(yǎng)法進(jìn)行的殺菌劑室內(nèi)抑菌效果僅代表藥劑與病原菌直接接觸時(shí)藥劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用，而藥劑在田問(wèn)對(duì)病害的防治效果不僅與藥劑對(duì)病原菌菌絲抑制有關(guān)，還與對(duì)孢子產(chǎn)生、孢子萌發(fā)、藥劑的特效性，施藥技術(shù)，施藥時(shí)期等因素有關(guān)。因此，在后續(xù)研究中，還需要與田問(wèn)小區(qū)藥效試驗(yàn)相結(jié)合，為有效防治蘋(píng)果樹(shù)腐爛病，進(jìn)行無(wú)公害生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。