鈍葉草種質(zhì)資源分子標(biāo)記開發(fā)及遺傳多樣性研究

Abstract：To study the genetic diferences of Stenotaphrum helferi Munro ex Hock. F. from diferent geo graphical sources， . helferi accessions from diferent countries were used to analyze their genetic relationship by using PCR-based SRAP（Sequence related amplified polymorphism） molecular markers in this study. The results showed that 21 primer pairs from the original 1OO primer pairs were selected based on the polymor phism，clarity and reproducibility of the bands.A total of 161 bands were amplified by 21 primer pairs from 13 accessions with an average of 7 bands per primer pair，and 161 （ 1 0 0 . 0 0 % ）out of them were polymorphic. The genetic similarity co-effcient （GSC）among the 13 accessions ranged from O.4805 to 0.9286 with an average of O.6452. Cluster analysis conducted by the unweighted pair-group method with arithmetic average （UPGMA）separated the 13 accessions into 4 groups when the genetic similarity coefficient was 0.6930. Principal component analysis divided the 13 accesions into 5 groups.The results indicated that the genetic diversity of S. helferi accessions was rich，which laid a foundation forthe identification and evaluation of S.helferi accessions and molecular marker-assisted breeding.

Key words：Stenotaphrum helferi；SRAP ；Molecular makers；Genetic diversity

鈍葉草（Stenotaphrum helferi Munro ex Hock.F.）是禾本科鈍葉草屬的多年生草本植物，具有葡匐莖，蔓延性較強(qiáng)，主要分布在熱帶及亞熱帶地區(qū)，在中國主要生長于云南、廣西、廣東以及海南等地區(qū)1。由于其繁殖速度快、競爭能力強(qiáng)，具有較強(qiáng)的生命力，管理要求粗放，鈍葉草成為一種優(yōu)良的暖季型草坪草[2-3]。鈍葉草耐水淹[4]、耐蔭[5]、耐旱[6]、耐踐踏、繁殖能力及再生能力強(qiáng)[4-6]，在公路護(hù)坡、公園及小區(qū)綠化等各種草坪中應(yīng)用較為廣泛[7-9]

分子標(biāo)記是檢測遺傳多樣性的強(qiáng)有力技術(shù)，該技術(shù)不受組織器官、環(huán)境及基因是否表達(dá)的限制，具有多態(tài)性高，遺傳穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于植物的遺傳育種研究[10]。目前DNA分子標(biāo)記已達(dá)幾十種，以分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的標(biāo)記，如限制片段長度多態(tài)性標(biāo)記（Restriction fragment length polymorphism，RFLP）[；基于PCR技術(shù)的標(biāo)記，如隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA 標(biāo) 記（Random amplified polymorphic DNA，RAPD）、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性標(biāo)記（Amplified restric-tion fragment polymorphism，AFLP）、簡單序列重復(fù)（Simple sequence repeats，SSR）、簡單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增標(biāo)記（Inter-simple sequence repeat，ISSR）和特異性片段擴(kuò)增區(qū)域（Sequencecharacterized amplifiedregions，SCAR）等[12-15]；基于DNA序列的標(biāo)記，如轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal transcribed spacer，ITS）測序分析技術(shù)等；以DNA芯片技術(shù)為基礎(chǔ)的標(biāo)記，如單核苷酸多態(tài)性（Singlenucleotidepolymorphism，SNP）等。分子標(biāo)記技術(shù)在鈍葉草種質(zhì)資源的的分類、遺傳多樣性評(píng)價(jià)、種質(zhì)和品種的鑒定等方面1有應(yīng)用，但應(yīng)用相對較少。Kimball等[17]利用AFLP標(biāo)記檢測美國南部各草場的鈍葉草品種‘Raleigh'的遺傳變異情況。相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性標(biāo)記（Sequence related amplifiedpolymorphism，SRAP）是Li等[18]于20O1年開發(fā)的。在不同研究領(lǐng)域應(yīng)用的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SRAP分子標(biāo)記具有引物設(shè)計(jì)簡單、通用性較高、操作較靈活、簡便、快速、可顯示大量的共顯性標(biāo)記，易從序列中得到分離的條帶等優(yōu)越性，是一種適合用于種質(zhì)鑒定、遺傳多樣性研究以及分子標(biāo)記輔助育種的分子標(biāo)記[19-21]。但由于SRAP標(biāo)記是對ORF進(jìn)行擴(kuò)增，因而對基因相對較少的著絲粒附近以及端粒的擴(kuò)增會(huì)較少。目前，已在結(jié)縷草（Zoysia japonica Steud）以及假儉草［Eremochloa ophiuroides（Munro）Hack.]雜交后代真實(shí)性的鑒定22-23]、海雀稗（Paspalum uaginatum Sw.）及狗牙根[Cynodon dactylon（L.）Persoon][24-28]等種質(zhì)資源親緣關(guān)系研究等方面發(fā)揮著重要作用。

因此，鑒于SRAP標(biāo)記的具有通用性高，重復(fù)性好，擴(kuò)增簡單等優(yōu)良特性29，為了解不同地理來源的鈍葉草種質(zhì)資源間的遺傳差異，本研究利用SRAP分子標(biāo)記對鈍葉草種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性分析，分析不同地理來源的鈍葉草種質(zhì)資源的親緣關(guān)系，為鈍葉草種質(zhì)資源的鑒定評(píng)價(jià)及分子標(biāo)記輔助育種研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料選取2004—2014年從馬爾代夫、斯里蘭卡、哥斯達(dá)黎加、科特迪瓦、委內(nèi)瑞拉、澳大利亞及中國海南等地采集的13份野生鈍葉草種質(zhì)資源。種質(zhì)來源如表1所示，包括馬爾代夫的1份，斯里蘭卡的1份，哥斯達(dá)黎加的3份，科特迪瓦的2份，委內(nèi)瑞拉的1份，澳大利亞的1份，甘肅蘭州的2份，海南儋州的2份。

1. 2 試驗(yàn)方法

1.2.1DNA的提取及質(zhì)量檢測鈍葉草DNA的提取與產(chǎn)物質(zhì)量檢測參考黃春瓊等[30]的方法進(jìn)行。所提取的DNA經(jīng)檢測后將濃度稀釋到 ，存放于一 冰箱中。

1.2.2SRAP-PCR分析引物序列參考Huang等[27的引物序列，選取3份地理來源較遠(yuǎn)的鈍葉草種質(zhì)（科特迪瓦的S08、澳大利亞的S11和海南儋州的S12）對100對SRAP引物進(jìn)行檢測。從中篩選出多態(tài)性較高、重復(fù)性較好的引物，用于后續(xù)13份鈍葉草種質(zhì)的遺傳多樣性分析。SRAP-PCR反應(yīng)體系、擴(kuò)增程序以及產(chǎn)物的檢測參考Huang等2的方法進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

電泳檢測結(jié)果根據(jù)條帶的有無建立0-1矩陣。即相同引物，在電泳圖同一位置上有擴(kuò)增條帶的讀

為“1”，反之則讀為“0”，建立0-1矩陣數(shù)據(jù)庫。并通過NTSYS2.10e進(jìn)行聚類分析及主成分分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 DNA質(zhì)量檢測與分析

所提取的電泳圖上在同一位置上有一條明亮條帶，且?guī)驼R一致，無其他帶型（圖1）。DNA濃度、 及 測定結(jié)果如表2。由表2可知，DNA的濃度為 2 3 3 . 5 0 ～ 值為 值為 ，這一結(jié)果說明所提取的鈍葉草基因組DNA的濃度較高較純，符合后續(xù)試驗(yàn)要求。

2.2 引物的篩選

引物篩選結(jié)果見表3，從表3可知，篩選出了21對可用于后續(xù)研究的引物，引物擴(kuò)增片段范圍為50～1500bp。部分引物篩選的電泳圖見圖2，從圖2中可以看出，引物M3E10，M4E10，M5E10和M6E10分別在約 200 bp，800bp，900 bp及 處在3份鈍葉草種質(zhì)中有差異條帶。

2.3擴(kuò)增多態(tài)性分析

21對SRAP引物對13份鈍葉草種質(zhì)的多態(tài)性檢測結(jié)果見表4。從表4可知，21對引物共檢測出161條條帶，且均是多態(tài)性條帶，平均每對引物能檢測到7條條帶，多態(tài)性百分率為 100 . 0 0 % 。擴(kuò)增條帶數(shù)為 條，其中，擴(kuò)增條帶數(shù)最多（10條）的引物有2對，分別是M10E2和M5E10；而擴(kuò)增條帶數(shù)最少（4條）的引物有1對，為M6E10。圖3為引物M3E10對13份鈍葉草種質(zhì)的電泳檢測圖。

Fig.2Amplification results of parts of primer pairs among 3S.helferi accessions 注：M表示100 bp DNA Ladder Marker；引物依次是M1E10，M2E10，M3E10，M4E10，M5E10，M6E10，M7E10和M8E10 Note：Mindicates0ObpALadderMarker；TeprmerpairsiorderareE10，2E103E10，M4E10，5E10，6E10，M7Ed1

2.4特征帶與特征種質(zhì)鑒定

大部分鈍葉草種質(zhì)可以通過一些特征條帶加以快速鑒別（表5）。例如當(dāng)引物為M2E1分析時(shí)，來自委內(nèi)瑞拉的S10在 處擁有特征條帶，從而可以將其從供試種質(zhì)中快速鑒定出來。當(dāng)引物為M10E1時(shí)，來自馬爾代夫的S03分別在50，400bp處擁有特征條帶。當(dāng)引物為M2E2時(shí)，來自澳大利亞的S11在 處擁有特征條帶。而引物為M4E3時(shí)，來自委內(nèi)瑞拉的S10在1000bp處擁有特征條帶。依照此方法分析，總結(jié)供試種質(zhì)的特征條帶，總計(jì)19對引物組合在10份鈍葉草種質(zhì)中共產(chǎn)生了32條特征條帶。說明所篩選的引物大部分能將供試鈍葉草種質(zhì)區(qū)分開。從表5中明顯看出，來自委內(nèi)瑞拉的S10在大部分引物中能擁有自己的特征條帶，能快速從供試種質(zhì)中鑒定出。

2.5 遺傳相似性分析

13份鈍葉草種質(zhì)的遺傳相似性系數(shù)矩陣如表6所示，從表6可知，13份鈍葉草種質(zhì)間的遺傳相似性系數(shù)為 ，平均為0.6452。其中，來自科特迪瓦的S08和S09的遺傳相似性系數(shù)最大（0.9286），表明這2份種質(zhì)間的遺傳距離較近；而來哥斯達(dá)黎加的S02和來自委內(nèi)瑞拉的S10的遺傳相似性系數(shù)最?。?.4805），表明它們之間的遺傳距離較遠(yuǎn)。

2.6 聚類分析

13份鈍葉草種質(zhì)的聚類分析結(jié)果如圖4所示，從圖4中可以看出，13份鈍葉草種質(zhì)在遺傳相似性系數(shù)為0.6930時(shí)可劃分為4個(gè)類群。第I類群包括2份種質(zhì)，分別是來自哥斯達(dá)黎加的S01和來自海南瓊中的S04，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為

0.8247。第Ⅱ類群包括6份種質(zhì)，包括來自馬爾代夫的S03、斯里蘭卡的S06、科特迪瓦的S08和S09、哥斯達(dá)黎加的S07和澳大利亞的S11，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為 ，平均為0.8030。在遺傳相似性系數(shù)為0.7510時(shí)，該類群可分為2個(gè)亞類，第a亞類包括S03、S06、S08和S09共4份種質(zhì)，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為 0 . 8 8 3 1 ～ 0.9286，平均為0.9080，其中S08和S09之間的遺傳距離最近聚在一起，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為0.9286；第b亞類包括S07和S11，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為0.8312。第Ⅲ類群包括3份種質(zhì)，來自哥斯達(dá)黎加的S02、海南儋州的S12和海南瓊中的SO5種質(zhì)。它們之間的遺傳相似性系數(shù)為 。第Ⅳ類群包括來自委內(nèi)瑞拉的S10和海南儋州的S13種質(zhì)，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為0.7208。

2.7 主成分分析

基于遺傳相似性系數(shù)，利用NTSYS軟件對13份鈍葉草種質(zhì)進(jìn)行主成分分析，結(jié)果如圖5所示，從圖5可知，第一主成分、第二主成分和第三主成分值分別為 6 8 . 3 5 % ， 7 . 7 4 % 和 6 . 0 7 % 。主成分分析圖中位置靠近的材料表示它們之間親緣關(guān)系較近，反之則表示親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。將主成分分析圖中位置較近的鈍葉草種質(zhì)劃歸為1個(gè)類群，共得到5個(gè)主要類群。第一類群包括4份種質(zhì)，分別是來自馬爾代夫的S03、斯里蘭卡的S06、科特迪瓦的S08和S09。第二類群包括2份種質(zhì)，分別是來自哥斯達(dá)黎加的S07和澳大利亞的S11。第3類群包括3份種質(zhì)，分別是來自來自哥斯達(dá)黎加的S01、海南瓊中的S04及S05。第四類群包括2份種質(zhì)，分別是來自哥斯達(dá)黎加的S02及海南儋州的S12。第五類群包括2份種質(zhì)，分別是來自委內(nèi)瑞拉的S10和來自海南儋州的S13。

Kimball等[17]利用AFLP標(biāo)記對49份鈍葉草種質(zhì)資源進(jìn)行研究，共擴(kuò)增出1166條條帶，其中多態(tài)性條帶為143條，多態(tài)性比率 9 % 。以上研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)鈍葉草AFLP標(biāo)記的多態(tài)性比率低于本研究結(jié)果，這可能是由于所選標(biāo)記方法和研究對象不同所致。張延輝等[35]利用SRAP標(biāo)記對106份狗牙根［Cynodondactylon（L.）Persoon|遺傳多樣性分析發(fā)現(xiàn)多態(tài)性位點(diǎn)百分率為 9 2 . 5 % ，種質(zhì)間的遺傳相似系數(shù)為 ；周瑩潔等[36]利用SRAP標(biāo)記對31份野牛草[Buchloe dactyloides（Nutt.）Engelm.]進(jìn)行遺傳多態(tài)性分析中，多態(tài)性位點(diǎn)百分率為8 6 . 8 6 % ，遺傳相似系數(shù)為 。羅瑛[9]利用SRAP標(biāo)記對84份鈍葉草種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行研究，共擴(kuò)增出273條條帶，其中多態(tài)性條為267條，多態(tài)性條帶的比率為 9 7 . 8 0 % ，遺傳相似系數(shù)為 。羅瑛9利用ISSR標(biāo)記對84份鈍葉草種質(zhì)資源遺傳多樣性進(jìn)行研究，共擴(kuò)增出527條條帶，且均是多態(tài)性條帶，多態(tài)性比率為 100 % ，相似系數(shù)范圍值為 。與其他研究相比，本研究中的鈍葉草多態(tài)性比率（ 100 % 最高，與羅瑛9利用ISSR對鈍葉草種質(zhì)資源遺傳多樣性的研究一致。本研究的遺傳相似性系數(shù)范圍為 0 . 4 8 0 5 ～ 0.9286，與其他鈍葉草種質(zhì)資源遺傳多樣性研究相比，遺傳相似性系數(shù)范圍最大。這一研究現(xiàn)象可能與研究種質(zhì)的差異有關(guān)。本研究使用的材料來自7個(gè)不同國家和地區(qū)不同生境的鈍葉草種質(zhì)，種質(zhì)來源廣泛，種質(zhì)間地理差異明顯，所以表現(xiàn)出較高的遺傳多樣性。

3討論

早期鈍葉草種質(zhì)資源遺傳多樣性主要集中在植物學(xué)性狀如匍匐莖長度和柱頭顏色等[31-32]。葉繡珍等[33]對偏序鈍葉草［Stenotaphrumsecundatum（Walter）Kuntze]與地毯草［Axonopuscompressus（Sw.）Beauv.]的形態(tài)學(xué)進(jìn)行研究，結(jié)果表明偏序鈍葉草分枝數(shù)量及單株覆蓋面積比地毯草強(qiáng)，葉片較地毯草的長且厚；楊虎彪等34利用石蠟制片技術(shù)鑒定出鈍葉草為C4植物。分子標(biāo)記技術(shù)在鈍葉草種質(zhì)資源的分類、遺傳多樣性評(píng)價(jià)、鑒定等方面應(yīng)用相對較少。Milla-Lewis等[16]利用AFLP標(biāo)記對鈍葉草遺傳多樣性進(jìn)行研究，共擴(kuò)增1793條條帶，其中多態(tài)性條帶1524條，多態(tài)性比率為 8 5 % 。

本研究在對來自不同國家和地區(qū)的鈍葉草種質(zhì)進(jìn)行聚類分析，發(fā)現(xiàn)來自科特迪瓦的S08和S09聚在一起，它們之間的遺傳相似性系數(shù)為0.9286，說明它們的親緣關(guān)系最近。其中S08采自科特迪瓦阿西尼海邊，S09采自科特迪瓦阿比讓海邊，兩者均采集于科特迪瓦海邊，生境相似。這與黃春瓊等[37]利用SRAP分子標(biāo)記對45份結(jié)縷草屬（ZoysiaWilld.）種質(zhì)的遺傳多樣性研究得出的結(jié)論一致。同樣，宣繼萍等[38利用SSR標(biāo)記對結(jié)縷草屬58份種質(zhì)遺傳多樣性的研究也取得類似的結(jié)果。另外，聚類分析還發(fā)現(xiàn)來自海南瓊中的S05和S04并沒有聚在一類，這2份種質(zhì)的遺傳相似性系數(shù)是0.6364。其中S04是采自海南瓊中加叉農(nóng)場橡膠園路邊，S05是采自海南瓊中縣烏石農(nóng)場路邊。這一現(xiàn)象顯示聚類結(jié)果與地理來源并不總是緊密聯(lián)系，可能存在基因漂流等現(xiàn)象。陳斐等39利用SSR標(biāo)記對82份首蓿（MedicagosatiuaL.）種質(zhì)資源的研究、陳志祥等[40]利用SSR標(biāo)記對72份木豆[Cajanuscajan（L.）Millsp]種質(zhì)資源的研究以及伊然等41利用EST-SSR標(biāo)記對6O份葦狀羊茅（Festucaarundina-ceaSchreb.）遺傳多樣性研究同樣也發(fā)現(xiàn)聚類分析結(jié)果與地理來源不相關(guān)的現(xiàn)象。另外，本研究在聚類分析將13份種質(zhì)分為4個(gè)類群，主成分分析將其分為5個(gè)類群。主成分分析與聚類分析對種質(zhì)的劃分結(jié)果基本一致。主成分分析結(jié)果更直觀地從圖上表明了不同鈍葉草種質(zhì)之間的親緣關(guān)系。這兩種方法在聚類方面不同的是聚類分析將哥斯達(dá)黎加的S01、海南瓊中的S04聚為一類，哥斯達(dá)黎加的S02、海南儋州的S12、海南瓊中的S05聚為一類，而主成分分析將哥斯達(dá)黎加的S01、海南瓊中的S04、海南瓊中的S05聚為一個(gè)類群，哥斯達(dá)黎加的S02和海南儋州的S12聚為一個(gè)類群。雖然略微有差別，但他們之間的遺傳相似范圍一致，所包括的材料一致。此外，聚類分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同國家地域來源與聚類的關(guān)系不明顯，這一現(xiàn)象可能與所用種質(zhì)的數(shù)量有限有關(guān)。因此本研究并沒有很好的顯示出聚類與地理來源之間的直接聯(lián)系，后期需要增加種質(zhì)數(shù)量或者結(jié)合其他分子標(biāo)記手段進(jìn)行深入分析。

本研究在利用SRAP標(biāo)記在對13份鈍葉草種質(zhì)資源擴(kuò)增時(shí)發(fā)現(xiàn)，所篩選的21對引物中有19對引物能對10份鈍葉草種質(zhì)擴(kuò)增出32個(gè)特征指紋，從而使得這些種質(zhì)能快速從供試種質(zhì)中鑒定出來，說明SRAP標(biāo)記在鈍葉草種質(zhì)鑒定方面有良好的效果。另外，由于本研究所選擇的種質(zhì)是來自7個(gè)不同的國家和地區(qū)的，種質(zhì)間地理差異明顯，種質(zhì)間的遺傳多樣性豐富，從而利用SRAP標(biāo)記能快速從中區(qū)分開。

4結(jié)論

本研究利用SRAP標(biāo)記對13份鈍葉草種質(zhì)的遺傳多樣性進(jìn)行檢測。21對引物共檢測出161個(gè)標(biāo)記，且均是多態(tài)性標(biāo)記，可有效區(qū)分13份野生鈍葉草種質(zhì)，在遺傳相似性系數(shù)為0.6930時(shí)可將13份鈍葉草種質(zhì)劃分為4個(gè)類群。聚類分析與主成分分析對種質(zhì)的分類結(jié)果基本一致。本研究結(jié)果表明13份鈍葉草種質(zhì)的遺傳多樣性處于上等水平，

SRAP標(biāo)記能有效地評(píng)價(jià)鈍葉草種質(zhì)的遺傳差異。

參考文獻(xiàn)

[1］楊娟．遮蔭對鈍葉草屬植物形態(tài)與生理的影響[D].?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2020：6

[2］黃娟，夏漢平，楊冰冰．一種新的暖季型草坪草一鈍葉草[J].草原與草坪，2004，2：61-62

[3]KIMBALL JA，TUONG T D，ARELLANO C，et al. Link-age analysis and identification of quantitative trait loci associatedwith freeze tolerance and turf quality traits in St.Augustingrass[J].Molecular Breeding，2018，38（5）：1-16

[4］盧雪琴，夏漢平，彭長連．淹水對5種禾本科植物光合特性的影響[J].福建林學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，24（4）：374-378

[5］黃娟，夏漢平，蔡錫安．遮光處理對三種鈍葉草的生長習(xí)性與光合特性的影響[J].生態(tài)學(xué)雜志，2006，25（7）：759-764

[6］葛晉綱.高羊茅和鈍葉草對干旱脅迫的適應(yīng)性及生理響應(yīng)[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004：13

[7]WANG Z Y，RAYMER P B，CHEN Z. Isolation and charac-terization of microsatellite markers for Stenotaphrum Trin.Using 454 sequencingtechnology[J].HortScience，2O17，52（1）：16-19

[8]YU X W，KIMBALL JA，MILLA-LEWIS S R. High densitygenetic maps of St. Augustinegrass and applications to com-parative genomic analysis and QTL mapping for turf qualitytraits[J].BMC Plant Biology，2018，18（1） ：1-12

[9］羅瑛．鈍葉草種質(zhì)資源遺傳多樣性研究及評(píng)價(jià)[D].海口：海南大學(xué)，2018：7

[10］傅榮昭，李文彬．DNA分子診斷技術(shù)在植物研究中的應(yīng)用[J].高技術(shù)通訊，1994，4（2）：37-40

[11]YANESHITA M，KANEKO S，SASAKUMA T. Allotetra-ploidy of Zoysia species with based on a RFLP geneticmap[J].Theoretical and Applied Genetics，1999，98（5）：751-756

[12] GRATTAPAGLIA D，SEDEROFF R. Genetic linkage mapsof Eucalyptus grandis and Eucalyptus urophylla using a pseudo-testeross： Mapping strategy and RAPD markers[J]. Genetics，1994，137（4）：1121-1137

[13］郭海林，劉建秀，高鶴，等．結(jié)縷草屬優(yōu)良品系SSR指紋圖譜的構(gòu)建[J].草業(yè)學(xué)報(bào)，2007，16（2）：53-59

[14] WU Y G，GUO Q S，HE J C，et al. Genetic diversity analysisamong and within populationsof Pogostemon cablin from Chinawith ISSR and SRAP markers [J]. Biochemical Systematicsand Ecology，2010，38（1） ：63-72

[15] FERRIOL M，PICO B，NUEZ F. Genetic diversity of a germ-plasm collection of Cucurbita pepo using SRAP and AFLPmarkers[J].Theoretical and Applied Genetics，2Oo3，107（2）：271-282

[16]MILLA-LEWISSR，ZULETAMC，VANESBROECKGA，et al. Cytological and molecular characterization of geneticdiversity inStenotaphrum[J]．Crop Science，2013，53（1）：296-308

[17]KIMBALLJA，ZULETAMC，MARTINMC，etal.Assess-ment of molecular variation within‘raleigh’St.Augustine-grass using amplified fragment length polymorphism markers[J].Hortscience，2012，47（7）：839-844

[18]LI G，QUIROS C F.Sequence-related amplified polymorphism（SRAP），a new marker system based on a simple PCRreaction： its application to mapping and gene tagging in Brassica[J].Theoretical and Applied Genetics，200l，103（2）：455-461

[19]任羽，王得元，張銀東．相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（SRAP）一種新的分子標(biāo)記技術(shù)[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2004，20（6）：11-13，22

[20］樊洪泓，李廷春，邱婧，等．石斛屬幾種植物遺傳關(guān)系的SRAP和RAPD比較分析[J].中草藥，2010，41（4）：627-63

[21］陳麗靜，潘剛剛，何晶，等.用SRAP分子標(biāo)記鑒定玉米自交系的遺傳多樣性[J].四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，27（2）：148-152

[22]鄭軼琦，宗俊勤，薛丹丹，等．SRAP分子標(biāo)記在假儉草雜交后代真實(shí)性鑒定中的應(yīng)用[J].草地學(xué)報(bào)，2009，17（2）：135-140

[23］葉剛，張笑笑，陳靜波，等．結(jié)縷草屬植物雜交后代形態(tài)特征和SRAP分子標(biāo)記鑒定[J].草地學(xué)報(bào)，2021，29（7）：1406-1415

[24］劉燕，汪毅，馬晶晶，等．海雀稗 SRAP-PCR分子標(biāo)記體系優(yōu)化及引物篩選[J].草地學(xué)報(bào)，2016，24（5）：1080-1086

[25]WANGZ，LIAOL，YUANX，etal.Geneticrelationshipsofbermudagrass（Cynodondactylonvar.dactylon）from differ-entcountriesrevealed by sequence-related amplified polymorphism（SRAP） analysis[J]. African Journal of Biotechnology，2011，10（75）：17106-17115

[26]ZHANG X X，LI JJ，KAI W et al. Morphological characteris-tics and SRAP analysis of bermudagrass mutants generated by60Co-γ radiation[J].Journal of Radiation Research andApplied Sciences，2020，13（1）：657-664

[27]HUANGCQ，LIUGD，BAICJ，etal.Genetic analysis of430 Chinese Cynodon dactylon accessions using sequence-related amplified polymorphism markers[J].International Jour-nalofMolecular Sciences，2014，15（10）：19134-19146

[28]凌瑤，任秀梅，張新全，等.野生狗牙根種質(zhì)資源遺傳多樣性AFLP與SRAP聯(lián)合分析[J].中國草地學(xué)報(bào)，2014，36（2）：85-92

[29］鄒枚伶，夏志強(qiáng)，吉家敏，等.白木香SRAP-PCR反應(yīng)體系的建立[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2009，28（1）：137-140

[30]黃春瓊，劉國道.3種暖季型草坪草基因組DNA的提取方法[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2009，25（18）：417-419

[31]BUSEY P. Wilt avoidance in St. Augustinegrass germplasm[J].HortScience，1996，31（7）：1135-1138

[32]BUSEYP，BROSCHATK，CENTERBJ.ClassificationofSt.Augustinegrass[J].CropScience，1982，22（3）：469-473

[33]葉繡珍，徐向明，李煜，等．偏序鈍葉草（Stenotaphrumsecun-datum）與地毯草（Axonopuscompressus）營養(yǎng)器官特點(diǎn)的研究[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào)，1995，3（3）：50-55

[34]楊虎彪，李曉霞，虞道耿，等．海南具 解剖特征的禾本科植物[J].植物學(xué)報(bào)，2011，46（4）：456-469

[35]張延輝，李江華，孫強(qiáng)，等．106份狗牙根材料的SRAP分析[J].草原與草坪，2013，33（2）：1-10

[36」周瑩潔，王顯國，張新全.野牛草種質(zhì)基于SRAP標(biāo)記的遺傳多樣性研究[J].草業(yè)科學(xué)，2011，28（11）：1930-1935

[37]黃春瓊，劉國道，白昌軍，等．結(jié)縷草屬植物種質(zhì)資源遺傳變異研究[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2018，39（7）：1259-1265

[38]宣繼萍，周志芳，劉建秀，等.結(jié)縷草屬植物種間關(guān)系的SSR分析[J].西北植物學(xué)報(bào)，2008，28（2）：249-255

[39]陳斐，魏臻武，李偉民，等．基于SSR標(biāo)記的苜蓿種質(zhì)資源遺傳多樣性與群體結(jié)構(gòu)分析[J].草地學(xué)報(bào)，2013，21（4）：759-768

[40］陳志祥，羅小燕，李拴林，等．基于SSR標(biāo)記的木豆種質(zhì)資源遺傳多樣性與群體結(jié)構(gòu)分析[J].草地學(xué)報(bào)，2021，29（5）：904-911

[41]伊然，王子玥，劉凌云，等.基于EST-SSR標(biāo)記的6O份葦狀羊茅遺傳多樣性分析[J].草地學(xué)報(bào)，2023，31（7）：2041-2048

（責(zé)任編輯付宸）