葉啉雜化中空介孔有機(jī)硅分子探針體外超聲顯影及 聲動力治療腦膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)研究

摘要目的制備卟啉雜化中空介孔有機(jī)硅分子探針TCPP@HMON（以下簡稱THMON），探討其體外超聲顯影能力及聲動力治療腦膠質(zhì)瘤的療效。方法采用原位生長法制備THMON，觀察其形態(tài)并檢測粒徑及表面電位，計(jì)算THMON溶液中硅含量及TCPP的包封率、載藥率。使用體外單線態(tài)氧綠色熒光探針（SOSG）檢測THMON在不同超聲輻照條件下（聲強(qiáng) 0.5W/cm²，1.0W/cm² ，時間0＼～300s）的單線態(tài)氧并獲取熒光強(qiáng)度。采集不同濃度（0.05、0.1、0.2、0.4、0.8，1.6，3.2mg/ml）^′ THMON溶液的體外超聲圖像，定量分析其回聲強(qiáng)度。使用激光共聚焦顯微鏡觀察不同孵育時間（2、3、7h） 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（U87MG）對THMON的吞噬能力。采用CCK-8法驗(yàn)證THMON對U87MG的毒性，觀察其在不同超聲輻照條件下（聲強(qiáng) 0.5W/cm²，1.0W/cm² ，時間均為30s）殺傷細(xì)胞的效果。將 200μl THMON溶液（濃度為0.5mg/ml） 和等量生理鹽水分別經(jīng)尾靜脈注入BALB/c小鼠體內(nèi)（設(shè)為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組各3只），14d后進(jìn)行血常規(guī)、肝腎功能檢測，檢測THMON在BALB/c小鼠體內(nèi)的安全性。結(jié)果THMON為大小均一的中空介孔球形結(jié)構(gòu)，平均粒徑為1 121.5±24.3）nm ，平均表面電位為 （-78.5±1.1）_mV ，硅含量為 0.84mg/ml ;THMON溶液中TCPP的包封率和載藥率分別為35.9%.3.0% 。隨著超聲輻照強(qiáng)度的增加及時間的延長，SOSG的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。當(dāng)THMON溶液濃度分別為0.05、0.1、0.2，0.4，0.8，1.6，3.2mg/ml 時，其超聲顯影能力逐漸增強(qiáng)，回聲強(qiáng)度分別為22.00、23.30、29.00、39.00、43.67、62.00、68.67a.u.。細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著孵育時間的延長，U87MG細(xì)胞核周圍THMON紅色熒光信號逐漸增多。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在無超聲輻照條件下，THMON溶液濃度為 320μg/ml 時細(xì)胞存活率為！ （80.71±8.54）% ，細(xì)胞活性未受明顯影響；當(dāng)THMON溶液濃度為 320μg/ml 時，分別以聲強(qiáng) 0.5W/cm²?1.0W/cm² 超聲輻照30s后，細(xì)胞存活率為 （55.46±5.31）% 、（41.21±7.35）% ，與無超聲輻照的THMON溶液比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 Plt;0.05 。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射THMON溶液后，實(shí)驗(yàn)組小鼠血常規(guī)和肝腎功能指標(biāo)與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功制備了THMON，其具有良好的生物安全性，不但可增強(qiáng)體外超聲顯影能力，還可通過聲動力作用有效抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖。

Porphyrin-hybridzed hollow mesoporous organosilica molecular probes for in vitro ultrasound imaging and sonodynamic therapy of glioma ： an experimental study

DENGLiming，ZHANGLiang，LUO Jie Departmentof Ultrasound，theFirst Afiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 40oo16，China

ABSTRACTObjectiveTo synthesize porphyrin-hybridized hollow mesoporous organosilica molecular probes TCPP@HMON（hereafter termed THMON），and to explore thecapabilityforinitroultrasound imagingandsonodynamictherapy （SDT）of glioma.MethodsTHMONwassnthesizedbyin-situgrowth method，the morphologywasobserved，anditsparticle size andsurfacepotentialwere measured.The silicon contentin THMON，as wellas TCPP encapsulationeficiencyanddrug loading rate werecalculated.The singletoxygengenerated by THMONunder ultrasound irradiationat diferent acoustic intensities （0.5W/cm²，1.0W/cm²） and durations （O＼～3OO s） were detected by extracellular singlet oxygen sensor green（SOSG） fluorescent probe，andthe fluorescence intensity was measured.Ultrasound imaging performance of THMONatdifferent concentrations（O.O5，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，3.2mg/ml）wereevauated，theechointensitieswerequantitativelyanalydLser confocalmicroscopywasused toobserve thephagocyticabilityof human glioblastomaastrocytomacels（U87MG）against THMON withdiferentincubationtime（2，3，7h）.ThecytotoxicityofTHMONonU87MG wereverifiedbytheCCK-8assay，the SDTefficacywasobservedunderdiferentultrasoundiradiation（intensity：0.5W/cmand1.OW/cm2，duration：30s）.200 μl of THMON（concentration of 0.5mg/ml ）and an equal volume of normal saline were injected into BALB/c mice via the tail vein （3 miceintheexperimentalgroup，andmiceinthecontrolgroup），respectively.After14d，routinebloodtestsaselsliver andkidney function tests wereused to evaluatethesafetyof THMON in BALB/c mice.ResultsTHMONexhibitedauniform hollow mesoporous spherical structure，withan average particle sizeof （121.5±4.3）nmandan average surface potential of （-78.5±1.1）mV.ThesiliconcontentwasO.84 mg/ml.TheencapsulationeffciencyanddrugloadingrateofTCPPwere35.9%and （204 3.0% ，respectively.The fluorescence intensityof SOSG gradually enhanced with increasing irrdiation intensityandtime.When theTHMON concentrations were 0.05，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，3.2mg/ml ，theechointensitieswere22.00，23.30，29.00，39.00， 43.67，62.00，68.67a.u.，respectively.Thecell phagocytosisassayrevealedaprogresiveaccumulationofredTHMON fluorescent signal intheperinuclearregionof U87MG with increasing incubation time.Cytotoxicityassyresults demonstrated that without ultrasound irradiation，the cel viability was （80.71±8.54）% at a THMON concentration of 320μg/ml ，indicating no significant cytotoxic effect.However，when THMON（concentration of 320μg/ml ）was exposed to ultrasound irradiation at intensitiesof0.5W/cm2and1.0W/cm ² for 3O s，the cell viabilities decreased to （55.46±5.31）% and （41.21±7.35）% ， respectively.There were significant differences compared to without ultrasound irradiation（both P lt;0.05）.The in vivo experimental results demonstratedthatafterTHMONinjectiontherewerenostatisticallysignificantdiferencesintheroutinebloodtestsand liverandkidneyfunctionindicatorsbetweenthe experimental groupandthecontrolgroup.ConclusionTHMONissuccessfully synthesizedwith favorablebiosafety，and itenhances invitroultrasoundimagingandefectivelyinhibitsglioblastoacel proliferation by SDT.

KEYWORDSOrganosilica molecular probe;Ultrasound imaging;Sonodynamic therapy;Glioma

腦膠質(zhì)瘤是臨床最常見的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，其侵襲性強(qiáng)、異質(zhì)性顯著，嚴(yán)重威脅人類健康[1-2]。手術(shù)、化療、放療均為治療腦膠質(zhì)瘤的傳統(tǒng)方式，但由于其高復(fù)發(fā)率及血腦屏障的存在，難以滿足復(fù)雜的臨床需求，使得腦膠質(zhì)瘤成為預(yù)后極差的惡性腫瘤之一[3]。隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷創(chuàng)新，光動力療法、光熱療法及聲動力療法等無創(chuàng)治療技術(shù)逐漸嶄露頭角，并在臨床實(shí)踐中受到廣泛關(guān)注4。相較于光動力療法和光熱療法，聲動力療法具有能夠突破光激活深度限制的獨(dú)特優(yōu)勢，在臨床腫瘤治療中展現(xiàn)出重要價(jià)值5。然而，現(xiàn)有聲敏劑為小分子，難以穿透血腦屏障并在腫瘤部位富集，嚴(yán)重影響聲動力作用效果。本實(shí)驗(yàn)通過化學(xué)同源原理將卟啉雜化入中空介孔有機(jī)硅分子中，制備一種新型聲敏分子探針TCPP@HMON（以下簡稱THMON），探討其體外超聲顯影能力及聲動力治療腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的療效，旨在為腦膠質(zhì)瘤的精準(zhǔn)治療提供一種新思路。

團(tuán)化學(xué)試劑有限公司：四（4-羧基苯基）葉啉（TCPP）購于美國FrontierScientific公司；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青鏈霉素混合液、胰酶均購于上海潤成生物有限公司；CCK-8試劑盒、Hoechst33342活細(xì)胞染色液、單線態(tài)氧綠色熒光探針（SOSG）均購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

2.實(shí)驗(yàn)動物及細(xì)胞：6周齡SPF級雌性BALB/c小鼠6只，購于重慶恩彼生物科技有限公司，體質(zhì)量 16～ 18g ，飼養(yǎng)于重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心；人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（U87MG）購于武漢普諾賽生命科技有限公司。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)動物倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：IACUC-CQMU-2024-0471）。

1.主要試劑：正硅酸乙酯（TEOS）、十六烷基三甲基氯化銨（CTAC）、三乙醇胺（TEA）、雙（三乙氧基硅烷）二硫化物（BTES）、3-氨基三乙氧基硅烷（APTES，純度 98% ）均購于美國Sigma公司；無水甲醇、N，N-二甲基甲酰胺試劑（DMF）、氨水、濃硝酸均購于國藥集

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)材料及儀器

3.主要儀器：超聲理療儀（重慶海扶技術(shù)有限公司，頻率 1MHz ，占空比 50% ）；DFY定量分析儀（重慶醫(yī)科大學(xué)超聲影像學(xué)研究所）；能量色散光譜儀（JED-2300，日本電子株式會社）；粒徑電位分析儀（ZetasizerNanoZS90，英國Malvern儀器公司）；透射電子顯微鏡（JEM-F200，日本電子株式會社）；紫外-可見分光光度計(jì)（UV-2501，日本島津公司）；熒光分光光度計(jì)（F-7000，日本日立公司）；光聲成像儀（VeroLAZR，加拿大VisualSonics公司）；激光掃描共聚焦顯微鏡（LSM780，德國蔡司公司）；電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀（ICP-MS，ICAP 6300Duo ，美國ThermoFisher公司）；高速離心機(jī)（5804R，德國Ependorf公司）；Millipore超純水制備系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.THMON的制備：采用原位生長法制備THMON。首先通過化學(xué)同源原理合成殼核結(jié)構(gòu)的MSN@THMON，具體方法為：圓底燒瓶中加入 2g CTAC、 1.0ml TEA及 20.0ml 去離子水，磁力攪拌 ^1h 至其完全溶解，再將溶液置于 80^°C 油浴中加熱并滴加1.0ml TEOS繼續(xù)反應(yīng)1h，然后將BTES和TEOS各 1.0ml 及TCPP-APTES 0.3ml 滴入上述溶液中繼續(xù)反應(yīng) ^4h 通過高速離心和乙醇洗滌后即得到MSN@THMON。將MSN@THMON重新分散在 30.0ml 含 1wt% 氯化鈉的甲醇溶液中攪拌 6h 以去除殘留的CTAC；最后將MSN@THMON和氨水加人到 30.0ml 超純水中，于95^°C 下反應(yīng)3h，通過多次離心洗滌后即得到THMON。

2.THMON的表征檢測：使用透射電子顯微鏡觀察THMON形態(tài)；粒徑電位分析儀檢測其粒徑和表面電位。能量色散光譜儀檢測THMON中各化學(xué)元素分布情況，使用ICP-MS檢測THMON中硅含量，具體方法為：取 0.1ml THMON加人 1.0ml 濃硝酸至玻璃管中加熱，待THMON完全溶解后加人 10.0ml3% 硝酸溶液，放入EP管中備用。

3.THMON中TCPP的包封率和載藥率計(jì)算：取適量TCPP用DMF溶解，分別配制成濃度為0.25、0.5、1.0，2.0，3.0μg/ml 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用紫外-可見分光光度計(jì)檢測其在 420nm 處的吸光度，并繪制TCPP濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立線性回歸方程。再以DMF為溶劑配制THMON溶液，使用紫外-可見分光光度計(jì)檢測其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算THMON溶液中TCPP的包封率和載藥率。進(jìn)一步制備THMON和TCPP溶液（TCPP含量均為 20μg/ml， ，使用紫外-可見分光光度計(jì)檢測TCPP的吸光度。

4.THMON體外單線態(tài)氧產(chǎn)量檢測：將THMON與SOSG混合配制成THMON濃度為 100μg/ml 的溶液，對其進(jìn)行超聲輻照（聲強(qiáng) 0.5W/cm²?1.0W/cm²， ，時間 0～ 300s） ，使用熒光分光光度計(jì)檢測SOSG的單線態(tài)氧并獲取熒光強(qiáng)度。

5.體外超聲顯影實(shí)驗(yàn)：以瓊脂糖凝膠為原料制作帶孔凝膠模型，將不同濃度 （0.05，0.1，0.2，0.4，0.8， 1.6，3.2mg/ml 的THMON溶液置于凝膠模型中，使用二維超聲觀察其顯影情況并采集圖像，DFY定量分析儀檢測其回聲強(qiáng)度。

6.細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)：將U87MG接種于共聚焦血中（每孔 1×10⁴ 個，均勻分布），待細(xì)胞貼壁后替換培養(yǎng)基為含THMON的DMEM溶液 （200μg/ml，1.0ml） ，與細(xì)胞共孵育2、3、7h，PBS溶液洗滌3次以去除未被吞噬的顆粒，每孔加入 1.0ml Hoechst33342活細(xì)胞染色液將細(xì)胞核染色 10min ，PBS溶液洗滌3次，使用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察THMON在細(xì)胞內(nèi)的分布情況

7.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)：取對數(shù)生長期U87MG接種于96孔板內(nèi)（每孔 1×10⁴ 個，均勻分布），于 37% CO₂ 恒溫箱中孵育 24h 貼壁。將不同濃度的THMON溶液（ 10，20，40，80，160，320μg/ml） 與細(xì)胞共孵育 24h PBS溶液洗滌3次，然后每孔加入培養(yǎng)基 110μl （含CCK-8檢測液 10μl） ，孵育 2h 后檢測其在 450nm 處的吸光度。將上述不同濃度的THMON溶液與細(xì)胞共孵育 24h 后進(jìn)行超聲輻照（聲強(qiáng) 0.5W/cm²，1.0W/cm² ，時間均為30s），再孵育 2h ，采用CCK8法檢測細(xì)胞存活率。

8.體內(nèi)安全性實(shí)驗(yàn)：將 200μl THMON溶液（濃度為 0.5mg/ml） 和等量生理鹽水分別經(jīng)尾靜脈注入BALB/c小鼠體內(nèi)（設(shè)為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組各3只），14d后收集血液樣本進(jìn)行血常規(guī)、肝腎功能檢測，觀察THMON在BALB/c小鼠體內(nèi)的安全性。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS27.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料采用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者以 表示，多組比較采用單因素方差分析，方差齊時兩組比較采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊時兩組比較采用TamhaneT2檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布者以M（Q₁，Q₃） 表示，采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)。 Plt;0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、THMON的表征

透射電子顯微鏡顯示THMON呈單個分散的球形，大小均一，表面可見清晰孔道，中心呈中空結(jié)構(gòu)；平均粒徑為 （121.5±24.3）nm ，平均電位為 （-78.5±1.1）_mV 。能量色散光譜儀顯示THMON中可見氧、硫、硅元素存在，提示中空介孔有機(jī)硅分子探針制備成功。ICP-MS檢測顯示，THMON中硅含量為 0.84mg/ml 。見圖1。

二、THMON中TCPP的包封率及載藥率

紫外-可見吸收光譜顯示，TCPP和THMON出現(xiàn)了相同的吸收峰（圖2A），表明TCPP成功裝載人THMON。通過檢測不同濃度TCPP紫外-可見吸收光譜（圖2B），根據(jù)TCPP在 420nm 處的吸收峰值建立線性回歸方程（圖3），得出THMON溶液中TCPP的包封率和載藥率分別為 35.9%.3.0% 。THMON和TCPP溶液在 420nm 處的吸光度分別為 2.54a.u. 和 0.43a.u. ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 _Plt;0.001 ）。

三、THMON體外單線態(tài)氧產(chǎn)量檢測結(jié)果

體外單線態(tài)氧產(chǎn)量檢測顯示，隨著超聲輻照強(qiáng)度的增加及時間的延長，SOSG的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)。見圖4。

四、體外超聲顯影能力

體外超聲顯影實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著THMON溶液濃度的增加（2號 （0.05，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6， 3.2mg/ml ），其超聲顯影能力逐漸增強(qiáng)，回聲強(qiáng)度分別為22.00、23.30、29.00、39.00、43.67、62.00，68.67a.u. 。見圖5。

五、細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)結(jié)果

激光掃描共聚焦顯微鏡顯示紅色熒光緊密圍繞著U87MG細(xì)胞核，且隨著孵育時間的延長THMON紅色熒光信號逐漸增多。見圖 6

六、細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)顯示，在無超聲輻照條件下，THMON溶液濃度為 320μg/ml 時細(xì)胞存活率為 80.71±8.54）% ，細(xì)胞活性未受明顯影響；在聲強(qiáng) 0.5W/cm² 時間 30s 超聲輻照條件下，THMON溶液濃度 ?80μg/ml 時細(xì)胞存活率為 （94.37±3.69）%～（100.57±9.63）% ，濃度為160，320μg/ml 時細(xì)胞存活率分別為 （68.13±6.64）% /0 55.46±5.31）% ；在聲強(qiáng) 1.0W/cm² 、時間30s超聲輻照條件下，細(xì)胞存活率隨著THMON溶液濃度增加而逐漸下降，當(dāng)THMON溶液濃度為 320μg/ml 時，細(xì)胞存活率為 （41.21±7.35）% ；無超聲輻照與超聲輻照條件（聲強(qiáng) 0.5W/cm²?1.0W/cm² ，時間均為 30s 下THMON溶液濃度為 20～320μg/ml 時細(xì)胞存活率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均 Plt;0.05 。見表1。

七、體內(nèi)安全性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注射THMON溶液后，實(shí)驗(yàn)組和對照組小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、血清白蛋白（ALB）、血尿素氮（BUN）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）血小板計(jì)數(shù)（PLT）均處于正常范圍，兩組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

討論

腦膠質(zhì)瘤因預(yù)后不佳、復(fù)發(fā)率高嚴(yán)重威脅人類健康，給社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管腫瘤治療策略不斷更新發(fā)展，但在治療可及性、操作便捷性、患者耐受性及副作用控制等方面仍存在局限，阻礙了徹底清除病灶，增加了腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[7]。在此背景下，將外部刺激與功能性生物材料相結(jié)合的治療思路為腫瘤治療提供了新方向。光、聲等外源刺激憑借轉(zhuǎn)化潛力大、無創(chuàng)、可行性高等優(yōu)勢成為備受關(guān)注的研究熱點(diǎn)。其中，聲動力療法通過產(chǎn)生大量活性氧，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，實(shí)現(xiàn)原位腫瘤清除，是一種極具前景的無創(chuàng)治療技術(shù)[8-9]。得益于超聲波出色的組織穿透能力，聲動力療法能夠有效作用于深部腫瘤組織，擴(kuò)大了其應(yīng)用范圍；同時還可通過調(diào)節(jié)外部刺激參數(shù)，靈活調(diào)整治療方式，為實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)化、個性化治療提供了幫助。超聲作為一種無創(chuàng)、實(shí)時的顯影技術(shù)，能夠?yàn)槁晞恿Ο煼ㄌ峁┚珳?zhǔn)引導(dǎo)，二者結(jié)合可進(jìn)一步提升腫瘤治療的安全性和有效性?，F(xiàn)有聲敏劑多由有機(jī)小分子組成，由于水溶性差、體內(nèi)循環(huán)時間短等因素導(dǎo)致其在腫瘤組織中的富集率較低[10]。卟啉類衍生物是最常用的聲敏劑，因具有良好的生物安全性而被廣泛應(yīng)用于聲動力療法研究中[]，但其為疏水物質(zhì)，卟啉分子間易形成 π-π 共軛，從而引起聚集熒光淬滅（aggregationcausedquenching，ACQ）效應(yīng)，導(dǎo)致生物利用度較低和皮膚光毒性等問題[12]。如何最大限度地降低卟啉類衍生物的ACQ效應(yīng)并提高活性氧生成是當(dāng)前研究的重難點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過制備卟啉雜化的中空介孔有機(jī)硅分子探針THMON，將TCPP雜化入THMON以改善TCPP的生物利用度，降低ACQ效應(yīng)，可更好地實(shí)現(xiàn)聲動力作用，在腫瘤治療中具有極大的應(yīng)用潛力。

本實(shí)驗(yàn)制備的THMON呈均一球形，分散性好，中空介孔結(jié)構(gòu)清晰，平均粒徑為（ （121.5±24.3）nm ，平均電位為 （-78.5±1.1）mV ;能量色散光譜儀顯示THMON中可見氧、硫、硅元素存在，硫元素的存在提示其能夠在體內(nèi)微環(huán)境中有效降解。ICP-MS檢測顯示，THMON中硅含量為 0.84mg/ml ;THMON溶液中TCPP的包封率和載藥率分別為 35.9% .3.0% 。通過觀測相同TCPP濃度下THMON和TCPP溶液的紫外-可見吸光度，發(fā)現(xiàn)THMON溶液在 420nm 處的吸光度是TCPP溶液的5.9倍（2.54a.u.vs.0.43a.u.），表明THMON顯著增強(qiáng)了TCPP的水溶性。THMON體外單線態(tài)氧產(chǎn)量檢測顯示隨著超聲輻照時間的延長及輻照強(qiáng)度的增加，SOSG的熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，表明THMON具有優(yōu)異的聲動力性能。TCPP為難溶于水的聲敏劑，本實(shí)驗(yàn)將其雜化入THMON改善了TCPP的生物相容性，通過形貌控制和功能化中空介孔有機(jī)硅分子探針，從空間尺度上精細(xì)調(diào)控葉啉分子間的距離和位置，降低卟啉的ACQ效應(yīng)，由此提高活性氧生成，增強(qiáng)聲動力療效。本實(shí)驗(yàn)體外超聲顯影結(jié)果顯示，回聲強(qiáng)度隨THMON溶液濃度的增加而逐漸增強(qiáng)，表明THMON具有良好的二維超聲顯影能力，在一定濃度范圍內(nèi)可增強(qiáng)超聲顯影。由于TCPP可顯示紅色熒光，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步將THMON與U87MG共孵育并觀察THMON的熒光強(qiáng)度，結(jié)果顯示隨著孵育時間的延長，U87MG細(xì)胞核周圍THMON紅色熒光信號逐漸增多，表明U87MG能夠吞噬THMON，使得THMON的腫瘤細(xì)胞內(nèi)遞送成為可能，從而提高聲敏劑遞送效率和腫瘤治療效果。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無超聲輻照的THMON溶液在 320μg/ml 濃度范圍內(nèi)對U87MG無明顯毒性，表明THMON對細(xì)胞活性無明顯影響。為了驗(yàn)證聲動力療效，本實(shí)驗(yàn)采用CCK-8法檢測超聲輻照后U87MG細(xì)胞存活率，結(jié)果顯示THMON的聲動力殺傷效應(yīng)隨著超聲強(qiáng)度的增加和分子探針濃度的增加而增強(qiáng)，表明THMON可在超聲輻照下產(chǎn)生活性氧并有效殺傷腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，為腦膠質(zhì)瘤的診療一體化提供了一種新策略。本實(shí)驗(yàn)體內(nèi)安全性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射THMON溶液后實(shí)驗(yàn)組和對照組小鼠血常規(guī)及肝腎功能指標(biāo)均處于正常范圍，兩組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明THMON具有良好的體內(nèi)安全性。

本實(shí)驗(yàn)的局限性： ① THMON的制備工藝較復(fù)雜、步驟繁瑣，存在可控性較差、臨床轉(zhuǎn)化困難等不足，后續(xù)仍需對制備方法進(jìn)一步優(yōu)化改進(jìn)； ② 本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證的聲動力療效是在有氧條件下進(jìn)行的，而聲動力療法的主要機(jī)制是利用超聲觸發(fā)聲敏劑與周圍氧分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生活性氧引起氧化應(yīng)激，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡，因此今后還需進(jìn)一步驗(yàn)證缺氧條件下THMON的聲動力作用，以全面評估THMON的聲動力療效，為臨床治療轉(zhuǎn)化提供堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)成功制備了THMON，其不但可有效增強(qiáng)體外超聲顯影能力，還具有顯著的聲動力治療效果，為THMON應(yīng)用于腦膠質(zhì)瘤聲動力治療領(lǐng)域提供了可靠的理論依據(jù)，展現(xiàn)出THMON在該治療方向上具備潛在的臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值及廣闊的應(yīng)用前景。

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