食用農(nóng)產(chǎn)品氯霉素殘留檢測方法研究進(jìn)展

1食用農(nóng)產(chǎn)品中氯霉素殘留的檢測意義

氯霉素（CAP）是一種廣譜抗菌抗生素，最初是作為“委內(nèi)瑞拉鏈霉菌”型細(xì)菌的代謝產(chǎn)物獲得的，現(xiàn)在可以通過人工途徑獲得。它對多種革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、厭氧菌以及部分立克次體有效，主要是通過抑制細(xì)菌的50S核糖體亞基來阻斷蛋白質(zhì)合成，從而發(fā)揮其抑菌（低濃度）或殺菌（高濃度）作用。氯霉素因其優(yōu)異的抗菌性能、穩(wěn)定的療效和低廉的價(jià)格，被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病控制、農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)。

然而，氯霉素的過量使用會導(dǎo)致其在動物組織和可食用動物產(chǎn)品中積累，通過食物鏈攝入含有氯霉素殘留的食物會對人類健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅，增加人體發(fā)生疾病的風(fēng)險(xiǎn)，包括再生障礙性貧血、白血病、灰嬰綜合征、神經(jīng)毒性、癌癥等[1]。2017年，氯霉素被世界衛(wèi)生組織癌癥國際研究機(jī)構(gòu)（IARC）列為2A類致癌物（可能對人類致癌）。如今，許多國家都限制了氯霉素的使用，歐盟、美國、加拿大和其他國家發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)中禁止使用氯霉素。我國對氯霉素殘留實(shí)行嚴(yán)格的“零容忍政策”，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2019年頒布了第250號公告《食品動物中禁正使用的藥品及其他化合物清單》，其中明確規(guī)定氯霉素在所有食品動物的可食用組織中不得檢出[2]。

近年來，各種分析技術(shù)被用于測定食用農(nóng)產(chǎn)品中的氯霉素殘留，主要有氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）、液相色譜法（LC）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）、電化學(xué)分析法、熒光分析法以及生物傳感分析法等。接下來，我們將對氯霉素殘留檢測技術(shù)的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為相關(guān)的研究和實(shí)際應(yīng)用提供參考。

2食用農(nóng)產(chǎn)品中氯霉素殘留檢測方法

2.1氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）

GC-MS/MS是一種結(jié)合了氣相色譜（GC）的高效分離能力與串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）的高靈敏度和高特異性的分析技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)中痕量化合物的定性和定量分析。研究人員利用GC-MS/MS可實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品中極低濃度化合物的精準(zhǔn)分析，因此成為獸藥殘留檢測領(lǐng)域的“金標(biāo)準(zhǔn)”。JianzhongShen等人開發(fā)了一種高靈敏度、可靠的氣相色譜-負(fù)化學(xué)電離質(zhì)譜法（GC-NCIMS），可以同時測定肌肉和肝臟組織中氯霉素（CAP）、氟苯尼考（FF）和氟苯尼考胺（FFA）的痕量水平。通過脂質(zhì)冷凍、液-液萃取和固相萃取與OasisHLB柱結(jié)合的方式來去除復(fù)雜基質(zhì)中的共萃取干擾，使用該方法檢測CAP的檢出限為 0.1μg/kg FF和FFA的檢出限為 0.5μg/kg ，回收率在 78.5%～105.5% 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） <17%_c TianshunLiu等人提出了一種測定牛奶樣本中氯霉素的新方法，通過在磁性 Fe₃O₄ 表面上包覆殼聚糖制備出聚合物納米復(fù)合材料，將該材料用于乙酸乙酯提取時的清潔材料，無需額外的清潔步驟，可直接檢測牛奶樣本中的CAP，決定限為 0.05μg/kg ，檢測限為 0.11μg/kg

2.2液相色譜法(LC)

LC是一種基于液體流動相的色譜分離技術(shù)，廣泛用于復(fù)雜混合物中各組分的分離、定性和定量分析，高效液相色譜（HPLC）適用于高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定及大分子化合物（蛋白質(zhì)、藥物等）的檢測，而超高效液相色譜（UPLC）的分辨率更高，檢測速度也更快。LC可以配備多種檢測器并結(jié)合不同的流動相，從而實(shí)現(xiàn)其在各種基質(zhì)介質(zhì)中的應(yīng)用。Amelin等人提出了一種快速、靈敏、安全的檢測方法，通過高效液相色譜（HPLC）配合紫外檢測（ ）同時測定食物中氯霉素和甲砜霉素的殘留量，在保證提取物充分預(yù)濃縮和額外純化的最佳條件下，回收率為 64%～87% 線性濃度范圍（濃度系數(shù)為10）在 0.01～5mg/kg ，分析結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） <9%_< 。Vuran等人開發(fā)了一種磁固相萃取結(jié)合高效液相色譜二極管陣列檢測（HPLC-DAD）方法，用于測定牛奶樣本中氯霉素（CAP）和四環(huán)素（TC）殘留，經(jīng)過磁性固相萃取后，兩種抗生素的線性濃度范圍（ R²>0.9954 ）為 10.0～600.0ng/mL ，氯霉素和四環(huán)素的檢出限（LOD）分別為 3.02ng/mL 利 13.52ng/mL ，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均低于 4.0%₀₀

2.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）

LC-MS/MS是一種將液相色譜（LC）分離技術(shù)與串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）檢測技術(shù)相結(jié)合的高靈敏度、高特異性的分析方法，同時兼具寬動態(tài)范圍及適用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，適用于多種類型化合物的檢測，比如小分子化合物、生物大分子（分子量 >1000Da ）、極性/難揮發(fā)物質(zhì)以及熱不穩(wěn)定化合物，在醫(yī)藥、環(huán)境、食品安全以及臨床診斷等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。HongliYe等人開發(fā)并驗(yàn)證了一種靈敏的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS），用于測定水產(chǎn)品中的氯霉素（CAP）、甲砜霉素（TAP）、氟苯尼考（FF）和氟苯尼考胺（FFA）殘留，該方法的線性關(guān)系良好（ R²>0.992 )，線性濃度范圍為 0.01～5μg/L ，檢測限為 μ_?0.01μg/kg ，加標(biāo)回收分析證明了該方法的準(zhǔn)確度和可靠性，回收率在 84.0%～105% ，日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為 10.769%～13.7% ，而日間RSD則在 0.582%～13.3% HaoZhou等人提出了一種簡單而靈敏的檢測水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)品中氨芐青霉素（氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考）殘留的方法，它是基于響應(yīng)面分析法優(yōu)化的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS），通過單因素實(shí)驗(yàn)和中心復(fù)合設(shè)計(jì)的響應(yīng)面分析法優(yōu)化了前處理步驟，以最大化提取效率和純化效果。結(jié)果顯示，氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的線性濃度范圍為 10.1～50ng/mL ，在12種水產(chǎn)品中的回收率介于 78.6%～106.2% ，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于 12.1% ，定量限為0.01～0.04μg/kg ，研究結(jié)果表明該方法在水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)品中的氨芐青霉素殘留檢測方面有著良好的應(yīng)用前景。

2.4電化學(xué)分析法

電化學(xué)分析法是基于物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)及其變化規(guī)律，通過測量電信號參數(shù)變化來對待測物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的一類分析方法，具有成本低、便攜、檢測速度快、操作簡單、二次污染低等特點(diǎn)，包括CAP在內(nèi)的大多數(shù)目標(biāo)物質(zhì)都是電化學(xué)活性分子，能夠在玻碳電極（GCE）上產(chǎn)生電化學(xué)信號，從而實(shí)現(xiàn)微量檢測分析。YongkangLi等人研究利用一維/二維 SnO₂/ 還原石墨烯氧化物（rGO）復(fù)合材料對玻璃碳電極（GCE）進(jìn)行改性，以實(shí)現(xiàn)電化學(xué)檢測CAP，優(yōu)化后的 SnO₂/rGO/GCE 表現(xiàn)出高達(dá) 154.56μA/cm² 的電流密度，該電極的線性濃度范圍為 0.001～100μM 檢測限達(dá)到 0.315nM YuxiaZhang等人設(shè)計(jì)了一種簡單、低成本且高效的電化學(xué)傳感器，采用多孔碳（PPC）作為導(dǎo)電介質(zhì)，通過在玻璃碳電極上修飾PPC，放大電化學(xué)信號，顯示出對CAP快速的電流響應(yīng)和高度選擇性，線性濃度范圍較寬（ 1.0～500μM ，檢測限低至 0.1μM_o 此外，該傳感器還表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性（ RSD=4.1% ）、重復(fù)性（ RSD=5.0% ）、穩(wěn)定性（ RSD=8.3% ）及高度選擇性。同時，該傳感器還能夠在水樣中檢測到CAP，回收率在93.0%～102.8% 之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于 4.5% 。

2.5熒光分析法

熒光分析法是一種基于物質(zhì)熒光特性進(jìn)行定量和定性分析的光譜技術(shù)，在獸藥殘留檢測中因其高靈敏度、快速響應(yīng)和良好的選擇性受到大家關(guān)注，尤其適用于復(fù)雜基質(zhì)（如肉類、牛奶、蜂蜜等）中痕量獸藥的篩查與定量分析。在CAP熒光分析檢測中，關(guān)鍵是要構(gòu)建高效靈敏的熒光傳感器，金屬-有機(jī)框架材料（MOF）具有較大的比表面積、豐富的孔隙和熒光特性，通過結(jié)構(gòu)調(diào)整優(yōu)化MOF，可以顯著提升其對目標(biāo)物質(zhì)的熒光響應(yīng)性能，進(jìn)而提高檢測靈敏度。Taylor等人將熒光染料固定在MOF的孔中以形成熒光探針，當(dāng)CAP與MOF孔中的熒光探針相互作用時，可以觀察到熒光信號的變化，通過測量熒光信號的變化，就能實(shí)現(xiàn)對CAP的定量分析。當(dāng)檢測環(huán)境中有CAP時，MOF上的染料標(biāo)記適配體會被釋放，而熒光得以恢復(fù)。該方法準(zhǔn)確度高、可重復(fù)性好，而且操作簡單、成本低廉，非常適合快速檢測實(shí)際樣品，檢出限低于 0.10pg/mL ，線性濃度范圍為 0.1～10ng/mL WeiweiShen等人開發(fā)了一種在球形核酸（SNA）表面進(jìn)行信號擴(kuò)增的熒光免疫吸附試驗(yàn)，用于檢測氯霉素，通過將抗體和聚腺嘌呤（polyA）DNA偶聯(lián)到金納米顆粒（AuNPs）的表面上，以更簡單和成本效益更高的方式實(shí)現(xiàn)了納米免疫探針的制備，結(jié)果表明，CAP檢測性能良好，線性濃度范圍為 0.01～5ng/L ，檢測限為 0.005ng/L

2.6生物傳感分析法

生物傳感分析法是一種將生物識別元件與信號轉(zhuǎn)換技術(shù)相結(jié)合，用于檢測特定化學(xué)或生物分子的分析方法，其核心在于高特異性、高靈敏度和實(shí)時監(jiān)測能力。目前生物傳感器主要用于疾病生物標(biāo)志物的ELISA檢測、藥物測試以及環(huán)境監(jiān)測、農(nóng)作物和水產(chǎn)養(yǎng)殖方面的檢測。Ying Zhang等人構(gòu)建了一種基于AuNPs@CoFe-PBA納米材料作為高效催化劑的新型無標(biāo)記電化學(xué)發(fā)光（ECL）生物傳感器，用于氯霉素的直接檢測，電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在裸電極上發(fā)生，無需任何修飾，ECL強(qiáng)度與CAP濃度之間存在良好的線性關(guān)系，線性濃度范圍為 10pg/mL～1μg/mL ，檢測限達(dá)到7.75pg/mL ，研究結(jié)果顯示該方法在測定低濃度氯霉素方面具有強(qiáng)大潛力。LingqinMeng等人提出了一種新型抗生素檢測方法，該方法顯著提高了鑒定小分子抗生素的靈敏度，他們利用光學(xué)弱值擴(kuò)增和間接競爭抑制試驗(yàn)，選擇氯霉素作為模型化合物，并將其與氯霉素牛血清白蛋白偶聯(lián)物混合，以競爭性結(jié)合氯霉素抗體，該方法可以檢測到較低濃度的小分子抗生素，氯霉素檢測的線性濃度范圍為6.46～9.70ng/mL ，濃度分辨能力為 33.20pg/mL 。

結(jié)語

獸藥殘留檢測技術(shù)作為保障食用農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的關(guān)鍵手段，近年來取得了顯著進(jìn)展，目前正朝著更快速、更靈敏、更高通量的方向發(fā)展。傳統(tǒng)檢測方法如氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS）、高效液相色譜法-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）雖然準(zhǔn)確可靠，但存在前處理復(fù)雜、耗時長、成本高等局限性，而新興的檢測技術(shù)如電化學(xué)分析法、熒光免疫分析法、生物傳感分析技術(shù)等顯著提升了分析性能，以其快速、靈敏、高通量等優(yōu)勢，正在改變獸藥殘留檢測技術(shù)的格局，特別是針對酰胺醇類抗生素等廣泛使用的獸藥，新型檢測方法的開發(fā)對于實(shí)現(xiàn)多殘留同步檢測具有重要意義。未來，納米材料應(yīng)用、微流控芯片技術(shù)、人工智能與大數(shù)據(jù)分析的融合將推動檢測技術(shù)向更高效、更精準(zhǔn)的方向發(fā)展，為構(gòu)建完善的獸藥殘留防控體系提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李研東，韓雪.獸藥殘留與動物源性食品監(jiān)管對策[J].今日畜牧獸醫(yī)，2017，000(004):8-9.

[2] 張曉彤，王曉通，謝曉程，等.氯霉素在食用農(nóng)產(chǎn)品中的殘留分析研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)科學(xué)，2021，51(07):920-924.收稿日期：2025-04-28

作者簡介：郭仙斐（1992—），女，漢族，碩士研究生，

獸醫(yī)師。研究方向：畜牧獸醫(yī)。