司美格魯肽在蛋氨酸膽堿缺乏飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝病大鼠肝臟脂質(zhì)代謝中的研究

【摘要】背景司美格魯肽作為胰高血糖素樣肽1受體激動(dòng)劑之一，對(duì)于緩解非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）的進(jìn)展有很大的潛力，但是作用機(jī)制尚未明確。目的研究司美格魯肽對(duì)肝臟脂質(zhì)代謝的影響，進(jìn)一步探究NAFLD的發(fā)病機(jī)制及幫助臨床做出診斷和治療。方法2022年9—11月選取30只SPF級(jí)5＼～8周齡雄性SD大鼠，體質(zhì)量（ 180±20 ） ，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白組、模型組和干預(yù)組，每組10只。制備NAFLD大鼠模型，干預(yù)組大鼠給予司美格魯肽 ，溶解于 0.9% 氯化鈉溶液皮下注射，空白組和模型組大鼠皮下注射等量 0.9% 氯化鈉溶液。觀察大鼠一般情況，蘇木素－伊紅（HE）染色和油紅O染色觀察大鼠肝組織病變情況，檢測大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平，檢測大鼠肝組織三酰甘油（TG）水平。反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC1）、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 1α （ CPT1α ）、乙酰輔酶A氧化酶（AOX）、脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白36（FAT/CD36）、肝臟脂肪酸結(jié)合蛋白（LFABP）、載脂蛋白B（ApoB）、微粒體三酰甘油轉(zhuǎn)移蛋白（MTTP）mRNA表達(dá)量。蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)（Westerm blottng）檢測FAT/CD36蛋白含量。結(jié)果實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物均無死亡，空白組大鼠毛發(fā)柔順、有光澤、精神狀態(tài)良好，模型組和干預(yù)組大鼠隨喂養(yǎng)時(shí)間增長，表現(xiàn)為體質(zhì)量明顯減輕，毛發(fā)紊亂、無光澤，活動(dòng)減弱，精神萎靡。干預(yù)結(jié)束后模型組體質(zhì)量低于空白組，干預(yù)組高于模型組（ Plt;0.05 ）。模型組肝臟質(zhì)量高于空白組，干預(yù)組低于模型組（ Plt;0.05 ）。模型組ALT、AST、TG水平高于空白組，干預(yù)組ALT、AST、TG水平低于模型組（ Plt;0.05 ）。模型組CPT1 ∝ 、AOX、LFABP、ApoB、MTTP低于空白組，干預(yù)組FAT/CD36低于模型組（ Plt;0.05 ）。模型組FAT/CD36高于空白組，干預(yù)組低于模型組（ Plt;0.05 ）。結(jié)論司美格魯肽緩解了NAFLD大鼠肝臟的脂質(zhì)沉積，這可能與FAT/CD36表達(dá)下調(diào)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】非酒精性脂肪性肝?。凰久栏耵旊?；脂質(zhì)代謝；脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白36

【中圖分類號(hào)】R575.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0534

【Abstract】BackgroundSemaglutide，asone of the glucagon-like peptide-1（GLP-1）receptor agonists，hassignificantpotentialforallviatingtheprogressonofnon-alcoholicfatty liverdisease（NAFLD）.However，itsmechanismof actionremains unclear.ObjectiveTo investigatetheefectofsemaglutideonhepatic lipid metabolism，further explore the pathogenesisof NAFLDand helpclinical diagnosis andtreatment.MethodsBetween September and November 2022，30 SPFgrade male SD rats，aged 5-8 weeks with a body weight of （ 180±20 ） g ，were acclimatized for one week and then randomly divided into three groups ofcontrol，model，and intervention，with1Orats in each.TheNAFLDrat model was prepared， and the intervention group received semaglutide at 40μg/kg dissolved in 0.9% saline solution subcutaneously. The control and model groups received an equivalent volume of 0.9% saline subcutaneously. The general condition of the rats was observed，with hematoxylin-eosin（HE）stainingandOilRedOstaining to examineliver tisuelesions.Serumlevelsof alanineaminotransferase （ALT），aspartate aminotransferase（AST），and liver tisse triglyceride（TG）levels were measured.Real-time polymerase chain reaction（RT-PCR）was used todetectmRNA expresionoffatyacid synthase（FAS），acetyl-CoAcarboxylase1（ACC1）， carnitine palmitoyltransferase 1α （ CPT1α ），acyl-CoA oxidase（AOX），fatty acid transport protein 36（FAT/CD36）， liverfattyacid-binding protein（LFABP），apolipoprotein B（ApoB），and microsomal riglyceride transferprotein（MTTP）. Western bloting assaywas used to detectFAT/CD36 protein levels.ResultsThere was no death of animals in allgroups during the experimentalperiod，andtheratsinthecontrolgroupexhibitedsmoothand glossyfurwithgoodspirit，whiletheratsnthe modelgroupandintervention groupshowedasignificantreductionin body weight，disorganizedand lusterless hair，reduced activitynddepressedspiritwiththeincreaseinfeedingtime.Thebodyweightofthemodelgroupwaslowerthanthatofthecontrol group atthe end of the intervention，and the intervention group was higher than that of the model group （ Plt;0.05 ）. The liver weight of the model group was higher than the control group，and lower in the intervention group （ Plt;0.05 ） . The levels of ALT， AST，and TG werehigher thanthose inthe model group than inthecontrol group，andlowerin the intervention group（ Plt;0.05 ）. The levels of CPT1 α ，AOX，LFABP，ApoB，and MTTP were lower in the model group than in the control group，and the level of FAT/CD36 was lower in the intervention group（ Plt;0.05 ）.The model group had higher levels of FAT/CD36 than the control group，and the intervention group had lower levels than the model group （ Plt;0.05 ）.Conclusion Semaglutide alleviated hepatic lipid deposition in NAFLD rats，potentially related to the downregulation of FAT/CD36 expression.

【Key words】 Nonalcoholic fatty liver disease；Semaglutide；Lipid metabolism；Fatty acid translocase36

非酒精性脂肪性肝?。╪onalcoholicfattyliverdisease，NAFLD）是指通過組織學(xué)或高質(zhì)量影像學(xué)檢查確認(rèn)的除外過量飲酒以及其他明確病因所導(dǎo)致的肝細(xì)胞發(fā)生 5% 以上的脂肪病變[1-3]。非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver，NAFL）是該病的早期階段[4]最新流行病學(xué)調(diào)查顯示全球有17億NAFLD患者［5]，并且以每年120萬的速度增長[6]。隨著生活水平提高和病毒性肝炎研究的不斷深入，NAFLD已取代病毒性肝炎成為臨床上最常見的慢性肝病[7]。研究發(fā)現(xiàn)全球約 40% 的NAFLD患者BMI并未達(dá)到肥胖標(biāo)準(zhǔn)，甚至有 19.2% 的患者BMI在參考范圍[8-9]。如果不積極進(jìn)行及時(shí)的干預(yù)，將會(huì)導(dǎo)致脂肪型肝炎（NASH）、肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌[10]。盡管NAFLD的發(fā)病機(jī)制研究、治療靶標(biāo)的確定和藥物開發(fā)的推進(jìn)取得了長足進(jìn)展，但仍面臨著重大挑戰(zhàn)，自前尚無批準(zhǔn)用于該疾病的藥物，這將給家庭以及醫(yī)療帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，對(duì)人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[1]

胰高血糖素樣肽1（glucagon-likepeptide1，GLP-1）是一種小腸L細(xì)胞由進(jìn)食刺激分泌的小分子肽物質(zhì)[12]，其可根據(jù)患者的血糖水平影響胰島 β 細(xì)胞分泌胰島素以及胰島 ∝ 細(xì)胞分泌胰高血糖素「13］，進(jìn)而控制人體血糖水平的動(dòng)態(tài)平衡，另外還可以降血脂[14]、改善胰島素抵抗、肝功能、肝臟氧化應(yīng)激和炎癥損傷，通過調(diào)控其水平可使心血管獲益[15]。司美格魯肽是第二代GLP-1類似物，與GLP-1有 94% 的同源性， t_1/2 為7 d[16]，生物利用度為 89% 。研究表明，司美格魯肽治療可顯著改善患有NAFL的糖尿病患者的肝臟組織學(xué)和肝酶水平[17]，因此司美格魯肽具有治療NAFLD的潛力，然而司美格魯肽對(duì)非糖尿病患者肝臟脂質(zhì)沉積的作用機(jī)制尚不清楚「18]。本研究通過飼喂蛋氨酸膽堿缺乏（methionine-choline-deficientdiet，MCD）飼料建立早期NAFLD大鼠的疾病模型，該模型符合臨床中非糖尿病且BMI正常的NAFLD患者群體，通過檢測空白組、模型組及干預(yù)組中脂質(zhì)合成、 β 氧化、轉(zhuǎn)運(yùn)以及脂肪酸攝取途中關(guān)鍵酶的含量變化水平，探討司美格魯肽能否緩解NAFLD的發(fā)生、發(fā)展以及其作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 研究時(shí)間：2022年9—11月。1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：30只SPF級(jí)5＼～8周齡雄性SD大鼠，體質(zhì)量（ 180±20 ） g ，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司（質(zhì)量合格證編號(hào)：N0.110011220108748131）。在中心實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房喂養(yǎng)，環(huán)境溫度 20～22% ，相對(duì)室內(nèi)濕度 50% ，飼養(yǎng)期間自由攝食、飲水。本研究獲得河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)：IACUC-Hebeu-2023-0008）。

1.1.3主要儀器設(shè)備：Sigma3-30KS離心機(jī)（北京五洲東方科技發(fā)展有限公司）、DYY-6C型電泳儀（北京六一生物科技有限公司）、SCILOGEX搖床（上海雅科生物科技有限公司）、高通量冷凍研磨儀（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司Xinyi-24N）、實(shí)時(shí)熒光PCR儀器（賽默飛世爾科技公司）、 -80°C 冰箱（青島海爾公司）、iMark酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器有限公司）顯影儀（cytiva）。1.1.4主要試劑：司美格魯肽注射液購自丹麥諾和諾德公司（批號(hào)：202202ASS1）； 0.9% 氯化鈉溶液購自石家莊四藥有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：2207012002）；蛋白提取試劑盒（雅酶公司，批號(hào)：016C2020）高純總RNA快速提取試劑盒（北京百泰克生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：B021007022）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（賽默飛世爾科技有限公司（批號(hào)：91254516）；qPCRSuperMix試劑盒（北京全式金有限公司（批號(hào)：P41013）；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、三酰甘油（TG）含量檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所（批號(hào)：20221014、20221015、20221017）；脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白36（FAT/CD36）ab133922抗體（美國abcam有限公司，批號(hào)：1002656-13）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1NAFLD大鼠模型制備：大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白組、模型組和干預(yù)組，每組10只?？瞻捉M給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組和干預(yù)組給予MCD飼料喂養(yǎng)，時(shí)間為 30d 。

1.2.2干預(yù)方法：大鼠造模期間每3天稱重1次后進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)組大鼠給予司美格魯肽 40μg/kg ，溶解于0.9% 氯化鈉溶液皮下注射，空白組和模型組大鼠皮下注射等量 0.9% 氯化鈉溶液。

1.2.3標(biāo)本取材：大鼠干預(yù)30d后禁食 6h ，二氧化碳麻醉機(jī)麻醉，抽取下腔靜脈血液，置于離心管沉淀 20min 后，以 4°C ， 3500r/min 離心 20min 分離血清，取上層液體，凍存用于檢測血清AST、ALT水平。肝臟拍照，觀察顏色、質(zhì)地，將肝臟完整取下后稱重，留取部分肝組織固定液用于蘇木素-伊紅（HE）染色和油紅O染色，其余肝組織置于 -80°C 冰箱保存用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟1.2.4組織切片染色：取固定好的肝組織，經(jīng)過石蠟包埋切片、脫蠟、水化，放入蘇木素染液中 5min ，自來水沖洗后依次放入不同濃度梯度乙醇后脫水，伊紅染色后放入無水乙醇進(jìn)行脫水封片，顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。油紅0染色時(shí)將冰凍切片恢復(fù)至室溫，固定 15min 后晾干置入油紅中靜置過夜、背景分化、蘇木素染色后在顯微鏡下觀察結(jié)果。1.2.5血清ALT、AST水平檢測：根據(jù)試劑盒繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，大鼠待測血清分別放入對(duì)照孔和測定孔，混勻孵育在酶標(biāo)儀中讀取吸光度值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算AST、ALT水平。

1.2.6肝組織TG水平檢測：準(zhǔn)確稱取肝臟組織重量，按照重量（g）：體積 （mL）τ₌₁：9 的比例加入無水乙醇，冰水浴條件下機(jī)械勻漿， 2500r/min 離心 10min ，取上清液，根據(jù)說明書步驟操作加入蒸餾水、校準(zhǔn)品、樣本液和樣本，孵育箱孵育后在 510nm 酶標(biāo)儀中讀取吸光度值代人標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算TG含量。

1.2.7反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC1）、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶 1∝（CPT1α ）乙酰輔酶A氧化酶（AOX）脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白36（FAT/CD36）、肝臟脂肪酸結(jié)合蛋白（LFABP）、載脂蛋白B（ApoB）、微粒體三酰甘油轉(zhuǎn)移蛋白（MTTP）mRNA表達(dá)量：取各組肝組織加入1mL 裂解液冰浴勻漿，提取總RNA檢測濃度，引物序列見表1。逆轉(zhuǎn)錄條件和方法如下。在置于冰上的無菌無核酸的PCR管中按順序加入總 RNA 0.5μg ，oligo（ DT）18引物 1μL ，補(bǔ)充無核酸酶的高純水至 12μL 模板和引物的混合液輕輕混勻，短暫離心， 65^°C 孵育5min ，，冰上冷卻，離心，在置于冰上冷卻后加入 4μL5× Reaction Buffer、 1μL RNA 酶抑制劑、 2μL10mmol/L dNTPMix和逆轉(zhuǎn)錄酶 1μL ，使總體積為 20μL ，輕輕混勻，短暫離心， 42°C 孵育 60min ， 70^qC 加熱 5min 終止反應(yīng)。RT-PCR擴(kuò)增條件方法如下。加入SYBRGreen Master Mix 10μL ， dddH₂O₅μL， CDNA 4μL， Primer 1μL ， 95^°C 預(yù)變性 1min 、 95^°C 變性 5s 、 60^°C 退火延伸數(shù)據(jù)采集 15s 。共40個(gè)循環(huán)。采用 2^-ΔΔGt 法進(jìn)行數(shù)據(jù)的相對(duì)定量分析。

1.2.8蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)（Westernblotting）檢測FAT/CD36蛋白含量：每組取4只大鼠肝組織，加入 200μL 變性裂解液，冷凍研磨機(jī)機(jī)械勻漿后蓋上純化柱蓋子室溫孵育 2min ，置于 4‰ ， 16000r/min ，離心 2min ，提取總蛋白，參照試劑盒說明書進(jìn)行操作，酶標(biāo)儀檢測蛋白質(zhì)濃度，計(jì)算上樣體積。采用 7.5% 十二烷基硫酸鈉－聚丙烯酰胺分離膠對(duì)蛋白進(jìn)行電泳，放入 20mL 脫脂奶粉中搖床封閉1h后TBST洗膜3次， 10min/ 次，加入FAT/CD36（ 1：1000 ）一抗 4^°C 冰箱 16h ；取出后TBST溶液洗膜3次， 10min/ 次，然后加入抗兔二抗（1：5000），室溫避光置于搖床孵育 ^1h ，在TBST溶液中洗膜5次， 5min/ 次，將膜放入添加超敏ECL試劑的避光盒子中孵育 3min 后在自動(dòng)曝光機(jī)上顯影；Image J軟件對(duì)條帶進(jìn)行灰度分析，采用 β 肌動(dòng)蛋白為內(nèi)參照（ β -actin），利用目的蛋白和內(nèi)參照蛋白灰度值之比來反映目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（ ）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用 ΔISD-t 檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料以 M （ P₂₅ ， P₇₅ ）表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis H 檢驗(yàn)。以 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1大鼠一般狀況

實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物均無死亡，空白組大鼠毛發(fā)柔順、有光澤、精神狀態(tài)良好，模型組和干預(yù)組大鼠隨喂養(yǎng)時(shí)間增長，表現(xiàn)為體質(zhì)量明顯減輕，毛發(fā)紊亂、無光澤，活動(dòng)減弱，精神萎靡。干預(yù)結(jié)束后模型組體質(zhì)量低于空白組，干預(yù)組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表2。

2.2大鼠肝臟形態(tài)及組織學(xué)改變結(jié)果

干預(yù)結(jié)束后空白組肝臟色澤紅潤，質(zhì)地細(xì)膩，具有韌性；模型組肝臟發(fā)白，表面明顯沉積脂質(zhì)顆粒，質(zhì)地脆易出血；干預(yù)組的肝臟色澤和質(zhì)地均明顯改善。大鼠肝臟形態(tài)表現(xiàn)見圖1。模型組肝臟質(zhì)量高于空白組，干預(yù)組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表2。

油紅0染色結(jié)果顯示，空白組肝組織結(jié)構(gòu)清晰，排列整齊，未發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)沉積；模型組可觀察到大量的紅染脂滴，部分融合成片；干預(yù)組中紅染脂滴數(shù)量較模型組降低。HE染色結(jié)果顯示，空白組肝細(xì)胞呈多邊形結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核位于中央，胞質(zhì)分布均勻，未見脂滴沉積；模型組肝細(xì)胞腫脹，可見大小不一的脂滴空泡，細(xì)胞核位于邊緣，細(xì)胞邊界模糊不清；干預(yù)組的脂滴空泡較模型組減少。油紅O染色與HE染色結(jié)果見圖2＼～3。

2.3 大鼠血清ALT、AST、TG水平

3組大鼠血清ALT、AST水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），其中模型組ALT、AST水平高于空白組，干預(yù)組ALT、AST水平低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表3。

2.4大鼠肝組織TG水平

3組大鼠肝組織TG水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），其中模型組高于空白組，干預(yù)組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表4。

2.5大鼠肝組織FAS、ACC1、CPT1 ∝ 、AOX、FAT/CD36、LFABP、ApoB、MTTPmRNA表達(dá)結(jié)果

3組大鼠肝組織FAS、ACC1、 CPT1α 、 AOX 、FAT/CD36、LFABP、ApoB、MTTPmRNA相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ）。模型組 CPT1α ！AOX、LFABP、ApoB、MTTP低于空白組，模型組FAT/CD36高于空白組，干預(yù)組FAT/CD36低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表5。

2.6大鼠肝組織FAT/CD36表達(dá)水平

3組大鼠肝組織FAT/CD36表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），其中模型組高于空白組，干預(yù)組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ Plt;0.05 ），見表6、圖4。

3討論

與多系統(tǒng)疾病相關(guān)的NAFLD正隨著生活水平的提高，發(fā)病率以不同程度上升，且出現(xiàn)逐漸低齡化的趨勢[19-20]，其增加了肝硬化、心腦血管疾病、慢性腎臟疾病以及惡性腫瘤發(fā)病和死亡風(fēng)險(xiǎn)[21]。NAFLD的發(fā)病機(jī)制已由大多數(shù)學(xué)者所認(rèn)可的“二次打擊”學(xué)說過渡為“多重打擊”學(xué)說，即在胰島素抵抗、高脂飲食以及肥胖的基礎(chǔ)上發(fā)生的脂質(zhì)沉積，而后發(fā)生氧化反應(yīng)和炎癥的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，會(huì)引起疾病的進(jìn)一步發(fā)展[22]。除此之外線粒體功能異常、腸道微生物失調(diào)、細(xì)胞凋亡、炎癥因子和遺傳易感性也會(huì)參與進(jìn)來［23]。脂質(zhì)代謝紊亂是NAFLD發(fā)生的基礎(chǔ)和關(guān)鍵［24］，維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)主要通過4種代謝途徑：脂肪從頭合成、脂肪酸氧化、脂質(zhì)攝取與以極低密度脂蛋白（VLDL）的形式釋放入血，肝臟脂質(zhì)的沉積和NAFLD的發(fā)生、發(fā)展均可由各種異常途徑所致［25］。既往研究也發(fā)現(xiàn)當(dāng)脂質(zhì)代謝出現(xiàn)紊亂時(shí)，過量的脂肪酸會(huì)導(dǎo)致FAT/CD36對(duì)脂肪酸的吸收增加，同時(shí)β氧化作用也會(huì)增強(qiáng)[2，26]

MCD飼喂4周后可導(dǎo)致動(dòng)物VLDL的合成、分泌降低及線粒體 β 氧化酶活性降低，TG快速大量積累于肝細(xì)胞中，引起肝細(xì)胞脂肪變性而形成“第一次打擊”，并使肝臟對(duì)其他損傷敏感性提高，同時(shí)也會(huì)引起肝組織出現(xiàn)一系列病理變化[27]。由于肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，造成了線粒體對(duì)游離脂肪酸的攝入量降低，進(jìn)而激發(fā)了游離脂肪酸導(dǎo)致線粒體對(duì)游離脂肪酸的攝入量減少，從而刺激了游離脂肪酸 β 氧化的增強(qiáng)，觸發(fā)了氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，最后造成了對(duì)肝臟的“第二次打擊”，進(jìn)而形成了NAFLD［28-29]。相關(guān)研究顯示，加用抗氧化膳食補(bǔ)充劑的綜合精準(zhǔn)營養(yǎng)干預(yù)對(duì)改善NAFLD患者炎性指標(biāo)效果明顯［30] C

司美格魯肽是美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)用于治療2型糖尿病和肥胖的首個(gè)藥物，其作用機(jī)制在于激活GLP-1受體，服用司美格魯肽后患者腰圍、血脂、血糖和血壓等心臟病和糖尿病風(fēng)險(xiǎn)因素降低，整體生活質(zhì)量也得到了改善［31-32]。目前國內(nèi)外大量研究表明了司美格魯肽可以治療2型糖尿病伴NAFLD患者「33]，但是該藥是否是通過作用于減輕體質(zhì)量來改善的 NAFLD 的嚴(yán)重程度目前尚不清楚[18.34-35]，因此研究司美格魯肽是否可以改善MCD飲食誘導(dǎo)的NAFLD的脂質(zhì)沉積對(duì)臨床診斷以及治療尤為重要。

FAT/CD36屬于B類清道夫受體[36]，在長鏈脂肪酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)和調(diào)節(jié)代謝中發(fā)揮重要作用［37-39]。研究發(fā)現(xiàn)肝臟FAT/CD36表達(dá)增加會(huì)促進(jìn) NAFLD 的發(fā)展[40-41]。目前，F(xiàn)AT/CD36已被廣泛研究，揭示了其在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝方面的作用。AMP活化蛋白激酶（AMPK）作為一種細(xì)胞能量監(jiān)測器，在維持動(dòng)物細(xì)胞的能量平衡和代謝過程中扮演著至關(guān)重要的角色[42]，司美格魯肽可調(diào)節(jié)肝臟中的AMPK途徑激活沉默信息調(diào)節(jié)因子1（SIRT1），從而延長了動(dòng)物壽命［43]。NAFLD進(jìn)展可影響 SIRT1表達(dá)，嚙齒動(dòng)物NAFLD模型可見SIRT1表達(dá)降低[44]，同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)司美格魯肽上調(diào)了 SIRT1的表達(dá)［35]此外AMPK的激活可能通過阻止雷帕霉素靶蛋白復(fù)合體1（mTORC1）來抑制過量營養(yǎng)物質(zhì)誘導(dǎo)的肝脂質(zhì)積累[45]雷帕霉素靶蛋白（mTOR）是一種非典型的蛋白激酶，可通過參與mTORC1復(fù)合物的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄和蛋白翻譯產(chǎn)生影響［46]。研究發(fā)現(xiàn)NAFLD小鼠的mTOR通路被激活，進(jìn)一步導(dǎo)致了肝臟脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白水平的提高[47]。小鼠肝細(xì)胞經(jīng)棕櫚酸處理后mTOR信號(hào)通路表達(dá)上調(diào)，可提高肝細(xì)胞FAT/CD36表達(dá)水平，導(dǎo)致脂質(zhì)積聚并引發(fā)炎癥反應(yīng)［48]，當(dāng)使用mTORC1特異性抑制劑雷帕霉素處理肝細(xì)胞可導(dǎo)致FAT/CD36表達(dá)抑制[49-50]，司美格魯肽減弱 途徑并增強(qiáng)肝臟中的胰島素信號(hào)傳導(dǎo)「43］。綜上本課題組認(rèn)為司美格魯肽緩解了MCD飲食誘導(dǎo)的NAFLD的發(fā)生及發(fā)展可能是通過抑制FAT/CD36的表達(dá)來介導(dǎo)的。

本研究結(jié)果表明，干預(yù)組的肝組織HE染色、油紅O染色結(jié)果及肝臟TG水平較模型組改善，提示司美格魯肽對(duì)緩解NAFLD的進(jìn)展有緩解作用，可能與FATCD36蛋白表達(dá)降低有關(guān)。但是司美格魯肽抑制FAT/CD36表達(dá)的機(jī)制仍需要進(jìn)一步的研究明確，為臨床使用司美格魯肽注射液早期干預(yù)NAFLD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

作者貢獻(xiàn)：張全愛提出主要研究目標(biāo)，負(fù)責(zé)研究的構(gòu)思與設(shè)計(jì)，研究的實(shí)施，撰寫論文；張全愛、董慧聰、盧曉飛負(fù)責(zé)飼養(yǎng)動(dòng)物，動(dòng)物組織的取材；張全愛、李沙進(jìn)行數(shù)據(jù)的收集與整理；王愷悌負(fù)責(zé)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，圖、表的繪制與展示；郭永澤負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制與審查，對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。

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（本文編輯：鄒琳）