新城疫的流行、檢測及綜合預(yù)防和控制技術(shù)研究進(jìn)展

中圖分類號：S855.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號： 1000-4440（2025）05-1031-10

Abstract：Newcastle disease（ND）isa highly contagious infectious disease caused byNewcastledisease virus（NDV） infectingpoultryand wildbirdsworldwide，whichusuallymanifestsasrespiratoryandneurologicalsymptoms.Clinicalmanifestationssuchasdiarheaanddepressoncanalsooccur.Inrecentyears，NDVhasbeen widelydetectedandisolatedinmostareas， posingagreatatteouydustrerefore，itiscearytoiuetodyidelocaltasmi nosis and comprehensive prevention and control technology of NDV. This paper provides a comprehensive review of the epidemiological status，detectionmethods，and integrated prevention and control strategies for ND.Itisadvisable to enhance the surveillance of NDVin waterfowl to facilitate early warning regarding transmission and outbreak risks.Given the current large-scale farming practices，it is essential to continueinvestigating the roles of probiotics and traditional Chinese medicineinenhancingimmunefunctionandantiviralresponses，therebyprovidinga scientific foundation formore effective prevention and control measures against ND.

Keywords：Newcastledisease；detectionmethods；probiotics；Chinese herbal medicine；immunological function

1 新城疫概述

新城疫（Newcastledisease，ND）屬于高致病性禽類病毒性傳染病，具有發(fā)病率高、死亡率高的特點(diǎn)，嚴(yán)重制約養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展[]。該病在世界各地都是一種必須報(bào)告的疾病，對其流行地區(qū)實(shí)行貿(mào)易限制和禁運(yùn)[2]。新城疫也是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）規(guī)定的家禽生產(chǎn)中需要消滅的疫病，其主要傳染源為病禽和帶毒禽，具有較大的潛在致病性，生物安全和疫苗接種是目前預(yù)防家禽感染這種疫病的最有效方法[2-3]。隨著疫苗長時(shí)間廣泛應(yīng)用和規(guī)?；u場的生物安全水平提升，該病得到了一定程度的控制[4]。然而，近幾年的流行病學(xué)監(jiān)測結(jié)果顯示，新城疫在免疫雞群中仍然時(shí)有發(fā)生，而且由于多種疾病的混合發(fā)生以及疫苗產(chǎn)生的抗體作用，導(dǎo)致這種疫病的流行常呈現(xiàn)非典型性特征[5]

自1926年新城疫在印度尼西亞第一次被報(bào)道以來，世界上至少發(fā)生了4次大流行，每一次大流行都伴隨著新的基因型出現(xiàn)。第一次全球大流行于1926年至1960年在東南亞和歐洲同時(shí)開始，持續(xù)大約30年才完全停正，由新城疫病毒（NDV）Ⅱ基因型、Ⅱ基因型和N基因型毒株引起的，雞是本次疫病的主要感染宿主，水禽和鳥類幾乎沒有發(fā)病。1960-1970年第二次大流行可能起源于中東，原因是全球家禽養(yǎng)殖業(yè)的商業(yè)化程度提高，以及鸚鵡國際貿(mào)易的加強(qiáng)，這次流行主要是由NDVV基因型、V基因型毒株引起的，主要危及觀賞鳥類和養(yǎng)殖鳥類。從1970年末到1980年發(fā)生在賽鴿中的第三次大流行被認(rèn)為是由NDVVI基因型毒株引起的，隨后蔓延到世界各地，并且由于賽鴿飼養(yǎng)管理相對簡單而導(dǎo)致疫情難以控制。第四次大流行始于1980 年后期，被認(rèn)為是由V基因型毒株引起的，本次流行至今仍在影響亞洲、非洲、歐洲和南美洲地區(qū)養(yǎng)殖業(yè)[6]

中國第一次暴發(fā)新城疫的時(shí)間幾乎與20世紀(jì)20年代的全球流行同步，但由于當(dāng)時(shí)流行病學(xué)研究滯后，直到1946年才被確定為新城疫，給中國家禽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失，當(dāng)時(shí)的代表毒株是F₄₈E₉^[2] 。新城疫病毒的持續(xù)監(jiān)測數(shù)據(jù)表明，基因型V型和VI型是中國當(dāng)前主要的流行毒株，也是導(dǎo)致大多數(shù)家禽暴發(fā)該疫病的主要原因，而基因型為V型、IX型和VI型的強(qiáng)毒株偶爾也有報(bào)道[7]。值得注意的是，鴿源新城疫病毒V基因型毒株可引起鴿發(fā)病，但對雞不表現(xiàn)出致病性，近年來在中國鴿群中分離到多株以VIb基因亞型為主的毒株，該亞型毒株具有明顯的宿主特異性，嚴(yán)重影響?zhàn)B鴿業(yè)發(fā)展[8-11]。VI基因型毒株主要在雞群和鵝群流行，根據(jù)更新的NDV亞型分類標(biāo)準(zhǔn)，V基因型毒株分為3組，分別為VI.1.1（原VIb，Vd，VIe，Vj和VI1）、VI.1.2（原VIf）和VII.2（原VIh，VIIi和VIk）[12]。根據(jù) Xiang等[8的研究發(fā)現(xiàn)，20世紀(jì)50年代中國東部是早期基因VII型NDV的起源地，1990年前后基因VI型NDV已由中國華東地區(qū)傳播至華南和西南地區(qū)，2011年以后，基因VII型NDV已在中國不同地區(qū)普遍流行，成為主要的流行毒株。

野生和家養(yǎng)鳥類在基因VII型NDV傳播和持續(xù)性感染中發(fā)揮著重要作用，但其傳播模式尚不清楚[12-13]。中國小型個(gè)體農(nóng)場的生物安全環(huán)境較差，雞和家養(yǎng)水禽是自由放養(yǎng)的，導(dǎo)致雞和水禽之間的病毒傳播頻繁[8]。野生鳥類和水禽被認(rèn)為是NDV的重要天然儲存宿主，感染NDV后缺乏明顯的疾病特征，并可能成為NDV向家禽傳播的載體，導(dǎo)致不同致病性ND暴發(fā)，特別是候鳥遷徙被認(rèn)為是NDV跨區(qū)域傳播的主要原因[13-16]。華中地區(qū)是中國大陸候鳥遷徙的重要中轉(zhuǎn)站，鳥類資源豐富，家禽養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達(dá)，是野生鳥類和家禽發(fā)生接觸傳播的重要區(qū)域[8]。Jia等[17]從華中地區(qū)野生禽和家禽連續(xù)病毒監(jiān)測中分離到140株NDV毒株，其中I類117株，為深入分析I類NDV的分子特征和進(jìn)化動(dòng)態(tài)提供了必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)從野生鳥類和家禽中分離到的NDV具有較高同源性和相似基因序列，表明病毒在不同宿主之間具有跨物種傳播能力。未來需要對多個(gè)地區(qū)活禽市場和野鳥進(jìn)行新城疫持續(xù)監(jiān)測，以增進(jìn)對I類病毒的了解，并預(yù)防和控制新城疫病毒新基因型的出現(xiàn)和暴發(fā)。目前ClassINDV主要在中國東部、西南和西北地區(qū)流行。且I型NDV一般為弱毒株，在雞中致病力較弱，主要在野生候鳥中傳播。NDV在野鳥體內(nèi)連續(xù)傳代可通過基因變異出現(xiàn)毒力增強(qiáng)現(xiàn)象，野生鳥類不斷傳入病毒嚴(yán)重威脅家禽養(yǎng)殖場的生物安全，因此建議規(guī)范疫苗使用，開發(fā)新的基因型疫苗，避免交叉污染養(yǎng)殖環(huán)境[17-22] 。

中國自2005年以來新城疫暴發(fā)次數(shù)、病例數(shù)和死亡數(shù)逐年下降，2005年發(fā)生新城疫疫情1257起，2019年僅報(bào)告發(fā)生11起。Wang等[20]于2011-2020年在中國開展了基于風(fēng)險(xiǎn)的NDV主動(dòng)監(jiān)測，在全國28個(gè)?。ㄊ校┻M(jìn)行樣品采集，共分離鑒定了2389株I類NDV，且病毒正逐漸從中國東南部向西北地區(qū)蔓延，這表明中國I類NDV侵染嚴(yán)重，并且侵染面擴(kuò)大。Jia等[17]發(fā)現(xiàn)家禽和野生鳥類之間的傳播可以加速I類新城疫病毒毒力的進(jìn)化，這可能會使弱毒力NDV逐漸突變?yōu)閺?qiáng)毒力NDV，并導(dǎo)致新基因型ND的暴發(fā)，危及農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)。胡秀美等[21]2018-2019年從疑似感染新城疫的家禽病料中分離鑒定出13株NDV毒株，并對 F 基因序列擴(kuò)增分析，發(fā)現(xiàn)7株屬于Ⅱ基因型毒株，5株屬于V基因型毒株，1株屬于ClassI亞型毒株，表明當(dāng)前中國部分地區(qū)的NDV毒株與傳統(tǒng)疫苗株之間存在較明顯的遺傳特征差異。 Yu 等[18]于2014-2021年利用活禽市場采集的鴿拭子進(jìn)行了基于風(fēng)險(xiǎn)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測，在中國12個(gè)省分離到76株鴿副黏病毒I型（PPMV-1）毒株，基于 F 基因全序列的系統(tǒng)發(fā)育分析表明，亞基因型VI.2.1.1.2.2中的PPMV-1毒株是中國鴿群中占流行優(yōu)勢的病毒，且8年來該病毒的變異相對較小。研究結(jié)果還明確了PPMV-1毒株在中國流行的遺傳和致病性特征，擴(kuò)展了對該病毒流行的認(rèn)識。劉華雷等[19]于2016年從廣西活禽市場的家鴨中分離到1株ClassI1c基因亞型NDV毒株，是中國第一次檢出基因VI型NDV。中國在2013-2021年野鳥流行病學(xué)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，從67個(gè)NDV分離株中選取26株進(jìn)行 F 基因進(jìn)化分析，結(jié)果均為弱毒株[22]。劉華雷等[23]于2010-2012年，通過主動(dòng)監(jiān)測在全國范圍分離并鑒定了6株XI基因型NDV毒株，首次發(fā)現(xiàn)XI基因型毒株是2010年從廣東省的鵝群中監(jiān)測到的，分離出的XI基因型NDV屬于XIIb 亞型，由于XIIb基因亞型毒株在中國仍存在一定流行風(fēng)險(xiǎn)，因此需要更廣泛、更深入獲取監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行研究。

持續(xù)進(jìn)行更加廣泛的流行病學(xué)監(jiān)測對于更好地了解NDV的流行病學(xué)和生態(tài)學(xué)特征是必要的，并且對于檢測基因VII型NDV毒株和控制ND暴發(fā)至關(guān)重要。另外，在ND預(yù)防和控制中，除了要做好V基因型毒株和V基因型毒株等中國已經(jīng)存在的基因型毒株的監(jiān)測、預(yù)防和控制工作外，更要做好應(yīng)對新基因型毒株出現(xiàn)的準(zhǔn)備，特別是對新出現(xiàn)的VI基因型毒株需要開展系統(tǒng)的研究，進(jìn)一步評估其診斷和檢測方法的效力，加大對新基因型NDV毒株的監(jiān)測范圍和監(jiān)測力度，預(yù)測分析其流行趨勢和擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)，對現(xiàn)有疫苗免疫效果進(jìn)行科學(xué)評估。

當(dāng)前，雖然新城疫對養(yǎng)雞業(yè)仍然構(gòu)成威脅，但隨著中國對該疫病全面免疫預(yù)防和控制策略的不斷深人，加上養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展規(guī)?；潭热找嫣岣撸袊鲁且叩牧餍械玫搅溯^好的控制，但野生禽類、水禽群體和環(huán)境中存在病毒污染，在局部地區(qū)仍呈現(xiàn)地方流行特點(diǎn)，疫苗接種雞群發(fā)生的病例多為輕癥和散發(fā)型，可能是免疫功能衰竭所致，非典型新城疫病癥和免疫帶毒現(xiàn)象長期存在[7]。流行毒株和疫苗株的抗原差異也導(dǎo)致了非典型新城疫病癥的長期存在，這對傳統(tǒng)疫苗的預(yù)防和控制是一個(gè)挑戰(zhàn)。主流基因型NDV的規(guī)模呈相對穩(wěn)定的趨勢，活禽交易可能在病毒傳播中起重要作用，NDV在家禽之間的遷移潛力最大，并從家禽向野生鳥類擴(kuò)散。監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，家禽中NDV強(qiáng)毒株帶毒率呈逐年下降趨勢，鴿群中NDV強(qiáng)毒株帶毒率較高，水禽中NDV強(qiáng)毒株帶毒率逐年明顯下降。NDV的多基因型毒株可共循環(huán)感染并引起暴發(fā)，而長期免疫壓力下的“輕癥新城疫”也可能為病毒的進(jìn)化提供條件，使病原具有多樣性，個(gè)別地區(qū)還出現(xiàn)了新的基因型毒株[24-25]。因此，繼續(xù)研究NDV在家禽中的流行病學(xué)傳播及其進(jìn)化動(dòng)態(tài)，可以更好地了解NDV進(jìn)化和遺傳學(xué)特征，并早期預(yù)警新基因型NDV的出現(xiàn)

2 新城疫病毒檢測方法

NDV的快速診斷對早期發(fā)現(xiàn)疫病和制訂控制措施具有重要意義，檢測方法一般包括病毒分離、血清學(xué)檢測（如血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、病毒中和試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)、免疫膠體金技術(shù)）、分子檢測（如逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、實(shí)時(shí)定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）等[26]。結(jié)合目前最新的研究成果本文對各種檢測方法進(jìn)行比較說明。

2.1 病毒分離

病毒分離是新城疫診斷的傳統(tǒng)金標(biāo)準(zhǔn)，這對于預(yù)測和控制ND的流行以及疫苗和藥物開發(fā)非常重要。NDV可以通過接種至SPF雞胚、雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）、雞胚腎細(xì)胞（CEK）進(jìn)行分離。需要無菌采集瀕死動(dòng)物的脾臟、腦、肺臟等組織或采集感染初期的呼吸道分離物（鼻咽拭子），添加一定量抗生素（青霉素100＼～500IU和鏈霉素 100～500IU ）的無菌生理鹽水，剪碎、研磨混合后，離心取上清液，得到接種樣品。對接種樣品進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，然后接種至9＼～10日齡的SPF雞胚絨毛尿囊腔或CEFs，如接種的是SPF雞胚，收集死亡超過 24h 的雞胚尿囊液進(jìn)行病毒鑒定；如接種的是CEFs，則置于 37^°C 培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，若出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），在接種24＼～48h，通過電鏡觀察將顆粒狀巨細(xì)胞快速從單層分離，然后收集細(xì)胞液進(jìn)行病毒鑒定。現(xiàn)實(shí)情況是，病毒分離比較費(fèi)力和耗時(shí)，不太適合在臨床試驗(yàn)中對大量樣品進(jìn)行檢測。

2.2 血清學(xué)檢測方法

NDV人侵禽類機(jī)體時(shí)能夠引起免疫應(yīng)答反應(yīng)，淋巴組織中的B細(xì)胞在抗原物質(zhì)的刺激下增殖并轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，漿細(xì)胞產(chǎn)生與同源抗原結(jié)合的免疫球蛋白。抗原抗體相互作用的關(guān)系是檢測NDV的重要依據(jù)。血清學(xué)檢測方法具有高度特異性和敏感性，在NDV早期發(fā)現(xiàn)和診斷方面尤為重要。目前，已建立了大量檢測NDV的血清學(xué)方法，并提出了一些常用的檢測策略，如血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、中和抗體試驗(yàn)（NT）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）和免疫膠體金技術(shù)（GICT）等。

2.3 分子檢測方法

由于NDV與其他同類病毒之間存在交叉反應(yīng)，影響NDV血清學(xué)檢測結(jié)果。因此，臨床實(shí)際應(yīng)用中需要建立分子水平的診斷方法來實(shí)現(xiàn)快速診斷和不同毒株的差異分析。

2.4NDV檢測方法的研究成果

Ji等[27]建立了以Fenobody為捕獲抗體，RAN-body為檢測抗體的夾心ELISA檢測方法，可以檢測不同的Ⅱ類NDV（LaSota ，F(xiàn)₄₈E₉ 和 Sx10 ），但不能檢測I類NDV，具有較好的特異性。Wang等[28]成功研制出HIV-Luc病毒，用于評價(jià)NDV的中和抗體。Li等[29]以膠體金標(biāo)記的HN單抗為反應(yīng)物，建立了一種免疫層析條檢測方法，結(jié)果顯示在出現(xiàn)臨床癥狀和出現(xiàn)大體病變之前，在感染組織中檢測NDV，其對NDV感染診斷的敏感性和特異性分別為83.3% 和 100.0% 。

Jestin 等[30]首次成功建立了RT-PCR方法來鑒定NDV。Yi等[31]基于核衣殼蛋白（NP）基因序列設(shè)計(jì)了一對與3種NDV病原體高度同源的引物，并建立了紅細(xì)胞吸附偶聯(lián)RT-PCR檢測方法，該方法靈敏度較高，適用于不同類型樣品中NDV的檢測。曹軍平等、王珂等均建立了可區(qū)分新城疫病毒強(qiáng)毒株和弱毒株的RT-PCR 檢測方法[32-33]。Wang 等[34]建立了一種逆轉(zhuǎn)錄重組酶輔助擴(kuò)增橫流試紙和實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄重組酶輔助擴(kuò)增方法，用于雞新城疫病毒的檢測;Liu 等[35]建立了一種qRT-PCR 方法，可以現(xiàn)場快速檢測NDV，在野外條件下采用便攜式T-COR4平臺進(jìn)行qRT-PCR檢測。徐敏麗等[3基于SYBRGreenI嵌合熒光技術(shù)建立的檢測方法能夠特異性擴(kuò)增NDV強(qiáng)毒株，用于臨床毒株的檢測結(jié)果與序列測定結(jié)果一致，可作為大規(guī)模監(jiān)測NDV強(qiáng)毒株的方法和工具。吳旭錦等[37對新城疫病毒國標(biāo)RT-PCR診斷方法進(jìn)行改進(jìn)和優(yōu)化，建立了一種靈敏度高、特異性好，能直接從組織病料中進(jìn)行目的基因檢測的 NDV 套式RT-PCR（nest RT-PCR，RT-nPCR）方法。Wise等[38]針對NDV F 基因和 M 基因片段設(shè)計(jì)了3對引物和探針，并建立了qRT-PCR檢測方法檢測NDV。王素春等[39]針對新城疫病毒M 基因序列，建立了能夠快速檢測新城疫病毒的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測方法，具有耗時(shí)短、特異性好、敏感性高的優(yōu)點(diǎn)。梅力等[40]以NDV F 基因?yàn)榘谢?，?gòu)建了NDV微滴式數(shù)字PCR方法，但需要精密儀器，對人員操作要求較高，檢測時(shí)間較qPCR更長，不能實(shí)現(xiàn)高通量檢測。Zhang等[41]建立了同時(shí)檢測禽流感病毒、新城疫病毒和鴨坦布蘇病毒的三重實(shí)時(shí) PCR 檢測方法，應(yīng)用效果較好。Zhang 等[42]建立了一種同時(shí)快速檢測速發(fā)型、中發(fā)型新城疫病毒和H5亞型禽流感病毒的多重實(shí)時(shí)PCR方法，實(shí)現(xiàn)了同時(shí)鑒別診斷不同毒力的毒株。

曾婷婷等[43]將分子信標(biāo)引入LAMP反應(yīng)體系，建立了鑒別不同毒力NDV的可視化雙重?zé)晒釸T-LAMP方法。 W_u 等[44]建立了一種多重LAMP和橫向流動(dòng)試紙同時(shí)可視化檢測傳染性支氣管炎病毒和新城疫病毒。Huang等[45]研制了一種新型電化學(xué)免疫傳感器，用于NDV的定量檢測，該免疫傳感器具有良好的重復(fù)性、選擇性、穩(wěn)定性和超高靈敏度，具有較大的應(yīng)用潛力。

多重?zé)晒舛縋CR檢測方法可以利用一次反應(yīng)同時(shí)檢測、鑒別多種病原體，在臨床混合感染的診斷上具有獨(dú)特優(yōu)勢和很高的實(shí)用價(jià)值[46]。該方法可分為熒光染料法和熒光探針法，熒光染料法主要使用的是SYBRGreenI染料，該染料無法與單鏈DNA結(jié)合，游離狀態(tài)下不發(fā)熒光信號，但它可以與雙鏈DNA結(jié)合并發(fā)出熒光信號，信號強(qiáng)度與DNA分子總數(shù)目成正比。但SYBRGreenI存在熒光度低、穩(wěn)定性差等缺點(diǎn)，因而出現(xiàn)了SYBRGreenER、PowerSYBR、EvaGreenTM等一些改良染料。熒光探針法（ TaqMan 技術(shù)）是高度特異的定量PCR技術(shù)，核心是利用Taq酶的 3^′5^′ 外切酶活性，切斷探針，產(chǎn)生熒光信號[46]。TaqMan 技術(shù)能夠準(zhǔn)確、可靠地進(jìn)行定量檢測，因此被廣泛應(yīng)用于人類及動(dòng)植物細(xì)菌、病毒檢測[47]。鑒于混合感染現(xiàn)象增加，敏感、特異和高通量檢測方法是當(dāng)前動(dòng)物疾病檢測中急需的，多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)在病原微生物的高通量檢測領(lǐng)域顯示出良好的應(yīng)用前景[48]。周瑩珊等[49]建立了一種多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)（MLPA），能夠快速區(qū)分AIVH9亞型、AIVH7亞型、AIVH5亞型、NDV、禽偏肺病毒（aMPV）、禽傳染性支氣管炎病毒（IBV）和禽傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）等7種禽呼吸道疾病病毒。張曼等[50]建立了區(qū)分禽流感病毒（AIV）、NDV和安卡拉病毒的多重PCR檢測方法。馮林[51]2020 年建立了H9N2 AIV、IBV 和 ILTV Taq-Man三重?zé)晒舛縋CR檢測方法，并取得了較好的臨床應(yīng)用效果。奉彬等[52]建立了鑒別NDV與其他禽類病毒（細(xì)小病毒、禽流感病毒）的多重PCR方法。鄭鳴等[53]基于AIVHN基因和NDV F 基因設(shè)計(jì)特異性探針，成功建立了AIV和NDV雙重環(huán)介導(dǎo)間接PCR檢測方法，適用于臨床上2種病原的快速鑒別診斷。由此可見，TaqManqRT-PCR方法為臨床癥狀相似病原微生物間準(zhǔn)確鑒定提供了有力支持。

3新城疫的綜合預(yù)防和控制

《國家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫指導(dǎo)意見（2022-2025年）》明確要求省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門可根據(jù)轄區(qū)內(nèi)動(dòng)物疫病流行情況，對新城疫等疫病實(shí)施強(qiáng)制免疫[54]。ND給全世界家禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，就目前的預(yù)防和控制措施而言，不僅要通過適當(dāng)?shù)囊呙缑庖?，也要結(jié)合嚴(yán)格的生物安全控制措施才能有效阻止NDV感染和傳播。

3.1撲殺

WOAH針對新城疫制定的《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》建議撲殺感染和可能存在接觸史的動(dòng)物，適當(dāng)處置尸體和所有動(dòng)物產(chǎn)品，實(shí)行隔離和限制運(yùn)輸。事實(shí)證明，大多數(shù)無ND的國家或地區(qū)通過撲殺、緊急消毒的辦法阻斷了疫情。

3.2生物安全管理措施

嚴(yán)格的生物安全管理措施和良好的衛(wèi)生習(xí)慣是預(yù)防和控制ND傳播的關(guān)鍵。生物安全管理主要通過隔離、衛(wèi)生控制和行動(dòng)控制3個(gè)方面實(shí)現(xiàn)。隔離感染疫病動(dòng)物和風(fēng)險(xiǎn)動(dòng)物，限制野生鳥類與家禽接觸，嚴(yán)格清潔消毒相關(guān)設(shè)施和運(yùn)輸車輛，嚴(yán)格管理和控制車輛、人員、家禽及產(chǎn)品的流動(dòng)。研究結(jié)果表明，野生禽類在ND的傳播過程中發(fā)揮著重要作用，也是家禽感染的主要傳染源，因此，規(guī)?；B(yǎng)禽場要重點(diǎn)關(guān)注野生鳥類攜帶NDV傳入風(fēng)險(xiǎn)。

開展流行病學(xué)監(jiān)測也是預(yù)防ND的重要手段之一，有助于早發(fā)現(xiàn)并及時(shí)采取預(yù)防和控制措施。王靜靜等在2016-2019年隨機(jī)從中國23個(gè)省（自治區(qū)、直轄市）采樣，通過采集口咽和泄殖腔拭子、野生鳥糞便和環(huán)境樣本進(jìn)行NDV檢測，結(jié)果表明，中國ClassINDV污染覆蓋面廣、感染宿主范圍較廣，需要加強(qiáng)防范。Xiang等8研究了Ⅱ類NDV在中國的進(jìn)化和傳播動(dòng)態(tài)，特別是基因VII型NDV毒株，結(jié)果顯示，東部和華南地區(qū)I類NDV基因型多樣性最高，華東地區(qū)可能是中國基因VI型NDV的起源地，而雞是基因VI型NDV的主要感染宿主。

3.3 疫苗接種

ND疫苗主要包括活疫苗、滅活疫苗和載體疫苗，使用最廣泛的是活疫苗B1和LaSota株，對家禽致病性較低，可產(chǎn)生有效的保護(hù)性免疫應(yīng)答。B1和LaSota疫苗均能在呼吸道產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)，B1一般作為首免疫苗。還有一種主要在腸道引起免疫反應(yīng)的活疫苗VG-GA株。群體活疫苗主要接種途徑是飲水免疫和噴霧免疫，個(gè)體主要是點(diǎn)眼、滴鼻等。滅活疫苗由于制備過程中為了增強(qiáng)免疫原性，經(jīng)常加有佐劑，會影響雞肉的品質(zhì)，因此不適用于肉雞。滅活疫苗主要在蛋雞和賽鴿中廣泛使用，可通過肌內(nèi)注射和皮下注射等途徑接種。目前有一些重組疫苗因?yàn)榇嬖诟鞣N缺陷未進(jìn)行大規(guī)模應(yīng)用，如HVT載體疫苗產(chǎn)生免疫反應(yīng)時(shí)間較長[55]。NDV具有高度傳染性且復(fù)制迅速，需要強(qiáng)大的免疫反應(yīng)完

全阻斷病毒的復(fù)制和傳播，因此只能通過活疫苗和先天免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫共同實(shí)現(xiàn)。B1和LaSota疫苗雖能減輕感染雞的臨床癥狀，降低死亡率，但不能完全阻斷病毒的復(fù)制和傳播，也不具有區(qū)分受感染雞和疫苗接種雞的遺傳標(biāo)記，影響NDV的群內(nèi)清除。世界范圍內(nèi)當(dāng)前流行NDV毒株屬于V基因型至V基因型毒株，與生產(chǎn)主流疫苗的毒株存在基因差異[56]。已經(jīng)有研究人員利用反向遺傳學(xué)開發(fā)出基因型匹配的ND活疫苗，但基因型匹配疫苗研究和生產(chǎn)需要較高的實(shí)驗(yàn)條件和大量的成本和時(shí)間，因此研究進(jìn)展緩慢。綜合來看，現(xiàn)有疫苗不能完全阻止病毒感染和傳播，開發(fā)更加高效的新型ND疫苗十分重要[57]

3.4單克隆抗體技術(shù)

單克隆抗體（Monoclonalantibody，mAb）被定義為能夠?qū)⒖乖Y(jié)合到特定表位的糖蛋白[58]。Kohler和Milstein最早發(fā)現(xiàn)并創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，對生物醫(yī)學(xué)有著深遠(yuǎn)影響[58]。最初，免疫球蛋白是通過重組DNA技術(shù)使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞從雜交瘤中產(chǎn)生的。盡管其具備更大生化相似性、更高穩(wěn)定性和更高表達(dá)水平等優(yōu)勢，被認(rèn)為是能夠大規(guī)模生產(chǎn)mAb的表達(dá)系統(tǒng)，但使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞意味著需要更長的生產(chǎn)周期，這會產(chǎn)生更高的成本。目前，主要用于mAb生產(chǎn)的表達(dá)系統(tǒng)是大腸桿菌，因?yàn)樯a(chǎn)快、成本更低，被廣泛用于科學(xué)研究和生物制藥行業(yè)[59]。在獸醫(yī)領(lǐng)域單克隆抗體主要應(yīng)用于免疫診斷試劑開發(fā)、抗原表位分子解析、疫苗的保護(hù)性免疫試驗(yàn)、傳染性疾病的免疫治療等方面，也可作為定位和靶向動(dòng)物腫瘤的工具[60]

單克隆抗體技術(shù)常被用于新城疫治療和診斷方面的研究。王賽楠[6]以NP蛋白單抗1E3為基礎(chǔ)，建立雙抗夾心ELISA方法，可快速區(qū)分NDV強(qiáng)毒株和弱毒株，為ND快速診斷和防疫決策提供了一種重要工具。任亭亭等[6]利用一株與疫苗株LaSota存在顯著抗原性差異的強(qiáng)毒株P(guān)I/CHINA/SD/2012/167制備成油乳劑疫苗對小鼠進(jìn)行免疫制備單克隆抗體，用ELISA檢測抗體對該強(qiáng)毒株及疫苗株LaSota的反應(yīng)性，為NDV的臨床鑒別檢測技術(shù)提供了研究基礎(chǔ)。金忠元[63]通過研究NDV，篩選獲得了NDV單抗V-CTD，并鑒定了單克隆抗體5C5可識別V蛋白的線性抗原表位，這為NDVV蛋白的功能研究提供了研究基礎(chǔ)。董靖[64]制備出一株穩(wěn)定分泌抗M蛋白單克隆抗體的細(xì)胞株，并發(fā)現(xiàn)病毒感染產(chǎn)生的M蛋白呈點(diǎn)狀分布于細(xì)胞核周圍以及細(xì)胞核內(nèi)，M蛋白進(jìn)人細(xì)胞核依賴于自身的NLS序列，為今后深入研究NDVM蛋白進(jìn)入細(xì)胞核的作用提供了基礎(chǔ)。劉青[65]通過研究制備了3株抗雞CT-LA-4蛋白的單克隆抗體，發(fā)現(xiàn)抗雞CTLA-4單克隆抗體能夠提高LaSota株疫苗的免疫效果。王明睿等[通過制備NDVNP蛋白的單克隆抗體，建立了一種可定量檢測新城疫病毒中NP抗原含量的雙抗體夾心ELISA檢測方法。

3.5益生菌對家禽免疫功能的影響和新城疫的預(yù)防和控制研究

Fuller[67]于1989年給出了益生菌最恰當(dāng)?shù)亩x，它是一種活微生物制劑，能維持動(dòng)物腸道內(nèi)菌群生態(tài)平衡并對機(jī)體產(chǎn)生有益作用，不包括死菌及代謝產(chǎn)物。益生菌近年來已廣泛應(yīng)用于動(dòng)物養(yǎng)殖行業(yè)，除了自身的抑菌功能外，有些益生菌會產(chǎn)生有益的代謝產(chǎn)物，包括乳酸、丙酸、細(xì)菌素等。乳酸、丙酸等屬于揮發(fā)性脂肪酸，可抑制腸道病原菌生長，促進(jìn)腸道營養(yǎng)吸收：細(xì)菌素大多屬于水溶性多肽類物質(zhì)，據(jù)研究乳酸菌可產(chǎn)生對革蘭氏陽性菌有抑制作用的細(xì)菌素，并產(chǎn)生一些酶，能夠降解腸道黏膜上皮細(xì)胞的特異性糖類，阻止病原菌和毒素的吸附和入侵。益生菌能通過對細(xì)胞免疫、體液免疫及胃腸道局部免疫系統(tǒng)產(chǎn)生促進(jìn)作用，進(jìn)而提高機(jī)體的免疫功能。益生菌的代謝產(chǎn)物（多肽、蛋白質(zhì)等）可以作為抗原物質(zhì)刺激腸道，促進(jìn)免疫器官生長發(fā)育[68]

研究結(jié)果表明雞消化道內(nèi)的菌群包括兩部分，一部分是有益菌群，另一部分是潛在致病菌群，兩者處于平衡狀態(tài)時(shí)可維持雞的腸道健康。正常菌群通過競爭排斥和產(chǎn)生部分代謝物來增強(qiáng)腸道抗病力。用益生菌制劑對有結(jié)腸炎的小鼠進(jìn)行飼喂，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其結(jié)腸上皮細(xì)胞屏障功能有明顯改善，腸黏膜中的促炎性細(xì)胞因子（TN VF-α，TNF-γ ）表達(dá)下調(diào)。黃海等[68]利用復(fù)合益生菌與腸道病毒進(jìn)行體外試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)合益生菌對腸道病毒有一定殺滅作用。王占鋒等[9]研究了幾株益生菌體外抗NDV作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)益生菌可直接破壞NDV，阻斷NDV感染細(xì)胞，抑制NDV增殖。李偉娜[從健康仔雞新鮮糞便中鑒定篩選出6株對NDV有明顯抑制作用的菌株，并研究了不同pH值、不同膽鹽處理后這6株菌株在體外抗病毒作用。邵悅[]研究了雛雞的局部黏膜免疫組織和局部體液產(chǎn)生 IgA，IgM，IgG 的細(xì)胞數(shù)量和產(chǎn)生含量的變化，揭示了益生菌的應(yīng)用和NDV強(qiáng)毒株對局部黏膜的體液免疫變化規(guī)律，益生菌不僅可以促進(jìn)局部黏膜組織生長發(fā)育，增強(qiáng)細(xì)胞增殖和分化功能，還可促進(jìn)雛雞消化道、呼吸道局部黏膜的體液免疫功能，增強(qiáng)對接種疫苗后的免疫應(yīng)答效應(yīng)，同時(shí)，通過促進(jìn)IL-7mRNA表達(dá)，增強(qiáng)了雞體對NDV強(qiáng)毒株的抵抗力。

Gu等[研究了蠟樣芽孢桿菌PAS38對肉仔雞脾臟的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，經(jīng)過脾臟和組織學(xué)切片相對重量比較發(fā)現(xiàn)，蠟樣芽孢桿菌PAS38可明顯促進(jìn)免疫器官發(fā)育，主要參與炎癥反應(yīng)的基因表達(dá)明顯下調(diào)。Meher等[73通過研究日本鶉接種新城疫疫苗和補(bǔ)充維生素C、益生菌和抗生素生長促進(jìn)劑后抗體滴度和淋巴器官重量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)添加維生素C和益生菌可提高日本鶉對NDV的抗體效價(jià)。Gonmei等[74]分別從印度阿薩姆邦土雞盲腸和空腸分離出兩株羅伊氏乳桿菌，研究其單獨(dú)飼喂和與益生菌聯(lián)合飼喂對NDV的免疫作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)單獨(dú)飼喂和聯(lián)合飼喂均能刺激宿主的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，顯著提高NDV抗體水平。

3.6中藥對家禽免疫功能的影響和對新城疫的預(yù)防和控制研究

許多中藥可作為免疫增強(qiáng)劑使用，能夠刺激雞體免疫系統(tǒng)，提高免疫細(xì)胞的生長及抗體產(chǎn)生。近年來，中藥在家禽病毒性疾病的預(yù)防和控制中應(yīng)用廣泛，特別是在用免疫方法抑制病毒病的預(yù)防和控制中有很好的效果[75]

研究結(jié)果表明，中藥可以通過直接作用于病毒，影響病毒吸附和增殖過程，也可以通過調(diào)節(jié)干擾素明顯增加機(jī)體的抗病毒能力。例如一些中藥（金銀花和黃芪等）能夠顯著提高抗氧化酶活性，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能，達(dá)到保護(hù)免疫細(xì)胞，促進(jìn)免疫器官發(fā)育的效果。孫波等7以黃芪多糖為材料研究其對免疫肉雞生長性能、肉雞腸道菌群和雞體免疫功能的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪多糖能夠促進(jìn)肉雞腸道有益菌繁殖，抑制腸道有害菌繁殖，提高免疫肉雞的NDV抗體水平。華詩卉等[將黃芪、紫錐菊、當(dāng)歸等中藥組方添加至雛雞日糧中，試驗(yàn)結(jié)果顯示NDV抗體水平顯著提高，同時(shí)促進(jìn)了雞免疫器官的發(fā)育，刺激雞脾淋巴細(xì)胞增殖，促進(jìn)IL-4和TNF α 的分泌。靳二輝等研究了中草藥（黃芪、金銀花、枸杞）作為添加劑在雞日糧中發(fā)揮的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同劑量的中藥添加劑可以促進(jìn)肉雞免疫器官的發(fā)育，提高雞體的血清免疫球蛋白、細(xì)胞因子和NDV抗體水平，增強(qiáng)了雞體的免疫功能。Wang等[79]研究并鑒定了對新城疫病毒具有抗病毒作用的中草藥，結(jié)果表明對NDV抑制作用最強(qiáng)的5種中草藥分別為藿香、野菊花、知母、黃芪、黃芩，設(shè)計(jì)的兩種配方能夠提高血清IgY滴度，降低發(fā)病率。Jia等[80]研究了中藥黃芩昔體外抗新城疫病毒的活性，采用MTT法研究了黃芩苷的細(xì)胞毒性和抗病毒活性，結(jié)果顯示，黃芩苷對雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）的最大安全質(zhì)量濃度為 1×2mg/mL 。黃芩苷可直接殺傷NDV，抑制NDV對CEF的感染，阻斷細(xì)胞內(nèi)NDV增殖。抑制了NDV感染的CEF的凋亡和NDV的擴(kuò)散，證明黃芩昔具有很強(qiáng)的抗新城疫病毒活性，并具有作為抗病毒藥物成分的潛力。

4展望

綜上所述，新城疫仍是嚴(yán)重威脅禽類健康的傳染病之一，暴發(fā)和流行后可造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)危及野生鳥類健康。近年來在中國雖然沒有大面積的疫病發(fā)生，但研究發(fā)現(xiàn)各種養(yǎng)殖環(huán)境和野生環(huán)境中病毒污染嚴(yán)重，存在野生禽類和家禽互相傳播增大的風(fēng)險(xiǎn)，并且呈現(xiàn)病毒在不同宿主之間具有溢出性、弱毒株向強(qiáng)毒株進(jìn)化的特點(diǎn)，新城疫也常常呈非典型癥狀長期存在于禽類群體中。因此，持續(xù)開展NDV的流行病學(xué)監(jiān)測仍具有重要意義，特別需要加強(qiáng)對野生禽類和水禽群體的監(jiān)測。同時(shí)研究部分益生菌、中草藥在提高雞群免疫水平和抗病毒作用上的潛在價(jià)值。

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（責(zé)任編輯：黃克玲）