基于miR-146α調(diào)控TLR4/NALP3信號(hào)通路探討痛風(fēng)立安膠囊的抗炎機(jī)制

【中圖分類號(hào)】R285.5 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【文章編號(hào)】1007-8517（2025）12-0030-05

DOI： 10.3969/j . issn.1007-8517.2025.12. zgmzmjyzz202512008

Abstract：ObjectiveThisstudyaims toinvestigate theanti-inflammatoryefectofTongfengLianCapsuleonacutegoutyarthritis anditsunderlying mechanisms.MethodsArandomizedcontroleddesignwasadopted，andSPF-graderatsweredividedintofour groups：model group，colchicine group，Tongfeng LianCapsulegroup，andnormalcontrolgroup.Theacutegoutyarthritis odelwas inducedby monosodiumurate（MSU）crystals，andthecoespondingdrugsornormalsalinewereadministered.Jointswellngindex was measured at 1h before modeling and at 2 h， ^4h ！ 6h ，and 12h after modeling.After 3 days，samples were collected to detect the levels of IL-1β ， TNF-α ，PGE2，TGF-β1，and 1L-8 in serum，as well as the expression levels of NALP3，TLR4，and NF- κB （20 p65 proteins andmiRNA-146αmRNA insynovial tssue.ResultsCompared with thenormalcontrolgroup，ratsinthemodel group showedsignificant inflammatoryresponses，with significantlyincreasedankle jointswellngrate，serum inflammatoryfactors （IL-1β TNF-α ，PGE2，TGF-β1，IL -8），and expression levels of NALP3，TLR4，and NF - κκκ p65 proteins in synovial tissue. The level of miRNA -146α in synovial tissue wassignificantly decreased.Compared with the model group，theankle joint swellingrate，serum inflammatory factors（ IL-1β ， TNF-α ，PGE2，TGF-β1，IL-8），and expresson levels of NALP3 and TLR4 proteins in synovial tissue were significantly reduced in the Tongfeng Lian Capsule group，while miRNA -146α in synovial tissue was significantly upregulated.There was no significant difference in NF- κB p65 protein expression. Conclusion Tongfeng Lian Capsule exhibits a significant anti-inflammatoryefectonAGAanditsmechanismmayinvolveinibitinginfammatoryresponsesthroughtheregulationofmiNA -146α and the TLR4/NALP3 signaling pathway.This providesa scientific basis fortheclinical aplicationof Tongfeng LianCapsule.

Key Words：Tongfeng Lian Capsule;Gouty Arthritis；Inflammatory

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎（goutyarthritis，GA，簡(jiǎn)稱痛風(fēng)）是一種常見的關(guān)節(jié)炎癥，其發(fā)病常伴隨不良的飲食習(xí)慣和生活方式1]，具有高發(fā)性、致殘性和反復(fù)性等特點(diǎn)。急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎（acutegoutyarthritis，AGA）發(fā)作時(shí)的疼痛非常劇烈，同時(shí)伴有關(guān)節(jié)僵硬、活動(dòng)受限等癥狀，會(huì)直接影響患者的肢體功能[2]。炎性浸潤(rùn)是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎重要病理改變， miR-146α 在TLR4和NALP3炎性體信號(hào)通路發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用，并與急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)生關(guān)系密切。研究[3]發(fā)現(xiàn) miR-146α 可能間接靶向NALP3炎癥小體以改善 IL-1β 的活化，減少痛風(fēng)的炎性反應(yīng)。因此研究通過 miR-146α 及TLR4/NALP3炎性體信號(hào)通路，降低炎癥水平，減少患者疼痛是痛風(fēng)治療藥物最緊迫的要求。

目前臨床常用的治療痛風(fēng)的抗炎藥物有秋水仙堿、非甾體抗炎藥和糖皮質(zhì)激素[4]。雖然這些藥物可以緩解局部疼痛癥狀，但是長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生很多不良反應(yīng)，輕則產(chǎn)生胃腸道反應(yīng)，嚴(yán)重則會(huì)導(dǎo)致腎功能衰竭[5]。根據(jù)痛風(fēng)的臨床表現(xiàn)，其可歸屬于中醫(yī)“歷節(jié)”“痹證”的范疇，中醫(yī)藥治療具有較好且安全的治療效果，其在降尿酸、抗炎和改善關(guān)節(jié)功能方面經(jīng)現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)更具有優(yōu)勢(shì)[6]

痛風(fēng)立安膠囊是廣西國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院風(fēng)濕病科李鳳珍主任醫(yī)師臨床總結(jié)的壯藥經(jīng)驗(yàn)方，由腫節(jié)風(fēng)、虎杖、忍冬藤、粉草、車前草、徐長(zhǎng)卿、透骨草、甘草組成，通龍路火路之氣機(jī)，具有清熱毒、除濕毒、祛風(fēng)毒、消腫痛等功效。多年臨床應(yīng)用發(fā)現(xiàn)，其對(duì)痛風(fēng)急性發(fā)作期的關(guān)節(jié)疼痛、腫脹及活動(dòng)受限等癥均有明顯改善[7]，但其具體作用機(jī)制尚未明晰?；诖?，本研究利用動(dòng)物模型評(píng)價(jià)痛風(fēng)立安膠囊的抗炎作用及其機(jī)制，以更好地促進(jìn)臨床應(yīng)用。

1材料

1.1實(shí)驗(yàn)儀器905-ULTS超低溫冰箱（美國(guó)賽默飛世爾科技公司），高速離心機(jī)（SIGMA），熒光定量PCR（德國(guó)ROCHE公司），微量核酸蛋白分析儀（美國(guó)熱電公司），MK3型酶標(biāo)儀（美國(guó)賽默飛世爾科技公司），蛋白掃膜儀（美國(guó)Proteinsimple公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)藥品與試劑痛風(fēng)立安膠囊（院內(nèi)制劑，批文號(hào)：桂藥劑字M20100004），由廣西國(guó)際壯醫(yī)醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)提供。按人與動(dòng)物體質(zhì)量折算等效劑量（成人每日12粒 。秋水仙堿片（云南植物藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H53020166， 0.5mg 片）用蒸餾水配制成秋水仙堿混懸液，備用。MSU混懸液的制備，稱取微晶型MSU 2500mg ，用無菌生理鹽水配制成 25mg/ mL的尿酸鈉懸濁液， 4^°C 冰箱保存，用前搖勻。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性 SPF級(jí)SD鼠40只，體質(zhì)量（ 200±20 ）g，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物護(hù)理和使用指南，動(dòng)物分組分籠，飼養(yǎng)環(huán)境溫度（ 22±2）^eC ，相對(duì)濕度為（50±5）% ， 12h/12h 明暗周期，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由攝食飲水。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1動(dòng)物造模、分組和給藥將40只SPF大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為造模組30只和正常組10只。建立經(jīng)典痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型模型制備參照Coderre造模方法：固定大鼠，受試大鼠麻醉后選右后足踝關(guān)節(jié)外側(cè)后方為穿刺點(diǎn)，針口斜面朝前上方與腔骨成 45^° 夾角刺人踝關(guān)節(jié)腔，以6號(hào)注射針向關(guān)節(jié)腔一次性注入 25mg/mL MSU混懸液 0.2mL ，正常組大鼠向關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射0.2mL 生理鹽水。于造模后 ⁴h 進(jìn)行模型鑒定，注射部位出現(xiàn)明顯腫脹表示建模成功。成模大鼠隨機(jī)分為模型組、秋水仙堿組和痛風(fēng)立安膠囊組，每組10只。正常對(duì)照組和模型組大鼠以同體積0.9% 氯化鈉溶液灌胃。

參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》人與大鼠體表面積換算法，按成人每日服用痛風(fēng)立安膠囊劑量 4.8g 得痛風(fēng)立安膠囊組大鼠每日給藥量分別為 0.432g/ kg，按2020年痛風(fēng)指南建議成人秋水仙堿每日治療藥量 2mg ，得秋水仙堿組每日大鼠給藥量為0.18mg/kg ，正常組和模型組給予等量生理鹽水灌胃，每日2次，連續(xù) 3d 。

2.2大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹率測(cè)量各組大鼠在造模前以游標(biāo)卡尺測(cè)量右后足踝關(guān)節(jié)下 0.5mm 處的直徑，造模后 ^2h ！ ^4h ！ 6h 、 ^12h ，在原部位以相同方法測(cè)量，比較致炎前后踝關(guān)節(jié)腫脹情況。關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)分別于造模前 ¹h 、造模后 7 、6h、 ^12h ，采用縛線法于大鼠受試膝關(guān)節(jié)同一部位測(cè)量周徑，并計(jì)算各階段腫脹指數(shù)。

2.3大鼠炎癥細(xì)胞因子表達(dá)檢測(cè)大鼠腹主動(dòng)脈取血，ELISA法檢測(cè)血清 IL-1β 、TNF- ∝ 、PGE2、TGF-β1、IL-8的含量。

2.4大鼠炎癥信號(hào)軸相關(guān)蛋白檢測(cè)WB檢測(cè)大鼠滑膜組織中TLR4、 NF-κB 、NALP3蛋白表達(dá)量的差異；RT-qPCR 檢測(cè)滑膜miRNA-146amRNA表達(dá)量。GAPDH：F：GGCACAGTCAAGGCT-GAGAATG，R：ATGGTGGTGAAGACGCCAGTA;miR- 146α：F： CTGTGCAAGCCAAATTCCCT，R：CAAAGTCGTCCGTGGGTTCT。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，以（ ）表示，非正態(tài)分布采用“中位數(shù)和四分位間距”描述；符合正態(tài)分布兩組間比較用 χ_t 檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，兩組多個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，非正態(tài)分布采用秩和檢驗(yàn)，以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1關(guān)節(jié)腫脹度結(jié)果各組大鼠在造模后踝關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)都有不同程度的增加，其中，模型組增加較為明顯，造模 ^2h 后，各組大鼠踝關(guān)節(jié)與空白組相比腫脹指數(shù)明顯增大，造模 4h，6h，12h 時(shí)，痛風(fēng)立安膠囊組與秋水仙堿組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)均減小。與模型組相比，秋水仙堿組關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)在 ^2h ！ ^4h 、 6h 人 ^12h 降低（ Plt;0.05） ；痛風(fēng)立安膠囊組在 ^2h ！ ^4h ！ ^6h 、 ^12h 降低（ Plt; 0.05）。與秋水仙堿組相比，痛風(fēng)立安膠囊組關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)在 ^2h 、 ^12h 降低不明顯（ Pgt; 0.05）。見表1、如圖1所示。

表1大鼠各組各時(shí)段踝關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)表

注：與空白組比較， Plt;0.05 ；與模型組比較， Plt;0.05 。

圖1各組大鼠12h關(guān)節(jié)腫脹外觀情況圖

3.2大鼠炎癥細(xì)胞因子比較與空白組比較，秋水仙堿組、痛風(fēng)立安膠囊組血清中 IL-1β 、TNF-α 、PGE2、TGF-β1、IL-8含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ）；與模型組比較，秋水仙堿組、痛風(fēng)立安膠囊組有差異（ Plt;0.05 ）；與秋水組比較，痛風(fēng)立安中膠囊組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt; 0.05）。見表2。

表2大鼠各組炎癥細(xì)胞因子含量比較表

注：與空白組比較， ¹Plt;0.05 ；與模型組比較， Plt;0.05 ；與秋水仙堿組比較， Plt;0.05 。

3.3大鼠炎癥信號(hào)軸相關(guān)蛋白檢測(cè)分析大鼠滑膜組織中TLR4、 NF-κB p65、NALP3表達(dá)量的差異，模型組中TLR4、 NF-κB p65、NALP3蛋白表達(dá)量較空白組升高（ Plt;0.05 ），秋水仙堿組、痛風(fēng)立安組NALP3、TLR4蛋白表達(dá)較模型組降低（ Plt;0.05 ， Plt;0.01 ），并且秋水仙堿組與痛風(fēng)立安組未顯示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ Pgt;0.05 ），模型組NF-κBp65 表達(dá)較空白組升高，但在秋水仙堿組、痛風(fēng)立安組與模型組比較未顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ Pgt; 0.05），提示痛風(fēng)立安對(duì)炎癥信號(hào)軸相關(guān)蛋白調(diào)控能力與秋水仙堿相當(dāng)，這可能主要與調(diào)控TLR4、NALP3表達(dá)有關(guān)。如圖2。

圖2大鼠炎癥信號(hào)軸相關(guān)蛋白表達(dá)情況圖

注：圖中為3次大鼠滑膜組織WB條帶圖，并對(duì)各自目的條帶進(jìn)行灰度值分析，結(jié)果以柱狀圖顯示。 ^*Plt;0.05 ， ^**Plt;0.01 。

3.4大鼠 miR146-α 表達(dá)qPCR檢測(cè)滑膜組織中miRNA -146α 表達(dá)量，模型組中miRNA -146α 表達(dá)量較空白組下降（ Plt;0.05. ），秋水仙堿組、痛風(fēng)立安組大鼠miRNA -146α 表達(dá)較模型組升高，兩組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ Plt;0.05， 。見表3。

表3各組大鼠滑膜中 miR-146α 表達(dá)量結(jié)果表

注：與空白組比較， Plt;0.05 ；與模型組比較，2） Plt; 0.05；與秋水仙堿組比較， ^3）Plt;0.05 。

4討論

痛風(fēng)是一種尿酸過度沉積導(dǎo)致炎癥急劇增加的疾病，其臨床表現(xiàn)出的關(guān)節(jié)周圍“紅、腫、熱、痛”與炎癥因子的分泌密切相關(guān)?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)miRNA對(duì)于正常細(xì)胞的基因調(diào)控至關(guān)重要，其在痛風(fēng)的進(jìn)展中也起著重要作用。miRNA介導(dǎo)的Toll樣受體4（Toll-likeReceptors4，TLR4）和Nod 樣受體蛋白-3（Nod-likereceptorpyrin do-main3，NLRP3）炎性體信號(hào)通路是目前研究中發(fā)現(xiàn)的兩條可以調(diào)控炎癥因子的信號(hào)通路。miR-146α 是miRNA的一種亞型，在炎癥信號(hào)傳導(dǎo)途徑中起負(fù)反饋?zhàn)饔肹9]。TLR4是一種模式識(shí)別受體，可以激活核轉(zhuǎn)錄因子核轉(zhuǎn)錄因子- κB （nucleartranscription factor - κB ， NF-κB[10] ，繼而增加下游一系列炎癥因子的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，最終產(chǎn)生級(jí)聯(lián)放大的炎癥反應(yīng)。NLRP3則被報(bào)道在炎癥因子通路上具有監(jiān)管功能，且 miR-146α 的缺乏能上調(diào)NALP3炎性小體促進(jìn) IL-1β 的激活[1]

現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)， miR-146α 具有轉(zhuǎn)錄中斷功能，在由MSU晶體存在引發(fā)的急性炎癥反應(yīng)期間表達(dá)下降。 miR-146αKO 小鼠比WT小鼠患痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎更嚴(yán)重，NALP3、 IL-β 小 TNF-α 等促炎因子顯著增加。也有研究[3提到 PGE2、TGF－β1、IL-8也在痛風(fēng)發(fā)作中扮演重要角色。因此，對(duì)于干預(yù)痛風(fēng)炎癥反應(yīng)，控制關(guān)節(jié)癥狀具有現(xiàn)實(shí)性和迫切性。

中醫(yī)認(rèn)為痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制中“濕、熱、瘀”起著重要作用?！皾瘛笨勺璧K氣血流通，導(dǎo)致關(guān)節(jié)腫脹疼痛；“熱”可煎灼津液，表現(xiàn)為“紅，腫，熱，痛”等癥狀；最終都可轉(zhuǎn)化為“瘀”，血阻滯，不通則痛，可導(dǎo)致痛風(fēng)患者關(guān)節(jié)疼痛[12]。痛風(fēng)立安膠囊是臨床中常用于治療痛風(fēng)的驗(yàn)方，具有清熱利濕、祛風(fēng)通絡(luò)的功效。適用于關(guān)節(jié)疼痛、紅腫灼熱的痛風(fēng)類型。本研究中發(fā)現(xiàn)，大鼠在痛風(fēng)造模后關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)腔內(nèi)可見大量拉絲狀淡黃色積液，表明痛風(fēng)模型成功。秋水仙堿組（陽(yáng)性對(duì)照），痛風(fēng)立安膠囊組關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)在造模成功后 2h 、4h、 6h 、 12h 相較于模型組明顯降低，表明痛風(fēng)立安膠囊對(duì)于痛風(fēng)的治療效果非常明顯。同時(shí)，血清中炎癥細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α、PGE2、TGF-β1、IL-8在痛風(fēng)立安膠囊治療下明顯降低。這些表明痛風(fēng)立安膠囊可以明顯降低急性痛風(fēng)進(jìn)展中的炎癥因子，減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)立安膠囊治療組大鼠TLR4、NALP3蛋白表達(dá)降低，血清中 miRNA-146α 表達(dá)升高，這提示痛風(fēng)立安膠囊可能通過調(diào)節(jié) miR-146α 及 TLR4/NALP3信號(hào)通路活性改善痛風(fēng)炎性反應(yīng)。

據(jù)此，基于 miR-146α 調(diào)控TLR4/NALP3信號(hào)通路的理論基礎(chǔ)，筆者進(jìn)一步開展痛風(fēng)立安膠囊對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的干預(yù)研究，發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)立安膠囊可以上調(diào) miR-146α 表達(dá)，降低I-1β 、TNF - α 、PGE2、TGF-β1、IL-8含量，抑制TLR4、NALP3表達(dá)，為痛風(fēng)立安膠囊的臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。如圖3所示。

圖3痛風(fēng)立安治療痛風(fēng)的可能機(jī)制圖

參考文獻(xiàn)

[1］劉維．痛風(fēng)及高尿酸血癥中西醫(yī)結(jié)合診療指南［J].中醫(yī)雜志，2023，64（1）：98-106.

[2]CHOWALLOORP，RAYMONDWD，CHEAHP，etal.Theburdenofsubclinicalintra-articularinflammationingout[J].IntJRheumDis，2020，23（5）：661-668.

[3]ZHANGQB，QINGYF，YINCC，etal.MicewithmiR-146a deficiency develop severe gouty arthritis via dysreg-ulationofTRAF6，IRAK1andNALP3inflammasome[J]．ArthritisResTher，2018，20（1）：45.

[4］KELLERSF，MANDELL BF.Managementand cure ofgouty arthritis[J].MedClin North Am，2O21，105（2）：297-310.

[5］王雨，林志健，張冰．尿酸代謝紊亂相關(guān)疾病的現(xiàn)代認(rèn)知及中醫(yī)藥防治進(jìn)展［J]．中國(guó)中藥雜志，2024，49（12）：3160-3167.

[6］宋倩，劉健，忻凌，等．基于關(guān)聯(lián)規(guī)則挖掘健脾類中藥對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者免疫、炎癥指標(biāo)的影響［J].遼寧中醫(yī)雜志，2017，11（44）：2248-2252，2461.

[7］鄧?guó)P云，王建芳，羅試計(jì)．壯藥痛風(fēng)立安膠囊治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的臨床觀察［J]．四川中醫(yī)，2013，31（2）：95-96.

[8]PAPANAGNOU P，STIVAROU T，TSIRONI M.TheRoleof miRNAs in Common Inflammatory Arthropathies：Osteoarthritis and Gouty Arthritis[J].Biomolecules，2016，6（4）：44-65.

[9]WESTC，MCDERMOTTMF.Effects ofmicroRNA -146a on the proliferation and apoptosis of human osteo-chondrocytesbytargetingTRAF6throughtheNF-kappaBsignallingpathway［J].BiosciRep，2O17，37（4）：BSR20170180.

[10]RUI-MINMA，ZHANGGJ，KANGXX.Advancesinstudies on the relationship between Toll like receptors andautoimmunediseases[J].JCapital Med Univ，2012；33 （2）：177-181.

[11］ZHANGQB，QINGYF，YINCC，et al.MicewithmiR-146a deficiencydevelop severe gouty arthritisviadysregulation ofTRAF6，IRAK1 and NALP3 inflamma-some[J].ArthritisResTher，2018；20（1）：45.

[12］方寧遠(yuǎn)，呂力為，呂曉希，等．中國(guó)高尿酸血癥相關(guān)疾病診療多學(xué)科專家共識(shí)（2023年版）［J]．中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志，2023，43（6）：461.

（收稿日期：2024-09-10編輯：陶希睿）