超高效液相色譜-二極管陣列法測(cè)定水產(chǎn)品中環(huán)丙氨嗪殘留量的研究

Research on the Determination of Cymazine Residues in Aquatic Products by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Diametric Array Method

YAN Yanyang， ZHENG Cheng， CAI Jiaqi， XU Binhui， NI Weijun （Wenzhou Quality and Technology Testing Research Institution，Wenzhou 325oo0， China

Abstract： Using ultra-high performance liquid chromatography-diode array method to detect residual levels of cyclopropazine in aquatic products. The extraction was carried out with a solution of trichloroacetic acidacetonitrile，followed by purification on an MCX solid-phase extraction column and quantitative analysis with an ultra-high performance liquid chromatograph.The results showed that cyromazine had a good linear relationship R?0.999 ）in the concentration range of 0.05μg?mL^-1 to 2.00μg?mL^-1 . At three spiked levels of 10， 20μg?kg^-1 and 100μg?kg^-1. ，the average recovery rates were 86.5% to 95.9% ，and the relative standard deviationswere all less than 4% . This technique is characterized by high sensitivity，simplicity of operation，and good repeatability，making it suitable for the determination of cyromazine residues in aquatic products.

Keywords： ultra-high performance liquid chromatography-diode array detection; aquatic products; cyromazine： residues

環(huán)丙氨嗪（Cyromazine）的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，具有較強(qiáng)的親水性，是一種含氮雜環(huán)類親水性化合物，通過(guò)干擾昆蟲(chóng)的正常生理代謝，抑制昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育，從而達(dá)到殺滅昆蟲(chóng)的效果[1-2]。2002年原中國(guó)農(nóng)業(yè)部將環(huán)丙氨嗪批準(zhǔn)為三類新獸藥，廣泛用于控制植物葉面昆蟲(chóng)和動(dòng)物溉舍內(nèi)蠅蛆的生長(zhǎng)發(fā)育[3]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)丙氨嗪可能具有致癌性[4-5]。隨著農(nóng)業(yè)和畜禽養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，菜農(nóng)常在作物收獲期頻繁用藥，以控制花期病蟲(chóng)害[6-9]，進(jìn)而導(dǎo)致環(huán)丙氨嗪的使用滲入土壤并流入水環(huán)境中[10-12]；許多養(yǎng)殖戶為了減少養(yǎng)殖場(chǎng)的蚊蠅，把環(huán)丙氨嗪長(zhǎng)期應(yīng)用于動(dòng)物飼料中，導(dǎo)致外源性化合物通過(guò)糞便進(jìn)入水環(huán)境，進(jìn)而在水產(chǎn)品中殘留，并通過(guò)食物鏈影響人們的身體健康[13]。目前，環(huán)丙氨嗪殘留量的檢測(cè)主要集中在土壤、畜牧和飼料中[14-18]，而水產(chǎn)品中環(huán)丙氨嗪殘留量的檢測(cè)相對(duì)較少。因此，開(kāi)發(fā)一種準(zhǔn)確、靈敏的檢測(cè)方法以監(jiān)測(cè)水產(chǎn)品中環(huán)丙氨嗪的殘留水平顯得尤為重要。本文旨在建立一種基于超高效液相色譜儀測(cè)定水產(chǎn)品中環(huán)丙氨嗪殘留量的方法，為有效監(jiān)控水產(chǎn)品中環(huán)丙氨嗪藥物殘留提供簡(jiǎn)便、有效、快速的方法，杜絕水產(chǎn)品中存在的潛在風(fēng)險(xiǎn)，保障食品安全。

1材料與方法

1.1材料與試劑

黑魚(yú)，購(gòu)自菜市場(chǎng)；環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)品（ 1 000mg?L^-1 ），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、甲醇（分析純）、鹽酸（分析純）、乙酸銨（分析純）、乙酸（分析純）、氨水（分析純）和三氯乙酸（分析純），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；水為符合《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》（GB/T6682—2008）規(guī)定的一級(jí)水。

1.2儀器與設(shè)備

Agilent1290INFINITY超高效液相色譜儀、HILIC親水反應(yīng)離子交換色譜柱（ 150mm^×2.1mm 3.5μm ）、四元泵、二極管陣列檢測(cè)器和色譜柱恒溫裝置，安捷倫科技公司；電子分析天平，賽多利斯公司；SIGAMA3K15高速離心機(jī)，德國(guó)西格瑪；固相萃取裝置、 0.22μm 微孔濾膜，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；REEKO自動(dòng)氮吹儀，REEKO。

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密吸取環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)品溶液（ 1 000mg?L^-1 ）100μL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇（色譜純）定容至刻度線，得到質(zhì)量濃度為 10mg?L^-1 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。將 10mg?L^-1 的環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液依次稀釋成5個(gè)質(zhì)量濃度分別為0.05、0.20、0.40、 和2.00μg?mL^-1 的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

① 提取。稱取水產(chǎn)品試樣 5.0g （精確至±0.02g ），置于 50mL 離心管，加入提取液（三氯乙酸-乙腈溶液） 15mL ，高速均質(zhì)使樣品分散均勻，以5000r?min^-1 離心 5min ，取上清液于 100mL 玻璃管中，殘?jiān)性俅渭尤胩崛∫?10mL ，重復(fù)提取1次，合并上清液，于自動(dòng)氮吹儀 50^qC 水浴中氮吹至 1mL ，備用。 ② 凈化。固相萃取柱依次用甲醇 3mL ，水 3mL 活化，取備用液過(guò)柱，控制流速1mL?min^-1 。依次用甲醇 3mL 、 0.1mol?L^-1 鹽酸溶液3mL 、水 3mL 和甲醇 3mL 淋洗，抽干，用 5% 氨水甲醇溶液 5mL 洗脫。收集洗脫液，于 50^qC 氮吹干，用流動(dòng)相 1.0mL 溶解殘?jiān)?，渦旋 30s ， 0.22μm 微孔濾膜過(guò)濾，供超高效液相色譜儀測(cè)定。

1.5 色譜條件

色譜柱：HLIC親水反應(yīng)離子交換色譜柱（ 150mm^×2.1mm ， 3.5μm ）；流動(dòng)相：取 25mmol?L^-1 乙酸銨 40mL 用乙腈定容至 1000mL ；流速：0.3mL?min^-1 ；二極管陣列檢測(cè)波長(zhǎng)： 214nm ；進(jìn)樣 量： 20μL ；柱溫： 30^c ○

2 結(jié)果與分析

2.1檢測(cè)條件優(yōu)化

2.1.1 凈化柱的優(yōu)化

MCX柱是一種混合型陽(yáng)離子交換固相萃取小柱，通常用于提取和純化各種化合物，尤其是堿性化合物，其具有高比表面積和離子交換容量，能在廣泛的pH值范圍內(nèi)（pH值為 1～14 ）穩(wěn)定工作。SCX柱主要用于酸性化合物的分離，其特殊官能團(tuán)能有效吸附酸性物質(zhì)。HLB柱是一種帶有親水性和疏水性基團(tuán)聚合物的萃取柱，這種親水-疏水平衡的特性使得它能很好地適應(yīng)不同極性的溶質(zhì)分離。經(jīng)分析比較，HLB柱的回收率為 56.5% ，SCX柱的回收率為 84.7% ，MCX柱的回收率為 95.9% ，其回收率效果依次為HLB柱

2.1.2 色譜條件的優(yōu)化

液相色譜系統(tǒng)中的流動(dòng)相決定著目標(biāo)分析物的分離程度。本文分別研究了 C₁₈ 柱「流動(dòng)相為磷酸緩沖鹽-甲醇-乙腈（ 93：5：2? 或水-甲醇-乙醇胺（ 76：24：0.1） 1、氨基柱[流動(dòng)相為乙腈－水溶液（ 97：3 ）］和HLIC親水反應(yīng)離子交換色譜柱（流動(dòng)相為乙酸銨-乙腈溶液）作為色譜柱和流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，環(huán)丙氨嗪作為含氮雜環(huán)類親水性化合物，用HILIC親水反應(yīng)離子交換色譜柱（流動(dòng)相為乙酸銨-乙腈溶液）時(shí)，基線平穩(wěn)，目標(biāo)峰和雜質(zhì)峰分離效果最好，效果最佳，如圖1所示。

2.2 方法的建立

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以環(huán)丙氨嗪標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的濃度 （x） 為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的信號(hào)響應(yīng)值 （y） 為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為 y=665.83470x-2.38467 ， R²=0.99947 ，說(shuō)明環(huán)丙氨嗪濃度在 0.05～2.00μg?mL^-1 時(shí)，線性關(guān)系良好。

2.2.2 加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)

在陰性空白樣品中分別加入10、20、 100μg?kg^-1 這3個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表1可知，回收率為 86.5%～ 95.9% ，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于 4% ，說(shuō)明建立的方法有較好的精密度。

3結(jié)論

本方法采用三氯乙酸-乙腈溶液提取目標(biāo)物，經(jīng)MCX固相萃取柱去除雜質(zhì)，以乙酸銨-乙腈為流動(dòng)相，HLIC親水反應(yīng)離子交換柱作為色譜柱，能夠使樣品液相分析基線平穩(wěn)，有效分離目標(biāo)物和雜質(zhì)峰，得到線性（ R²=0.99947 ）、精密度、回收率（ 86.5%～95.9% ）均良好的檢測(cè)方法。

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